君迁子组培快繁技术体系的建立
摘要: 本研究以君迁子1年生枝条上的休眠芽为外植体，研究建立了外植体培养、继代增殖培养和生根培养的技术体系。本研究主要研究结果:1.对君迁子1年生枝条上的休眠芽，使用双氧水消毒10 min后，然后升汞消毒10min的成活率是59%，外植体无褐化现象，成活率较高；2.研究不同浓度细胞分裂素与生长素对君迁子的生长发育、株高、增殖系数的影响。结果表明：激素ZT+IAA、ZT+IBA可促进君迁子组培苗的伸长生长和腋芽萌发，有利于腋芽扩繁增殖；3.添加不同浓度的IAA的培养基中生长的组培苗叶片绿色，茎杆粗壮，2/3的组培苗生根,适合用于君迁子生根的培养基。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1材料 2
1.2君迁子的继代培养 2
1.2.1 供试材料2
1.2.2 试验方法 2
1.3君迁子幼苗的生根培养 2
1.4君迁子的叶片再生培养2
1.4.1 试验材料2
1.4.2 不同培养基、TDZ、NAA和暗处理放置天数对君迁子叶片再生的影响2
1.5 培养条件2
1.6 数据分析方法2
2结果与分析2
2.1 君迁子的初代培养 3
2.2 君迁子的继代培养 3
2.3 君迁子的生根培养6
2.4 君迁子的叶片再生体系的建立6
3 讨论 7
致谢8
参考文献8
君迁子组培快繁技术体系的建立
引言
引言
柿组织培养过程中因其品种间差别较大且柿树含酚类物质较多，在离体繁殖过程中外植体极易褐变死亡，组培快繁体系的完整建立[1]较为困难。传统上主要采用油柿等优良砧木进行嫁接繁殖[2]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[3]。为进一步研究君迁子的生物学和遗传特性，必须建立起君迁子组培快繁技术体系和植株再生技术体系。因此在前人研究的基
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础上，本研究初步建立了君迁子的组培快繁体系，为快速获得大量苗木提供可能。同时，君迁子组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材料
君迁子枝条采自昆山市农业推广中心试验基地，为1年生枝条。处理休眠芽的方法是从枝条上切下剥去芽的外部23片鳞片，在肥皂水中洗涤芽23遍，流水冲洗休眠芽2小时以减轻表面微生物污染程度。
1.2君迁子的继代培养
1.2.1 供试材料 选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS的培养基中继代的君迁子组培苗作为增殖继代培养的材料。
1.2.2 试验方法
1.2.2.1 ZT对君迁子幼苗生长增殖的影响 将君迁子幼苗接种到含有0.5，1.0，2.0，5.0 ZT的（1/2N）MS培养基中生长一代后，统计君迁子幼苗的生长情况，比较ZT在君迁子幼苗增殖中的作用。
1.2.2.2 不同种类、浓度的生长素和细胞分裂素对君迁子生长的影响
选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS培养基中的君迁子幼苗作为继代材料。将组培苗的腋芽切下分别接入含有IAA (0.05,0.1,0.5 mg/L)+ZT(0.5,1.0,2.0,3.0mg/L);IAA0.10mg/L+6BA(0.5,1.0,2.0mg/L);IAA0.10mg/L+TDZ(0.5,1.0,2.0mg/L);IAA0.10mg/L+TDZ(0.5,1.0,2.0mg/L);ZT1.0mg/L+IAA(0.01,0.1,0.5mg/L);ZT1.0mg/L+IBA(0.01,0.1,0.5mg/L); ZT1.0mg/L+NAA(0.01,0.1,0.5mg/L)的（1/2N）MS培养基中，其中培养基中添加1.0 g/LPVP，每个处理25瓶，一个月后统计组培苗的生长高度及生长情况。
1.3君迁子幼苗的生根培养
