不同梨品种继代培养技术的优化和建立
摘要：为了优化梨继代培养技术体系，探索出最佳的继代培养基使得梨组培苗获得较短的继代周期和较高的芽增殖率，从而为建立高效、稳定的梨再生和转化体系奠定基础。本试验以鸭梨、翠冠梨、京白梨、雪花梨这四个基因型的梨品种为研究对象，将其接种到含不同浓度配比的植物生长素IBA与细胞分裂素6-BA的继代培养基中，培养一段时间后统计其芽增殖率，植株高度。试验结果表明，鸭梨的最佳继代培养基为：MS + 0.44mg/L IBA+1.5mg/L 6-BA+ + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂，其芽平均增殖率为4.33，植株高度为2.27cm；翠冠梨的最佳继代培养基为：MS + 0.3mg/L IBA+1.0mg/L 6-BA+ + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂,其芽平均增殖率为5.67,植株高度为2.3cm；京白梨的最佳培养基为：MS +0.3mg/L IBA+1.5mg/L 6-BA+ + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂,其芽平均增殖率为6.33，植株高度为1.8cm；雪花梨的最佳继代培养基为：MS +0.3mg/L IBA+1.0mg/L 6-BA+ + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂,其芽平均增殖率为5.33，植株高度为2.33cm。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1材料与方法2
1.1试验时间与地点2
1.2材料 2
1.3方法 2
1.3.1培养基2
1.3.2外植体的制备2
1.3.3无菌苗的获得2
1.3.4无菌苗的增殖2
1.3.5调查统计指标3
1.3.6数据处理方法3
2结果与分析3
2.1继代培养天数对梨组培苗增殖和生长的影响3
2.2不同激素配比对不同品种梨组培苗增殖和生长的影响4
3讨论 4
致谢5
参考文献5
不同梨品种继代培养技术的优化和建立
引言
引言
中国是梨的原生地，也是东方梨的分化中心,白梨、砂梨、秋子梨和新疆梨均起源于中国
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
。本次的实验材料雪花梨和鸭梨属于白梨的地方品种，雪花梨为河北定县的主要栽培良种，鸭梨是河北省的古老优良品种；翠冠是砂梨选育品种，具有高产、早熟、优质、适应性强、生长势旺的特点；京白属于秋子梨栽培品种，而且是最优良的品种之一。但是，梨是生命周期长的多年生木本植物，以无性繁殖为主，其较长的童期和高度杂合的基因，使得梨的传统育种方式周期长,而且工作量大、成效低。
组织培养技术是快速繁殖种苗的途径之一，已经应用于多种果树当中并且效果较好。梨的组织培养开始于上世纪三十年代，在七十多年中不断发展，人们已先后从茎尖、茎段、胚、胚乳、花药和原生质体培养中获得了试管苗[17]。茎段培养在梨的组织培养中研究最多，分为无芽和有芽两种茎段培养方式。茎尖培养除了有和茎段培养一样快速扩大苗木繁殖的特点外，还可获得无病毒种苗。20世纪80年代末，梨的茎尖培养研究开始热门起来，现在其形态建成已经基本完成，稍加诱导就能完成植株的再生过程。茎尖不但取材方便、方法简便，而且其生长速度快、繁殖率高、不易变异，所以它是梨组织培养中最常用的材料之一[8]。在植物组织培养中，激素的种类和浓度、细胞分裂素和生长素的配比也会影响生芽的能力。植物体内天然存在内源激素，影响植物生长发育和植物的整个生命活动过程。外源激素的作用效果与外植体以及愈伤组织本身内源激素的种类和水平有密切关系，外源激素必须通过内源激素才能发挥其作用[913]。合理调节和使用外源激素，使激素充分发挥其调节作用，才能满足外植体的特定要求。但是对于梨来说，在过去的茎段培养实验中，梨继代培养的出芽率、植株高度和健壮度都不理想，目前也尚未建立有效、稳定的继代培养技术，所以对于不同品种梨的继代培养技术的优化和建立是急需突破的难题。
本研究主要以鸭梨、翠冠梨、京白梨、雪花梨这四个不同品种的梨为对象，通过调节组培苗继代培养基中生长素IBA与细胞分裂素6BA的含量配比，分别于35天、50天、65天统计其芽增殖率，植株高度。以探索出使得四种基因型（鸭梨、翠冠梨、京白梨、雪花梨）的梨组培苗获得较短的继代周期和较高的芽增殖率的最佳的继代培养基，进而优化梨继代培养技术体系，为建立高效、稳定的梨再生和转化体系，快速的提供优质、充足的组织材料。
1 材料与方法
1．1 试验时间与地点
实验于2014年5月2015年5月在大学《作物遗传与种质创新》国家重点实验室的梨工程技术研究中心进行。
1．2 材料
本研究所用材料为鸭梨、翠冠、雪花梨、京白梨，其中翠冠和鸭梨来源于大学梨工程技术研发中心组培苗，京白梨和雪花梨为脱毒组培苗。MS粉剂购自南京寿德试验器材有限公司。
