安吉白茶返白期氨基酸含量的变化测定
安吉白茶是经无性繁殖培育而成的阶段性白化茶树新品种,具有氨基酸含量高和滋味鲜爽等品质特点,适合生产优质绿茶。目前对安吉白茶阶段性返白现象的研究已有报道，但对安吉白茶在返白期氨基酸含量的变化的研究很少。本课题研究的是安吉白茶在返白期间氨基酸含量的变化原因，主要通过检测茶叶中14种编码氨基酸和茶氨酸等15种氨基酸含量来探寻返白期哪几类氨基酸合成途径受阻，哪几类氨基酸合成途径增强，用以判断返白期突变引起何种途径的阻碍。主要结果如下采用印三酮比色法对安吉白茶阶段性返白期间的氨基酸总量检测,结果为3.151%-6.875%。采用氨基酸自动分析仪对安吉白茶阶段性返白期间的各种氨基酸含量检测，结果表明安吉白茶在白化期茶树叶片中的氨基酸含量有较大的变化，其中含量上升超过2倍的氨基酸主要有茶氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、组氨酸、苏氨酸，其中精氨酸白化期含量为265 mg/kg而复绿后变为30 mg/kg，白化期提高了8.833倍，含量变化超过1倍不到2倍的有甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、异亮氨酸，还有一些氨基酸含量下降，如苯丙氨酸、亮氨酸。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 材料2
1.1.2 仪器与设备2
1.1.3 试剂2
1.2 方法2
1.2.1茚三酮比色法测氨基酸总量2
1.2.2氨基酸自动分析仪法测各种氨基酸含量2
2 结果与分析3
3 讨论 4
参考文献5
安吉白茶返白期氨基酸含量的变化测定
引言
引言
1材料与方法
1.1材料
1．1．1 材料
安吉白茶取于宜兴茶园的茶树标本，于3月末至5月初间根据茶树自然生长条件下叶片颜色的变化，分别取返白前期，白化最盛期，复绿初期，复绿后期以及复绿后，这五个不同时期的安吉白茶样品，保存于80℃条件下，干燥处理后，用作氨基酸含量的测定。下图是实验样品返白前、白化期及复绿后的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
照片：
图1 a:返白前期；b:白化最盛期；c:复绿期
1．1．2 仪器与设备
HITACHI835 50 氨基酸自动分析仪, LA 230S 型电子天平, HYG回转式振荡器。
1．1．3 试剂
天冬氨酸( ASP) 、苏氨酸(THR) 、丝氨酸( SER) 、谷氨酸 ( GLU ) 、甘氨酸( GLY) 、丙氨酸 ( ALA) 、缬氨酸( VAL) 、异亮氨酸( ILE) 、酪氨酸( TYR) 、苯丙氨酸( PHE) 、赖氨酸 (LYS) 、组氨酸(HIF) 、精氨酸( ARG) 和 亮氨酸(LEU) 均为生化试剂； 盐酸、氢氧化钠、醋酸铅和草酸钾； 茚三酮、氨水和柠檬酸钠。
1.2方法
溶液的配制： (1) 缓冲液。准确称取19.600g 柠檬酸钠, 加少量蒸馏水溶解后, 再加入16.5mL( 10mol/ L) 浓盐酸和1.0g苯酚, 混匀, 倾入1L 容量瓶中, 用蒸馏水定容, 摇匀, 用G4 砂芯漏斗过滤, 滤液备用。(2) 茚三酮溶液。准确称取 5. 000g 茚三酮, 溶于 100mL 蒸馏水中, 倾入 250mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容, 摇匀, 用G4 砂芯漏斗过滤, 滤液备用。 (3) 氨基酸储备液。准确称取 0. 500g 各种氨基酸 标样, 转移至 100mL 容量瓶中, 用 1% ( 质量分数) 稀盐酸定容至刻度, 摇匀, 储于0~ 5e 的冰箱内备用。
1．2．1茚三酮比色法测氨基酸总含量
成品茶样经粉碎过40目（0.45mm）筛，称取样品3g茶样用400ml沸蒸馏水冲泡，置于100℃恒温水浴锅中浸提30min后抽滤定容至500ml，而后用茚三酮比色法测定氨基酸总含量。
1．2．2氨基酸自动分析仪法测各种氨基酸含量
将茶样初步粉碎, 再用研磨机粉碎, 过40目筛, 分别装入磨砂广口瓶中。准确称取 1. 000g 茶末置于150mL碘量瓶中, 加入15mL 1% 稀盐酸,于 HYG回转式振荡器中 25℃下振荡 1h, 置于0~5e 的冰箱内过夜( 使游离氨基酸充分溶出) , 取出, 转入 25mL 离心管中, 离心分离( 3000转/ min) 15min, 上层液用 G4 砂芯漏斗过滤, 然后向滤液中加入 8mL 20% 醋酸铅溶液 ( 除去溶解的蛋白质) , 并摇动溶液加速沉淀, 过滤, 滤 液接收于 250mL 三角瓶中, 滴加 20%( 质量分数) 草酸钾溶液( 以除去过量的醋酸铅) 至不再有沉淀出现, 过滤, 所得滤液中加入 1mL(0. 6000mg/L) 正亮氨酸(内标) 的1%HCl 溶液, 用氨基酸自动分析仪进行分析。根据与标样物比较相对保留时间和加入标样使峰增高法进行定性, 采用内标和标准曲线法进行定量。
