青蒿和艾蒿花蕾组培再生技术研究
摘要：研究青蒿和艾蒿植物组培离体再生技术。以青蒿、艾蒿的花蕾为外植体，研究了不同植物生长调节剂和添加物对2种蒿属愈伤组织诱导、不定芽再生、增殖培养和生根培养4个阶段的影响。愈伤组织诱导阶段两蒿属植物的最佳培养基为青蒿花蕾MS+0.5 mg·L-1 NAA +1.0 mg·L-1 6-BA，艾蒿花蕾MS+0.5 mg·L-1 NAA +1.0 mg·L-1 6-BA。不定芽再生阶段两蒿属植物的最佳培养基均为MS+0.5 mg·L-1 NAA +1.0 mg·L-1 6-BA。增殖培养阶段两蒿属植物的最佳培养基为青蒿MS+0.3 mg·L-1 IBA +2.0 mg·L-1 6-BA，艾蒿MS+0.3 mg·L-1 IBA +1.0 mg·L-1 6-BA。生根培养阶段，以1/2 MS培养基为基本培养基，青蒿在IBA为0 mg·L-1和活性炭为0 g·L-1时表现最佳，艾蒿在IBA为0.4 mg·L-1和活性炭为0.5 g·L-1时表现最佳。两蒿属植物最适离体再生条件和再生效果受基因型差异影响明显，而活性炭对生根培养的作用具有两重性。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料及培养条件 2
1.2试验方法 2
1.2.1不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响2
1.2.2不同IBA和6BA质量浓度组合对蒿属植物带节茎段增殖的影响2
1.2.3不同质量浓度的IBA和活性炭组合对蒿属植物带叶茎段生根的影响2
1.3 数据处理 2
2结果与分析2
2.1不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响2
2.2不同IBA和6BA浓度组合对青蒿和艾蒿带节茎段增殖系数的影响 3
2.3不同质量浓度IBA和活性炭组合对青蒿和艾蒿带叶茎段生根的影响 4
3讨论 5
致谢6
参考文献6
附录8
青蒿和艾蒿花蕾组培再生技术研究
引言
蒿属（Ar
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
temisia）为菊科春黄菊族Anthemideae(Compositae)的一个大属，是我国种子植物中少有的大属，多为菊科一、二年生或多年生草本植物，少数为灌木或小灌木，是菊花的近缘属。全世界约300余种。我国有186种，44变种，分布遍及全国各地。蒿属植物多生长在自然条件恶劣的沙漠、高原、沿海滩涂地带，具有抗虫、抗病、抗逆等优良性状[12]。蒿属植物由于携带许多栽培菊花缺乏的优质基因，其野生种的收集、评价对栽培菊花的品种改良、抗性育种等研究非常重要。例如在王勇等[3]对水分胁迫与4种蒿属抗氧化特性相互关系的研究中，黄花蒿整体抗氧化能力强大。同时，蒿属植物也是进行菊科亲缘关系讨论和栽培菊花起源研究的重要材料。另外，蒿属植物还是医药、化工活性物质的代谢和作用机理及其提取工艺研究的重要研究对象，典型代表青蒿中的酰胺类化合物tripcoumaroylspermidine和倍半萜二聚体化合物caruifolins B对HIV1蛋白酶有抑制作用；而青蒿琥酯则可降低体内外炎性因子分泌，减轻内毒素诱导的炎症发生[4]。
植物组织培养的基础是植物细胞具有全能性，是指在无菌操作条件下，将离体的植物器官、组织、原生质体细胞或胚胎等，接种在人工配制的适宜培养基上进行培养，诱导植物组织或器官的生产，或产生完整的植株的技术[5]。生物技术在育种中的应用，可打破种间杂交的障碍，拓展遗传物质交流的范围，为种质创新提供更有利的措施，使品种改良方法现代化和高效化。目前，组织培养在甘蔗、菠萝、香蕉等经济作物上广泛应用，取用的外植体包括茎尖、侧芽、鳞片、叶片等。这种植物组织培养技术的繁殖作物快速，对于那些脱毒苗、新育成、濒危植物，以及基因工程植株等可通过离体快速繁殖，及时提供大量种质资源。
目前栽培菊花组织培养技术已较为成熟，利用芽尖[6]、叶柄[7]、叶片[89]、茎段[1011]、管状花[12]、花梗[13]等外植体和体细胞胚培养[13]实现植株再生的研究均已见报道，但其近缘野生种质的研究却相对薄弱，尚待解决的问题很多。本研究通过对青蒿、艾蒿2种蒿属植物进行花蕾组培再生技术研究，探究不同植物生长调节剂和添加物对蒿属植物再生体系建立的影响，从而寻找出最优体系的培养条件组合，为后期种质资源保存、突变体的离体筛选、遗传转化和克服远缘杂交障碍等研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料及培养条件