1．3 方法
1.3.1培养基 基本培养基为MS培养基(含蔗糖30g/L、琼脂粉6.5g/L、不含激素)，PH值为5.8，灭菌温度121℃，灭菌时间20min；不定芽诱导培养基添加0.5mg/L 6BA + 0.1mg/L NAA；不定芽继代增殖培养基添加不同浓度(0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L)的IBA和不同浓度(1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L)的6BA，共9个处理、3次重复，以不添加激素的MS培养基为对照。
1.3.2外植体的制备 分别采集5月下旬的鸭梨、翠冠、雪花梨、京白梨的一年生新梢。在实验室中用洗涤剂轻轻刷洗枝条表面，用自来水冲洗1h。然后剪成2.0—4.0cm的茎段（每段留1—2个腋芽），在超净工作台上用75%的酒精浸泡15s，用无菌水冲洗23次，每次30s，再倒入0.1%升汞溶液消毒6min，随后用无菌水冲洗5次，每次30s。
1.3.3无菌苗的获得 将消毒灭菌的外植体接种到初代培养基MS + 0.5mg/L 6BA + 0.1mg/L NAA + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂（PH值5.8）上培养获得无菌苗。培养条件为光照时间16h/d,光照强度2100lx，培养温度（252）℃。
1.3.4无菌苗的增殖 待萌发的小芽长至1—2cm时，选取生长一致的芽将其接种到MS+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂的基本继代培养基上，其中植物生长激素为IBA和6BA，其中IBA梯度设置为0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L,6BA设置为1.0mg/L，1.5mg/L、2.0mg/L。每个处理接种3瓶，重复三次。待组培苗长到35天、50天和65天时，统计其芽增殖率，植株高度。
1.3.5调查统计指标
增长高度(cm)=>lcm丛芽的总高度/培养基中丛芽总数
增殖率(％)=培养基中>lcm丛芽总数/接种芽总数
1.3.6数据处理方法 所测得数据用采用Excel进行整理，用统计软件SPSS19.0进行分析；数据显著分析采用Duncanα法，5%显著水平。
2 结果与分析
2．1 继代培养天数对梨组培苗增殖和生长的影响
试验的外植体分别培养35天、50天和65天时，其增殖和生长与培养时间呈正相关关系。经spss统计分析得到表21可以看出，鸭梨、翠冠这两个品种的组培苗在35天与50天的增殖率都有极显著差异，雪花梨和京白35天与50天的增殖率有显著差异。而这四个品种梨的组培苗在50天与在65天内统计的增殖率差异不显著。分析发现四个品种在35天、50天和65天的植株高度并没有显著差异，但是由平均数却可以看到35天到50天之间的高度差异比较明显，显示在这段时间植株生长较快速，而且经观察发现培养时间为50天的组培苗明显较其他培养时间的健壮。本试验结果表明50天是梨继代组培苗增殖率和生长高度最佳的培养时间。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1材料与方法2
1.1试验时间与地点2
1.2材料 2
1.3方法 2
1.3.1培养基2
1.3.2外植体的制备2
1.3.3无菌苗的获得2
1.3.4无菌苗的增殖2
1.3.5调查统计指标3
1.3.6数据处理方法3
2结果与分析3
2.1继代培养天数对梨组培苗增殖和生长的影响3
2.2不同激素配比对不同品种梨组培苗增殖和生长的影响4
3讨论 4
致谢5
参考文献5
不同梨品种继代培养技术的优化和建立
引言
引言
中国是梨的原生地，也是东方梨的分化中心,白梨、砂梨、秋子梨和新疆梨均起源于中国
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
。本次的实验材料雪花梨和鸭梨属于白梨的地方品种，雪花梨为河北定县的主要栽培良种，鸭梨是河北省的古老优良品种；翠冠是砂梨选育品种，具有高产、早熟、优质、适应性强、生长势旺的特点；京白属于秋子梨栽培品种，而且是最优良的品种之一。但是，梨是生命周期长的多年生木本植物，以无性繁殖为主，其较长的童期和高度杂合的基因，使得梨的传统育种方式周期长,而且工作量大、成效低。
