蝴蝶兰常见病毒病病原的鉴定及其防治的初步研究(附件)
本研究以白花型V3品种的蝴蝶兰病毒病病叶为试验材料，对其进行病毒分离与接种，通过生物学鉴定法得出三种不同发病症状的蝴蝶兰病叶携带的病毒均为建兰花叶病毒。将0.5%香菇多糖水剂配置成浓度为600、800、1000倍液，将20%吗呱·乙酸铜可湿性粉剂（小叶灵）配置成浓度为300、500、700倍液，取各浓度0.3ml分别均匀喷施在接种后已发病的植株上，结果表明，0.5%香菇多糖水剂800倍液防治效果为75.62%，20%吗呱·乙酸铜可湿性粉剂（小叶灵）500倍液防治效果为69.31%。将夹竹桃浓缩提取液用无菌水稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/ml，取各浓度提取液0.3ml分别均匀涂抹在接种后已发病的植株上。结果表明，夹竹桃浓缩提取液浓度为0.6g/ml的防治效果为73.64%。关键词 蝴蝶兰病毒病，病毒分离，病毒防治，防治效果
目 录
1 引言 1
1.1 蝴蝶兰与病毒病 1
1.2 蝴蝶兰病毒病的鉴定方法 1
1.3 建兰花叶病毒侵染蝴蝶兰症状 2
1.4 防治方法 2
1.5 本试验研究的目的及意义 3
2 材料和方法 3
2.1 试验材料 4
2.2 试验仪器 4
2.3 试验方法 4
2.4 数据分析 6
3 结果与分析 6
3.1 病毒分离过程 6
3.2 蝴蝶兰病毒病的生物学鉴定 7
3.3 药剂品种及浓度对防治过程中防治效果的影响 8
3.4 药剂品种及浓度对防治过程中病毒浓度的影响 11
3.5 药剂品种及浓度对防治过程中病斑扩展面积的影响 13
4 讨论 15
结论 17
致 谢 18
参考文献 19
1 引言
1.1 蝴蝶兰与病毒病
蝴蝶兰，兰科舌唇兰属，属单茎性附生兰，花的形状与蝴蝶相似，是热带兰里的稀有品种，极其珍贵，由此而得到此名字，是人们口中称赞的“兰中皇后”。蝴蝶兰花的颜色鲜艳且花型大，花色多样，有较多品种兼具双色或者三色，且 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
鉴赏期长可持续鉴赏60~70d，受到广大消费者的好评[1]。然而蝴蝶兰是附生兰[2]类，其中有很大一部分都要求在室内或者是在温室中栽培。原本在亚洲的热带是十分盛产的，但是现在在中国很多地方都有生产。由于对温度和湿度的要求都较高，生长发育最适宜的温度是15~30℃，最适宜的湿度是70%~80%，且多数情况下蝴蝶兰生长的环境通风情况不佳，所以很容易感染病毒病，这严重影响了蝴蝶兰的鉴赏和利用价值，正成为蝴蝶兰产业健康发展的一个重大问题[3]。在这些病毒病中，建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)与齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是两种侵染蝴蝶兰的主要病毒种类[4]，其中又以建兰花叶病毒侵染为多[5]，所以防治这种常见的蝴蝶兰病毒迫在眉睫。
1.2 蝴蝶兰病毒病的鉴定方法
蝴蝶兰病毒病的鉴定方法主要有以下这几种：生物学鉴定法、电子显微镜鉴定法、分子生物学鉴定法等等。每一种鉴定的方法都有它自身独特的优点和缺点，我们不能一概而论[6]。鉴别实验室里较为通常的植物病毒可以使用生物学鉴定法，因为它不用一些特殊的设备装置。这种鉴定方法的原理主要是通过观察接种病毒寄主的发病症状、发病时间等来确定导致发病的是何种病毒，然而施曼玲[7]等人研究发现这种方法不是特别严谨，因为不同种病毒在同一种植物上常会表现出同种症状，而且即使是相同的病毒，在不同的栽培品种上表现出来的一些症状也是不尽相同的，所以这个方法只能是初步鉴定病毒的标准。电子显微镜和超薄切片技术的出现，可以让我们仔细的观察到病毒的具体的形态特征，病毒粒体大小等，这对于病毒病的鉴定又是一项较大的突破，洪建[8]等人通过实验研究发现，在电子显微镜下可以比较清晰地观察到病毒的具体形态以及其大小、表面结构特征和有无包膜等，从而可以更精确的确定病毒的种类，提高判断标准，可以满足多种病毒的鉴定工作。然而，电子显微镜价格昂贵，鉴定的费用极高，在实际的生产实践中应用较少，多用于科研。分子生物学鉴定法主要包括RTPCR检测以及核酸探针杂交检测。此方法不但可以快速检测出RNA病毒，并且可以大大提高检出率。郭莺[9]等人以前对侵染厦门地区的蝴蝶兰的建兰花叶病毒做过分子鉴定实验，得到的结果是，使用RTPCR方法能够完整的得到CP基因序列，此方法是最近的十年才得到发展的发放，却是能迅速、精准、方便鉴定植物病毒，并能为病毒的亲缘关系研究提供较可靠的信息。
