黑果枸杞多糖的提取
摘要：本实验对黑果枸杞多糖提取工艺进行优化。多糖提取常规方法有热水浸提法、超声波浸提法、微波浸提法和超声、微波协同萃取法等。为保护多糖结构，本次实验采用传统的热水浸提工艺。首先采用单因素试验，测试热水浸提温度、浸提时间、液料比和提取次数对多糖提取率的影响，根据实验结果，前三个因素进行响应面优化试验。在单因素试验的基础上，选取提取率最大的试验条件作为中心点，利用Design-expert软件进行响应曲面优化设计，依据Box-Behnken 的中心组合设计，进行三因素三水平试验。经软件计算得最优提取方案，各条件分别为：提取温度95℃，时间5h，液料比35 mL/g，多糖得率为10.55%，与实际验证基本相符。
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words 1
引言2
1 材料与方法 2
1.1 原料2
1.2 主要实验仪器2
1.3 实验方法2
1.3.1 黑果枸杞粗多糖提取工艺2
1.3.1.1 原料预处理 2
1.3.1.2 多糖提取 2
1.3.2 单因素试验2
1.3.3 提取工艺优化3
1.3.4 黑果枸杞粗多糖理化性质研究3
1.3.4.1 多糖含量的测定 3
1.3.4.2 蛋白质含量的测定 3
2 结果与分析 3
2.1 单因素试验结果3
2.1.1 温度对提取率的影响3
2.1.2 时间对提取率的影响3
2.1.3 液料比对提取率的影响4
2.1.4 提取次数对提取率的影响4
2.2 响应面优化4
2.3 多糖理化性质7
2.3.1 多糖含量7
2.3.2 蛋白质含量7
3 讨论 7
3.1 黑果枸杞多糖提取工艺优化7
3.2 黑果枸杞粗多糖初步纯化8
致谢8
参考文献8
黑果枸杞多糖的提取
食品科学与
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
工程 沈佳琳
引言
黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）为茄科枸杞属多年生灌木[1]，其果实味甜多汁，富含营养物质，是分布于我国西北地区的特有野生植物。据《维吾尔药志》及《晶珠本草》记载，黑枸杞具有滋补强壮、降压、抗衰老等多种作用，且对心脏病、心热病、月经不调等疗效显著[2]。现代药理学表明，多糖是中草药发挥独特疗效的重要物质基础，黑果枸杞多糖作为黑果枸杞的重要组成部分，已有研究表明其具有降血糖作用[3]。
目前，关于黑果枸杞多糖的研究刚刚起步，大部分为提取工艺和生物活性的初步分析。[4]黑果枸杞多糖提取工艺主要有四种方法：热水浸提法、超声波法、微波法和超声微波协同萃取法。白红进[5,6]等人对以上四种提取方法的提取效果进行比较，以提取率为检验标准，结果为超声微波提取协同萃取法〉热水浸提法〉微波提取法〉超声波提取法。彭强[7]等人对纯化工艺进行了比较研究，脱蛋白通常有三种方法：三氯乙酸（TCA）法[8,9]、Seveage法[10]及盐酸法[11]，结果表明三氯乙酸法脱蛋白效果最好，且多糖损失少。脱色方法常有活性碳法、过氧化氢法、树脂法及乙醇法，实验表明活性碳法、树脂法和过氧化氢法脱色效果较好，但前两种多糖损失较多，因此最佳方法为过氧化氢法。本实验采用响应曲面法对黑果枸杞果糖的提取工艺进行优化，之后进行纯化，以供后续研究。
1 材料与方法
1．1 原料
黑果枸杞从宁夏购入，60℃烘干备用。
1．2 主要仪器设备
数显恒温水浴锅（HH4型，常州国华电器有限公司）；
循环水式真空粟（SHBm型，郑州长城科工贸有限公司）；
台式离心机（TDL5型，上海安亭科学仪器厂)；
旋转蒸发器（Laborota400型，德国Heidolph）；
电热恒温鼓风干燥箱（DHG9140A型，上海一恒科技有限公司）；
电子天平（AY120 型，SHIMADZU）；
工业乙醇等为市售常规试剂。
1．3 实验方法
1．3．1 黑果枸杞粗多糖提取工艺
黑果枸杞→干燥→粉碎→预处理→干燥→热水浸提→滤液合并→抽滤取上清液→旋蒸至1/5 V→醇沉、冷藏过夜→离心取沉淀→乙醚洗涤沉淀→离心取沉淀→60 ℃烘干→粗多糖
1. 3. 1. 1 原料预处理
黑果枸杞中含有大量的低分子物质[12]，影响多糖的提取[13]，因此用80%乙醇进行预处理，可去掉黑果枸杞中的小分子物质，如小分子糖类、色素以及氨基酸等。