组织培养技术是快速繁殖种苗的途径之一，已经应用于多种果树当中并且效果较好。梨的组织培养开始于上世纪三十年代，在七十多年中不断发展，人们已先后从茎尖、茎段、胚、胚乳、花药和原生质体培养中获得了试管苗[17]。茎段培养在梨的组织培养中研究最多，分为无芽和有芽两种茎段培养方式。茎尖培养除了有和茎段培养一样快速扩大苗木繁殖的特点外，还可获得无病毒种苗。20世纪80年代末，梨的茎尖培养研究开始热门起来，现在其形态建成已经基本完成，稍加诱导就能完成植株的再生过程。茎尖不但取材方便、方法简便，而且其生长速度快、繁殖率高、不易变异，所以它是梨组织培养中最常用的材料之一[8]。在植物组织培养中，激素的种类和浓度、细胞分裂素和生长素的配比也会影响生芽的能力。植物体内天然存在内源激素，影响植物生长发育和植物的整个生命活动过程。外源激素的作用效果与外植体以及愈伤组织本身内源激素的种类和水平有密切关系，外源激素必须通过内源激素才能发挥其作用[913]。合理调节和使用外源激素，使激素充分发挥其调节作用，才能满足外植体的特定要求。但是对于梨来说，在过去的茎段培养实验中，梨继代培养的出芽率、植株高度和健壮度都不理想，目前也尚未建立有效、稳定的继代培养技术，所以对于不同品种梨的继代培养技术的优化和建立是急需突破的难题。
本研究主要以鸭梨、翠冠梨、京白梨、雪花梨这四个不同品种的梨为对象，通过调节组培苗继代培养基中生长素IBA与细胞分裂素6BA的含量配比，分别于35天、50天、65天统计其芽增殖率，植株高度。以探索出使得四种基因型（鸭梨、翠冠梨、京白梨、雪花梨）的梨组培苗获得较短的继代周期和较高的芽增殖率的最佳的继代培养基，进而优化梨继代培养技术体系，为建立高效、稳定的梨再生和转化体系，快速的提供优质、充足的组织材料。
1 材料与方法
1．1 试验时间与地点
实验于2014年5月2015年5月在大学《作物遗传与种质创新》国家重点实验室的梨工程技术研究中心进行。
1．2 材料
本研究所用材料为鸭梨、翠冠、雪花梨、京白梨，其中翠冠和鸭梨来源于大学梨工程技术研发中心组培苗，京白梨和雪花梨为脱毒组培苗。MS粉剂购自南京寿德试验器材有限公司。
1．3 方法
1.3.1培养基 基本培养基为MS培养基(含蔗糖30g/L、琼脂粉6.5g/L、不含激素)，PH值为5.8，灭菌温度121℃，灭菌时间20min；不定芽诱导培养基添加0.5mg/L 6BA + 0.1mg/L NAA；不定芽继代增殖培养基添加不同浓度(0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L)的IBA和不同浓度(1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L)的6BA，共9个处理、3次重复，以不添加激素的MS培养基为对照。
1.3.2外植体的制备 分别采集5月下旬的鸭梨、翠冠、雪花梨、京白梨的一年生新梢。在实验室中用洗涤剂轻轻刷洗枝条表面，用自来水冲洗1h。然后剪成2.0—4.0cm的茎段（每段留1—2个腋芽），在超净工作台上用75%的酒精浸泡15s，用无菌水冲洗23次，每次30s，再倒入0.1%升汞溶液消毒6min，随后用无菌水冲洗5次，每次30s。
1.3.3无菌苗的获得 将消毒灭菌的外植体接种到初代培养基MS + 0.5mg/L 6BA + 0.1mg/L NAA + 30g/L蔗糖 + 6.5g/L琼脂（PH值5.8）上培养获得无菌苗。培养条件为光照时间16h/d,光照强度2100lx，培养温度（252）℃。
1.3.4无菌苗的增殖 待萌发的小芽长至1—2cm时，选取生长一致的芽将其接种到MS+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂的基本继代培养基上，其中植物生长激素为IBA和6BA，其中IBA梯度设置为0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L,6BA设置为1.0mg/L，1.5mg/L、2.0mg/L。每个处理接种3瓶，重复三次。待组培苗长到35天、50天和65天时，统计其芽增殖率，植株高度。
1.3.5调查统计指标
增长高度(cm)=>lcm丛芽的总高度/培养基中丛芽总数
增殖率(％)=培养基中>lcm丛芽总数/接种芽总数
1.3.6数据处理方法 所测得数据用采用Excel进行整理，用统计软件SPSS19.0进行分析；数据显著分析采用Duncanα法，5%显著水平。
2 结果与分析
2．1 继代培养天数对梨组培苗增殖和生长的影响
试验的外植体分别培养35天、50天和65天时，其增殖和生长与培养时间呈正相关关系。经spss统计分析得到表21可以看出，鸭梨、翠冠这两个品种的组培苗在35天与50天的增殖率都有极显著差异，雪花梨和京白35天与50天的增殖率有显著差异。而这四个品种梨的组培苗在50天与在65天内统计的增殖率差异不显著。分析发现四个品种在35天、50天和65天的植株高度并没有显著差异，但是由平均数却可以看到35天到50天之间的高度差异比较明显，显示在这段时间植株生长较快速，而且经观察发现培养时间为50天的组培苗明显较其他培养时间的健壮。本试验结果表明50天是梨继代组培苗增殖率和生长高度最佳的培养时间。
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