选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS的培养基中继代培养6代的长势健壮，植株高度在20mm左右的君迁子用于生根实验。将组培苗分别接种在含有IAA0.1、0.5、1.0、3.0 mg/L；NAA0.1、0.5、1.0、3.0 mg/L的（1/2N）MS培养基中，其中添加1.0 g/LPVP，君迁子幼苗在暗处放置5天后再放到组培间，观察根的生长情况。
1.4君迁子的叶片再生培养
1.4.1 试验材料
继代培养58代长势健壮的君迁子组培苗第23片展开叶。
1.4.2 不同培养基、TDZ、NAA和暗处理放置天数对君迁子叶片再生的影响
将君迁子幼苗的绿色饱满的叶片切下，在培养皿中切成4mm×4mm左右的叶片，将叶片正面朝下放置在培养基中，每瓶68片切好的叶片。采用L9（34）正交实验设计其因素水平如表11.两个月后观察叶片愈伤形成及分化情况。
表11 L9（34）正交试验因素水平表
因素Factors
基本培养基
Medium
TDZ（mg/L）
NAA（mg/L）
暗培养（天）
Darkness
1
（1/2N）MS
1
0．1
7
2
1/2MS
3
0．2
14
3
MS
5
0．3
21
1.5 培养条件
试验所用培养基中蔗糖浓度为3%。琼脂浓度为0.65%，PVP（聚乙烯吡咯烷酮）1g/L,pH值5.75.8；培养基经过121℃（0.1050.12MPa）高温湿热灭菌15min,组培苗培养温度在25℃左右，光照时间为16h/d，在光照强度为15002000lx的白炽灯下培养。
1.6 数据分析方法
用SPSS20.0软件对试验数据进行统计分析。
2 结果与 分析
2.1 君迁子的初代培养
先将君迁子休眠芽放入75%酒精中30s进行表面消毒，分别用以下三种方法进行后续消毒处理：①君迁子的休眠芽用0.1％的升汞消毒10min的休眠芽虽然消毒效果好污染率较低，但是褐化严重，成活率仅为56％。(10％的双氧水对休眠芽进行消毒10min,20min（需不停晃动）的成活率分别为20％和35％，成活率低，褐化现象不明显。另外双氧水产生的活性氧还对君迁子的萌发，生长有促进作用。(用10％双氧水和0.1％升汞分别处理10min,成活率为59％。综合试验结果表明，君迁子休眠芽接种前消毒处理可采用酒精表面消毒30s，10％双氧水和0.1％升汞分别处理10min，最后采用无菌水冲洗3次，此方法对君迁子休眠芽效果较好，芽成活率较高。如图21所示。
图21 不同消毒处理对君迁子初代培养的影响
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1材料 2
1.2君迁子的继代培养 2
1.2.1 供试材料2
1.2.2 试验方法 2
1.3君迁子幼苗的生根培养 2
1.4君迁子的叶片再生培养2
1.4.1 试验材料2
1.4.2 不同培养基、TDZ、NAA和暗处理放置天数对君迁子叶片再生的影响2
1.5 培养条件2
1.6 数据分析方法2
2结果与分析2
2.1 君迁子的初代培养 3
2.2 君迁子的继代培养 3
2.3 君迁子的生根培养6
2.4 君迁子的叶片再生体系的建立6
3 讨论 7
致谢8
参考文献8
君迁子组培快繁技术体系的建立
引言
引言
柿组织培养过程中因其品种间差别较大且柿树含酚类物质较多，在离体繁殖过程中外植体极易褐变死亡，组培快繁体系的完整建立[1]较为困难。传统上主要采用油柿等优良砧木进行嫁接繁殖[2]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[3]。为进一步研究君迁子的生物学和遗传特性，必须建立起君迁子组培快繁技术体系和植株再生技术体系。因此在前人研究的基
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础上，本研究初步建立了君迁子的组培快繁体系，为快速获得大量苗木提供可能。同时，君迁子组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究奠定了基础。
1 材料与方法
1.1 材料
君迁子枝条采自昆山市农业推广中心试验基地，为1年生枝条。处理休眠芽的方法是从枝条上切下剥去芽的外部23片鳞片，在肥皂水中洗涤芽23遍，流水冲洗休眠芽2小时以减轻表面微生物污染程度。