1.3 建兰花叶病毒(CymMV)侵染蝴蝶兰的症状
建兰花叶病毒隶属线形病毒科、马铃薯X病毒属。蝴蝶兰被建兰花叶病毒侵染通常是为系统性的，一般来说，表现为较明显症状的是最先被侵染的植株叶片，而其他叶片有可能仅仅表现局部的症状甚至是完全未表现症状。有学者在试验过程中发现[10]，建兰花叶病毒侵染蝴蝶兰后，主要症状为花叶、黄化或坏死、生长畸形等。在蝴蝶兰叶片上，通常单单只是会表现出很多种不同的症状，如黄化斑、环斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等；蝴蝶兰如果发病了，它的叶片有些会出现不是很明显的紧挨、分散的块状褪绿斑、黄化块斑；也有的会表现出色泽不均匀的不规则形状的类似云雾状的黄花斑；还有的会表现生长畸形状，叶片逐渐皱缩等。其中最明显的症状为在叶片上会出现零星的深褐色凹陷小斑点，在其扩展开来后会展现出来更加明显的深褐色凹陷的斑块，之后这些斑块会互相融合，成为一个较大的病斑，并且病斑与病斑之间的叶肉会出现黄化等症状。有些叶片会出现凹凸不平的叶片表面呈现粗糙有纹路的症状；叶片紫化、变厚、畸形[11]。在栽培过程中可能是因为切花操作过于频繁，很容易被剪刀等工具感染，同时也有可能在不同的栽培环境条件下，因温度、湿度、光照等的差异，均可能是导致蝴蝶兰表现出不同的发病症状的原因。
1.4 防治方法
蝴蝶兰病毒病的防治工作，需要抓住“以提前预防为主，以综合防治为辅”的基本原则，并且要在整个的栽植培养蝴蝶兰的过程当中贯穿这个原则，因地制宜的运用好各种防护措施才是可以达到最好的防治效果的前提。在实验室等室内采用的防治方法主要是药剂防治。在植物病毒药剂防治方面，刘艳芝[12]等人曾在防治番茄病毒病的田间实验中得出如下结果，使用浓度为600~800倍液的1%香菇多糖水，每七天喷一次，共喷三次药可以对防治番茄病毒病产生一定的防治效果，生产无公害番茄时第一个想到的就是使用此药剂，处理过程中都没有发生药害的症状，能够证明药剂安全，可作为我们防治蝴蝶兰病毒病的参考药品[13]。杨玉丽[14]等人在对两种不同农药防治烟草花叶病毒病药效的研究中发现用生物农药0.5%香菇多糖水和化学农药20%吗呱乙酸铜可湿性粉剂防治烟草花叶病毒病，前者防治效果在80%以上且具有比较优异的持续性效果；后者防治效果在70%左右，两种药剂都产生了对烟草较好的促进生长的作用，因此，可以给我们在防治蝴蝶兰的病毒病时提供合理的药剂品种选择的科学依据。
目 录
1 引言 1
1.1 蝴蝶兰与病毒病 1
1.2 蝴蝶兰病毒病的鉴定方法 1
1.3 建兰花叶病毒侵染蝴蝶兰症状 2
1.4 防治方法 2
1.5 本试验研究的目的及意义 3
2 材料和方法 3
2.1 试验材料 4
2.2 试验仪器 4
2.3 试验方法 4
2.4 数据分析 6
3 结果与分析 6
3.1 病毒分离过程 6
3.2 蝴蝶兰病毒病的生物学鉴定 7
3.3 药剂品种及浓度对防治过程中防治效果的影响 8
3.4 药剂品种及浓度对防治过程中病毒浓度的影响 11
3.5 药剂品种及浓度对防治过程中病斑扩展面积的影响 13
4 讨论 15
结论 17
致 谢 18
参考文献 19
1 引言
1.1 蝴蝶兰与病毒病
蝴蝶兰，兰科舌唇兰属，属单茎性附生兰，花的形状与蝴蝶相似，是热带兰里的稀有品种，极其珍贵，由此而得到此名字，是人们口中称赞的“兰中皇后”。蝴蝶兰花的颜色鲜艳且花型大，花色多样，有较多品种兼具双色或者三色，且 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
鉴赏期长可持续鉴赏60~70d，受到广大消费者的好评[1]。然而蝴蝶兰是附生兰[2]类，其中有很大一部分都要求在室内或者是在温室中栽培。原本在亚洲的热带是十分盛产的，但是现在在中国很多地方都有生产。由于对温度和湿度的要求都较高，生长发育最适宜的温度是15~30℃，最适宜的湿度是70%~80%，且多数情况下蝴蝶兰生长的环境通风情况不佳，所以很容易感染病毒病，这严重影响了蝴蝶兰的鉴赏和利用价值，正成为蝴蝶兰产业健康发展的一个重大问题[3]。在这些病毒病中，建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)与齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是两种侵染蝴蝶兰的主要病毒种类[4]，其中又以建兰花叶病毒侵染为多[5]，所以防治这种常见的蝴蝶兰病毒迫在眉睫。