供试蒿属植物材料为青蒿（A. annua ‘Belgium’）和艾蒿（A. argyi），分别简写为QH、AH，均由大学中国菊花种质资源保存中心提供。
培养基均添加30 gL1蔗糖，7.0 gL1琼脂，pH为5.8，置于121℃灭菌20 min。试验材料在室温(25±2)℃，光周期16 h/d，光照度2 000~3 000 lx条件下培养。
1.2 试验方法
1.2.1 不同NAA和6BA质量浓度组合对蒿属花蕾外植体愈伤诱导和不定芽分化的影响
以青蒿和艾蒿为试材，采集自然条件下开放的饱满花蕾，消毒后对半切成1/2小块，接种到MS培养中，7 d后将生长正常、无污染的花蕾外植体转接到添加有不同质量浓度NAA和6BA组合的MS培养基中诱导愈伤组织的形成，统计愈伤组织诱导率。将生长状态良好的愈伤组织转接到同样的新鲜培养基中诱导不定芽发生，统计不定芽再生率。每处理接3个培养皿，每个培养皿接15个外植体，重复3次。
1.2.2 不同IBA和6BA质量浓度组合对蒿属植物带节茎段增殖的影响
以青蒿和艾蒿为试材，选取生长整齐健壮的无菌苗，切割成带1个节的茎段，接种到增殖培养基中诱导不定芽。每处理4瓶，每瓶接4个外植体，重复3次。培养40 d后统计增殖系数。增殖系数=增殖的新芽总数/存活的带节茎段总数。
1.2.3 不同质量浓度的IBA和活性炭组合对蒿属植物带叶茎段生根的影响
以青蒿和艾蒿为试材，选取生长整齐健壮的无菌苗，切割成带1片叶子的茎段，接种到生根培养基上进行生根诱导。每处理4瓶，每瓶接种4个外植体，重复3次。30 d后统计生根苗数及平均根数，测量根长，计算生根率。
1.3 数据处理
数据统计分析采用Microsoft excel 2013和IBM SPSS Statistics Version 20软件处理，多重比较采用Duncan氏检验法。
2 结果与分析
2.1 不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响
由表1可知：青蒿花蕾愈伤诱导的最适组合是NAA为0.5 mgL1和6BA为1.0 mgL1，诱导率显著高于其他组合。另外，在NAA为0.1 mgL1和6BA为1.0 mgL1与NAA为0.5 mgL1和6BA为3.0 mgL1时，青蒿愈伤组织诱导效果也较好。艾蒿花蕾在NAA为0.3 mgL1或0.5 mgL1，6BA为1.0 mgL1时愈伤组织诱导率均显著高于其他组合，而在NAA为0.5 mgL1和6BA为1.0 mgL1时愈伤组织诱导率达到最高。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料及培养条件 2
1.2试验方法 2
1.2.1不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响2
1.2.2不同IBA和6BA质量浓度组合对蒿属植物带节茎段增殖的影响2
1.2.3不同质量浓度的IBA和活性炭组合对蒿属植物带叶茎段生根的影响2
1.3 数据处理 2
2结果与分析2
2.1不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响2
2.2不同IBA和6BA浓度组合对青蒿和艾蒿带节茎段增殖系数的影响 3
2.3不同质量浓度IBA和活性炭组合对青蒿和艾蒿带叶茎段生根的影响 4
3讨论 5
致谢6
参考文献6
附录8
青蒿和艾蒿花蕾组培再生技术研究
引言
蒿属（Ar
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
temisia）为菊科春黄菊族Anthemideae(Compositae)的一个大属，是我国种子植物中少有的大属，多为菊科一、二年生或多年生草本植物，少数为灌木或小灌木，是菊花的近缘属。全世界约300余种。我国有186种，44变种，分布遍及全国各地。蒿属植物多生长在自然条件恶劣的沙漠、高原、沿海滩涂地带，具有抗虫、抗病、抗逆等优良性状[12]。蒿属植物由于携带许多栽培菊花缺乏的优质基因，其野生种的收集、评价对栽培菊花的品种改良、抗性育种等研究非常重要。例如在王勇等[3]对水分胁迫与4种蒿属抗氧化特性相互关系的研究中，黄花蒿整体抗氧化能力强大。同时，蒿属植物也是进行菊科亲缘关系讨论和栽培菊花起源研究的重要材料。另外，蒿属植物还是医药、化工活性物质的代谢和作用机理及其提取工艺研究的重要研究对象，典型代表青蒿中的酰胺类化合物tripcoumaroylspermidine和倍半萜二聚体化合物caruifolins B对HIV1蛋白酶有抑制作用；而青蒿琥酯则可降低体内外炎性因子分泌，减轻内毒素诱导的炎症发生[4]。