1.2君迁子的继代培养
1.2.1 供试材料 选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS的培养基中继代的君迁子组培苗作为增殖继代培养的材料。
1.2.2 试验方法
1.2.2.1 ZT对君迁子幼苗生长增殖的影响 将君迁子幼苗接种到含有0.5，1.0，2.0，5.0 ZT的（1/2N）MS培养基中生长一代后，统计君迁子幼苗的生长情况，比较ZT在君迁子幼苗增殖中的作用。
1.2.2.2 不同种类、浓度的生长素和细胞分裂素对君迁子生长的影响
选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS培养基中的君迁子幼苗作为继代材料。将组培苗的腋芽切下分别接入含有IAA (0.05,0.1,0.5 mg/L)+ZT(0.5,1.0,2.0,3.0mg/L);IAA0.10mg/L+6BA(0.5,1.0,2.0mg/L);IAA0.10mg/L+TDZ(0.5,1.0,2.0mg/L);IAA0.10mg/L+TDZ(0.5,1.0,2.0mg/L);ZT1.0mg/L+IAA(0.01,0.1,0.5mg/L);ZT1.0mg/L+IBA(0.01,0.1,0.5mg/L); ZT1.0mg/L+NAA(0.01,0.1,0.5mg/L)的（1/2N）MS培养基中，其中培养基中添加1.0 g/LPVP，每个处理25瓶，一个月后统计组培苗的生长高度及生长情况。
1.3君迁子幼苗的生根培养
选取在ZT1.0 mg/L ＋IAA0.10 mg/L+（1/2N）MS的培养基中继代培养6代的长势健壮，植株高度在20mm左右的君迁子用于生根实验。将组培苗分别接种在含有IAA0.1、0.5、1.0、3.0 mg/L；NAA0.1、0.5、1.0、3.0 mg/L的（1/2N）MS培养基中，其中添加1.0 g/LPVP，君迁子幼苗在暗处放置5天后再放到组培间，观察根的生长情况。
1.4君迁子的叶片再生培养
1.4.1 试验材料
继代培养58代长势健壮的君迁子组培苗第23片展开叶。
1.4.2 不同培养基、TDZ、NAA和暗处理放置天数对君迁子叶片再生的影响
将君迁子幼苗的绿色饱满的叶片切下，在培养皿中切成4mm×4mm左右的叶片，将叶片正面朝下放置在培养基中，每瓶68片切好的叶片。采用L9（34）正交实验设计其因素水平如表11.两个月后观察叶片愈伤形成及分化情况。
表11 L9（34）正交试验因素水平表
因素Factors
基本培养基
Medium
TDZ（mg/L）
NAA（mg/L）
暗培养（天）
Darkness
1
（1/2N）MS
1
0．1
7
2
1/2MS
3
0．2
14
3
MS
5
0．3
21
1.5 培养条件
试验所用培养基中蔗糖浓度为3%。琼脂浓度为0.65%，PVP（聚乙烯吡咯烷酮）1g/L,pH值5.75.8；培养基经过121℃（0.1050.12MPa）高温湿热灭菌15min,组培苗培养温度在25℃左右，光照时间为16h/d，在光照强度为15002000lx的白炽灯下培养。
1.6 数据分析方法
用SPSS20.0软件对试验数据进行统计分析。
2 结果与 分析
2.1 君迁子的初代培养
先将君迁子休眠芽放入75%酒精中30s进行表面消毒，分别用以下三种方法进行后续消毒处理：①君迁子的休眠芽用0.1％的升汞消毒10min的休眠芽虽然消毒效果好污染率较低，但是褐化严重，成活率仅为56％。(10％的双氧水对休眠芽进行消毒10min,20min（需不停晃动）的成活率分别为20％和35％，成活率低，褐化现象不明显。另外双氧水产生的活性氧还对君迁子的萌发，生长有促进作用。(用10％双氧水和0.1％升汞分别处理10min,成活率为59％。综合试验结果表明，君迁子休眠芽接种前消毒处理可采用酒精表面消毒30s，10％双氧水和0.1％升汞分别处理10min，最后采用无菌水冲洗3次，此方法对君迁子休眠芽效果较好，芽成活率较高。如图21所示。
图21 不同消毒处理对君迁子初代培养的影响
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