1.2 蝴蝶兰病毒病的鉴定方法
蝴蝶兰病毒病的鉴定方法主要有以下这几种：生物学鉴定法、电子显微镜鉴定法、分子生物学鉴定法等等。每一种鉴定的方法都有它自身独特的优点和缺点，我们不能一概而论[6]。鉴别实验室里较为通常的植物病毒可以使用生物学鉴定法，因为它不用一些特殊的设备装置。这种鉴定方法的原理主要是通过观察接种病毒寄主的发病症状、发病时间等来确定导致发病的是何种病毒，然而施曼玲[7]等人研究发现这种方法不是特别严谨，因为不同种病毒在同一种植物上常会表现出同种症状，而且即使是相同的病毒，在不同的栽培品种上表现出来的一些症状也是不尽相同的，所以这个方法只能是初步鉴定病毒的标准。电子显微镜和超薄切片技术的出现，可以让我们仔细的观察到病毒的具体的形态特征，病毒粒体大小等，这对于病毒病的鉴定又是一项较大的突破，洪建[8]等人通过实验研究发现，在电子显微镜下可以比较清晰地观察到病毒的具体形态以及其大小、表面结构特征和有无包膜等，从而可以更精确的确定病毒的种类，提高判断标准，可以满足多种病毒的鉴定工作。然而，电子显微镜价格昂贵，鉴定的费用极高，在实际的生产实践中应用较少，多用于科研。分子生物学鉴定法主要包括RTPCR检测以及核酸探针杂交检测。此方法不但可以快速检测出RNA病毒，并且可以大大提高检出率。郭莺[9]等人以前对侵染厦门地区的蝴蝶兰的建兰花叶病毒做过分子鉴定实验，得到的结果是，使用RTPCR方法能够完整的得到CP基因序列，此方法是最近的十年才得到发展的发放，却是能迅速、精准、方便鉴定植物病毒，并能为病毒的亲缘关系研究提供较可靠的信息。
1.3 建兰花叶病毒(CymMV)侵染蝴蝶兰的症状
建兰花叶病毒隶属线形病毒科、马铃薯X病毒属。蝴蝶兰被建兰花叶病毒侵染通常是为系统性的，一般来说，表现为较明显症状的是最先被侵染的植株叶片，而其他叶片有可能仅仅表现局部的症状甚至是完全未表现症状。有学者在试验过程中发现[10]，建兰花叶病毒侵染蝴蝶兰后，主要症状为花叶、黄化或坏死、生长畸形等。在蝴蝶兰叶片上，通常单单只是会表现出很多种不同的症状，如黄化斑、环斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等；蝴蝶兰如果发病了，它的叶片有些会出现不是很明显的紧挨、分散的块状褪绿斑、黄化块斑；也有的会表现出色泽不均匀的不规则形状的类似云雾状的黄花斑；还有的会表现生长畸形状，叶片逐渐皱缩等。其中最明显的症状为在叶片上会出现零星的深褐色凹陷小斑点，在其扩展开来后会展现出来更加明显的深褐色凹陷的斑块，之后这些斑块会互相融合，成为一个较大的病斑，并且病斑与病斑之间的叶肉会出现黄化等症状。有些叶片会出现凹凸不平的叶片表面呈现粗糙有纹路的症状；叶片紫化、变厚、畸形[11]。在栽培过程中可能是因为切花操作过于频繁，很容易被剪刀等工具感染，同时也有可能在不同的栽培环境条件下，因温度、湿度、光照等的差异，均可能是导致蝴蝶兰表现出不同的发病症状的原因。
1.4 防治方法
蝴蝶兰病毒病的防治工作，需要抓住“以提前预防为主，以综合防治为辅”的基本原则，并且要在整个的栽植培养蝴蝶兰的过程当中贯穿这个原则，因地制宜的运用好各种防护措施才是可以达到最好的防治效果的前提。在实验室等室内采用的防治方法主要是药剂防治。在植物病毒药剂防治方面，刘艳芝[12]等人曾在防治番茄病毒病的田间实验中得出如下结果，使用浓度为600~800倍液的1%香菇多糖水，每七天喷一次，共喷三次药可以对防治番茄病毒病产生一定的防治效果，生产无公害番茄时第一个想到的就是使用此药剂，处理过程中都没有发生药害的症状，能够证明药剂安全，可作为我们防治蝴蝶兰病毒病的参考药品[13]。杨玉丽[14]等人在对两种不同农药防治烟草花叶病毒病药效的研究中发现用生物农药0.5%香菇多糖水和化学农药20%吗呱乙酸铜可湿性粉剂防治烟草花叶病毒病，前者防治效果在80%以上且具有比较优异的持续性效果；后者防治效果在70%左右，两种药剂都产生了对烟草较好的促进生长的作用，因此，可以给我们在防治蝴蝶兰的病毒病时提供合理的药剂品种选择的科学依据。
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