植物组织培养的基础是植物细胞具有全能性，是指在无菌操作条件下，将离体的植物器官、组织、原生质体细胞或胚胎等，接种在人工配制的适宜培养基上进行培养，诱导植物组织或器官的生产，或产生完整的植株的技术[5]。生物技术在育种中的应用，可打破种间杂交的障碍，拓展遗传物质交流的范围，为种质创新提供更有利的措施，使品种改良方法现代化和高效化。目前，组织培养在甘蔗、菠萝、香蕉等经济作物上广泛应用，取用的外植体包括茎尖、侧芽、鳞片、叶片等。这种植物组织培养技术的繁殖作物快速，对于那些脱毒苗、新育成、濒危植物，以及基因工程植株等可通过离体快速繁殖，及时提供大量种质资源。
目前栽培菊花组织培养技术已较为成熟，利用芽尖[6]、叶柄[7]、叶片[89]、茎段[1011]、管状花[12]、花梗[13]等外植体和体细胞胚培养[13]实现植株再生的研究均已见报道，但其近缘野生种质的研究却相对薄弱，尚待解决的问题很多。本研究通过对青蒿、艾蒿2种蒿属植物进行花蕾组培再生技术研究，探究不同植物生长调节剂和添加物对蒿属植物再生体系建立的影响，从而寻找出最优体系的培养条件组合，为后期种质资源保存、突变体的离体筛选、遗传转化和克服远缘杂交障碍等研究奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料及培养条件
供试蒿属植物材料为青蒿（A. annua ‘Belgium’）和艾蒿（A. argyi），分别简写为QH、AH，均由大学中国菊花种质资源保存中心提供。
培养基均添加30 gL1蔗糖，7.0 gL1琼脂，pH为5.8，置于121℃灭菌20 min。试验材料在室温(25±2)℃，光周期16 h/d，光照度2 000~3 000 lx条件下培养。
1.2 试验方法
1.2.1 不同NAA和6BA质量浓度组合对蒿属花蕾外植体愈伤诱导和不定芽分化的影响
以青蒿和艾蒿为试材，采集自然条件下开放的饱满花蕾，消毒后对半切成1/2小块，接种到MS培养中，7 d后将生长正常、无污染的花蕾外植体转接到添加有不同质量浓度NAA和6BA组合的MS培养基中诱导愈伤组织的形成，统计愈伤组织诱导率。将生长状态良好的愈伤组织转接到同样的新鲜培养基中诱导不定芽发生，统计不定芽再生率。每处理接3个培养皿，每个培养皿接15个外植体，重复3次。
1.2.2 不同IBA和6BA质量浓度组合对蒿属植物带节茎段增殖的影响
以青蒿和艾蒿为试材，选取生长整齐健壮的无菌苗，切割成带1个节的茎段，接种到增殖培养基中诱导不定芽。每处理4瓶，每瓶接4个外植体，重复3次。培养40 d后统计增殖系数。增殖系数=增殖的新芽总数/存活的带节茎段总数。
1.2.3 不同质量浓度的IBA和活性炭组合对蒿属植物带叶茎段生根的影响
以青蒿和艾蒿为试材，选取生长整齐健壮的无菌苗，切割成带1片叶子的茎段，接种到生根培养基上进行生根诱导。每处理4瓶，每瓶接种4个外植体，重复3次。30 d后统计生根苗数及平均根数，测量根长，计算生根率。
1.3 数据处理
数据统计分析采用Microsoft excel 2013和IBM SPSS Statistics Version 20软件处理，多重比较采用Duncan氏检验法。
2 结果与分析
2.1 不同NAA和6BA质量浓度组合对花蕾外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响
由表1可知：青蒿花蕾愈伤诱导的最适组合是NAA为0.5 mgL1和6BA为1.0 mgL1，诱导率显著高于其他组合。另外，在NAA为0.1 mgL1和6BA为1.0 mgL1与NAA为0.5 mgL1和6BA为3.0 mgL1时，青蒿愈伤组织诱导效果也较好。艾蒿花蕾在NAA为0.3 mgL1或0.5 mgL1，6BA为1.0 mgL1时愈伤组织诱导率均显著高于其他组合，而在NAA为0.5 mgL1和6BA为1.0 mgL1时愈伤组织诱导率达到最高。
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