2 结果与分析
由图2可知，安吉白茶在白化期茶树叶片中的氨基酸含量有较大的变化，其中含量上升超过2倍的氨基酸主要有茶氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、组氨酸、苏氨酸，其中精氨酸白化期含量为265 mg/kg而复绿后变为30 mg/kg，白化期提高了8.833倍，含量变化超过1倍不到2倍的有甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、异亮氨酸，还有一些氨基酸含量下降，如苯丙氨酸、亮氨酸。
图2 安吉自茶返白过程中的各种氨基酸组分变化和氨基酸总量变化
安吉白茶在整个返白过程中，氨基酸总量的变化与色素总量的变化相反，随白化程度的加深和色素总量的降低而快速升高，而在复绿过程中又随色素含量的升高而逐渐降低。最白期氨基酸总量达到最高峰。
15种游离氨基酸组分和含量的动态分析结果表明，在返白和复绿过程中它们的变化不但明显，而且有别于一般茶树新梢氨基酸的变化规律，表现为:(A)白化期含量明显上升，复绿期及复绿后明显下降，如THE,ASP,GLU ,GLY,,HIS,ALA和ARG;(B)白化期明显上升，复绿期明显下降，完全复绿后又明显回升，如LYS, TYR, PHE,SER和VAL; (C)白化期变化不甚明显,但复绿期明显下降，完全复绿后又有回升，如ILE, LEU和THR。
3 讨论
氨基酸在植物体内的合成途径与糖酵解途径(EMP)、三羧酸循环(TCA)、磷酸戊糖途径(HMP)及等密切相关，按照来源分为以下几类：一是来源于三羧酸循环中α酮戊二酸，如Glu，谷氨酰胺（Gln），精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys）等，二是来源于三羧酸循环中的草酰乙酸，如天冬氨酸（Asp）和天冬酰胺（Asn）等，第三类来源于丙酮酸，如Ala，亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val）等，第四类来源于三磷酸甘油酸，主要有甘氨酸（Gly），丝氨酸（Ser）和半胱氨酸（Cys）等，第五类来源于5磷酸核糖焦磷酸，主要有组氨酸（His），最后一类来源于磷酸戊糖途径中产生的赤藓糖4磷酸(E4P)和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP），主要有Phe，酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）。而茶树里特有氨基酸茶氨酸，其生物合成途径为 Ala的代谢物乙胺和Glu在茶氨酸合成酶的作用下合成。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 材料2
1.1.2 仪器与设备2
1.1.3 试剂2
1.2 方法2
1.2.1茚三酮比色法测氨基酸总量2
1.2.2氨基酸自动分析仪法测各种氨基酸含量2
2 结果与分析3
3 讨论 4
参考文献5
安吉白茶返白期氨基酸含量的变化测定
引言
引言
1材料与方法
1.1材料
1．1．1 材料
安吉白茶取于宜兴茶园的茶树标本，于3月末至5月初间根据茶树自然生长条件下叶片颜色的变化，分别取返白前期，白化最盛期，复绿初期，复绿后期以及复绿后，这五个不同时期的安吉白茶样品，保存于80℃条件下，干燥处理后，用作氨基酸含量的测定。下图是实验样品返白前、白化期及复绿后的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
照片：
图1 a:返白前期；b:白化最盛期；c:复绿期
1．1．2 仪器与设备
HITACHI835 50 氨基酸自动分析仪, LA 230S 型电子天平, HYG回转式振荡器。
1．1．3 试剂
天冬氨酸( ASP) 、苏氨酸(THR) 、丝氨酸( SER) 、谷氨酸 ( GLU ) 、甘氨酸( GLY) 、丙氨酸 ( ALA) 、缬氨酸( VAL) 、异亮氨酸( ILE) 、酪氨酸( TYR) 、苯丙氨酸( PHE) 、赖氨酸 (LYS) 、组氨酸(HIF) 、精氨酸( ARG) 和 亮氨酸(LEU) 均为生化试剂； 盐酸、氢氧化钠、醋酸铅和草酸钾； 茚三酮、氨水和柠檬酸钠。
1.2方法
溶液的配制： (1) 缓冲液。准确称取19.600g 柠檬酸钠, 加少量蒸馏水溶解后, 再加入16.5mL( 10mol/ L) 浓盐酸和1.0g苯酚, 混匀, 倾入1L 容量瓶中, 用蒸馏水定容, 摇匀, 用G4 砂芯漏斗过滤, 滤液备用。(2) 茚三酮溶液。准确称取 5. 000g 茚三酮, 溶于 100mL 蒸馏水中, 倾入 250mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容, 摇匀, 用G4 砂芯漏斗过滤, 滤液备用。 (3) 氨基酸储备液。准确称取 0. 500g 各种氨基酸 标样, 转移至 100mL 容量瓶中, 用 1% ( 质量分数) 稀盐酸定容至刻度, 摇匀, 储于0~ 5e 的冰箱内备用。
1．2．1茚三酮比色法测氨基酸总含量
成品茶样经粉碎过40目（0.45mm）筛，称取样品3g茶样用400ml沸蒸馏水冲泡，置于100℃恒温水浴锅中浸提30min后抽滤定容至500ml，而后用茚三酮比色法测定氨基酸总含量。
1．2．2氨基酸自动分析仪法测各种氨基酸含量
将茶样初步粉碎, 再用研磨机粉碎, 过40目筛, 分别装入磨砂广口瓶中。准确称取 1. 000g 茶末置于150mL碘量瓶中, 加入15mL 1% 稀盐酸,于 HYG回转式振荡器中 25℃下振荡 1h, 置于0~5e 的冰箱内过夜( 使游离氨基酸充分溶出) , 取出, 转入 25mL 离心管中, 离心分离( 3000转/ min) 15min, 上层液用 G4 砂芯漏斗过滤, 然后向滤液中加入 8mL 20% 醋酸铅溶液 ( 除去溶解的蛋白质) , 并摇动溶液加速沉淀, 过滤, 滤 液接收于 250mL 三角瓶中, 滴加 20%( 质量分数) 草酸钾溶液( 以除去过量的醋酸铅) 至不再有沉淀出现, 过滤, 所得滤液中加入 1mL(0. 6000mg/L) 正亮氨酸(内标) 的1%HCl 溶液, 用氨基酸自动分析仪进行分析。根据与标样物比较相对保留时间和加入标样使峰增高法进行定性, 采用内标和标准曲线法进行定量。
2 结果与分析
由图2可知，安吉白茶在白化期茶树叶片中的氨基酸含量有较大的变化，其中含量上升超过2倍的氨基酸主要有茶氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、组氨酸、苏氨酸，其中精氨酸白化期含量为265 mg/kg而复绿后变为30 mg/kg，白化期提高了8.833倍，含量变化超过1倍不到2倍的有甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、异亮氨酸，还有一些氨基酸含量下降，如苯丙氨酸、亮氨酸。
图2 安吉自茶返白过程中的各种氨基酸组分变化和氨基酸总量变化
安吉白茶在整个返白过程中，氨基酸总量的变化与色素总量的变化相反，随白化程度的加深和色素总量的降低而快速升高，而在复绿过程中又随色素含量的升高而逐渐降低。最白期氨基酸总量达到最高峰。
15种游离氨基酸组分和含量的动态分析结果表明，在返白和复绿过程中它们的变化不但明显，而且有别于一般茶树新梢氨基酸的变化规律，表现为:(A)白化期含量明显上升，复绿期及复绿后明显下降，如THE,ASP,GLU ,GLY,,HIS,ALA和ARG;(B)白化期明显上升，复绿期明显下降，完全复绿后又明显回升，如LYS, TYR, PHE,SER和VAL; (C)白化期变化不甚明显,但复绿期明显下降，完全复绿后又有回升，如ILE, LEU和THR。
3 讨论
氨基酸在植物体内的合成途径与糖酵解途径(EMP)、三羧酸循环(TCA)、磷酸戊糖途径(HMP)及等密切相关，按照来源分为以下几类：一是来源于三羧酸循环中α酮戊二酸，如Glu，谷氨酰胺（Gln），精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys）等，二是来源于三羧酸循环中的草酰乙酸，如天冬氨酸（Asp）和天冬酰胺（Asn）等，第三类来源于丙酮酸，如Ala，亮氨酸（Leu）和缬氨酸（Val）等，第四类来源于三磷酸甘油酸，主要有甘氨酸（Gly），丝氨酸（Ser）和半胱氨酸（Cys）等，第五类来源于5磷酸核糖焦磷酸，主要有组氨酸（His），最后一类来源于磷酸戊糖途径中产生的赤藓糖4磷酸(E4P)和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP），主要有Phe，酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）。而茶树里特有氨基酸茶氨酸，其生物合成途径为 Ala的代谢物乙胺和Glu在茶氨酸合成酶的作用下合成。
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