将干燥的黑果枸杞用组织粉碎机粉碎，按1：8料液比，用80%酒精在70 ℃条件下提取，反复进行4次，每次40 min，直至溶液基本无色，此时黑果枸杞粉末为淡褐色。处理结束后进行抽滤，取滤渣，滤渣在60 ℃烘箱中烘干，再粉碎备用。
1. 3. 1. 2 多糖提取
取适量处理后的黑果枸杞粉末，按照一定提取温度、提取时间、液料比及提取次数进行提取。提取液经抽滤后取上清，滤渣继续浸提。合并几次上清液，在旋转蒸发仪上50 ℃旋蒸，直至浓缩液为原来的1/5体积。浓缩液加入4倍体积工业酒精，放冰箱冷藏过夜，之后离心（4000r/min，5 min）取沉淀，沉淀用乙醚洗涤，再次离心取沉淀，放60 ℃烘箱烘干，称重，得到的即为黑果枸杞粗多糖。粗多糖得率公式如下：
1．3．2 单因素试验
选取提取温度、提取时间、液料比及提取次数4个单因素，分别进行试验。
（1）提取温度共设置60、70、80、90、100 ℃五个梯度，其余条件为：提取时间1 h，液料比25 mL/g，提取次数3次。
（2）提取时间共设置1、2、3、4、5、6 h六个梯度，其余条件为：提取温度90 ℃，液料比25 mL/g，提取次数3次。
（3）提取液料比共设置10、20、30、40、50 mL/g五个梯度，其余条件为：提取温度90 ℃，提取时间1 h，提取次数3次。
（4）提取次数共设置1、2、3、4次，其余条件为：提取温度90 ℃，提取时间1 h，液料比25 mL/g。
1．3．3 粗多糖提取条件优化
根据单因素试验结果，选取提取温度、时间和液料比为响应面实验因素，应用DesignExpert软件进行三因素三水平的BoxBenhnken试验[14]，并利用响应面法对黑果枸杞多糖的提取方法进行优化[15]。
1. 3. 4 黑果枸杞粗多糖理化性质研究
1．3．4．1 多糖含量的测定
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words 1
引言2
1 材料与方法 2
1.1 原料2
1.2 主要实验仪器2
1.3 实验方法2
1.3.1 黑果枸杞粗多糖提取工艺2
1.3.1.1 原料预处理 2
1.3.1.2 多糖提取 2
1.3.2 单因素试验2
1.3.3 提取工艺优化3
1.3.4 黑果枸杞粗多糖理化性质研究3
1.3.4.1 多糖含量的测定 3
1.3.4.2 蛋白质含量的测定 3
2 结果与分析 3
2.1 单因素试验结果3
2.1.1 温度对提取率的影响3
2.1.2 时间对提取率的影响3
2.1.3 液料比对提取率的影响4
2.1.4 提取次数对提取率的影响4
2.2 响应面优化4
2.3 多糖理化性质7
2.3.1 多糖含量7
2.3.2 蛋白质含量7
3 讨论 7
3.1 黑果枸杞多糖提取工艺优化7
3.2 黑果枸杞粗多糖初步纯化8
致谢8
参考文献8
黑果枸杞多糖的提取
食品科学与
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
工程 沈佳琳
引言
黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）为茄科枸杞属多年生灌木[1]，其果实味甜多汁，富含营养物质，是分布于我国西北地区的特有野生植物。据《维吾尔药志》及《晶珠本草》记载，黑枸杞具有滋补强壮、降压、抗衰老等多种作用，且对心脏病、心热病、月经不调等疗效显著[2]。现代药理学表明，多糖是中草药发挥独特疗效的重要物质基础，黑果枸杞多糖作为黑果枸杞的重要组成部分，已有研究表明其具有降血糖作用[3]。
目前，关于黑果枸杞多糖的研究刚刚起步，大部分为提取工艺和生物活性的初步分析。[4]黑果枸杞多糖提取工艺主要有四种方法：热水浸提法、超声波法、微波法和超声微波协同萃取法。白红进[5,6]等人对以上四种提取方法的提取效果进行比较，以提取率为检验标准，结果为超声微波提取协同萃取法〉热水浸提法〉微波提取法〉超声波提取法。彭强[7]等人对纯化工艺进行了比较研究，脱蛋白通常有三种方法：三氯乙酸（TCA）法[8,9]、Seveage法[10]及盐酸法[11]，结果表明三氯乙酸法脱蛋白效果最好，且多糖损失少。脱色方法常有活性碳法、过氧化氢法、树脂法及乙醇法，实验表明活性碳法、树脂法和过氧化氢法脱色效果较好，但前两种多糖损失较多，因此最佳方法为过氧化氢法。本实验采用响应曲面法对黑果枸杞果糖的提取工艺进行优化，之后进行纯化，以供后续研究。
1 材料与方法
1．1 原料
黑果枸杞从宁夏购入，60℃烘干备用。
1．2 主要仪器设备
数显恒温水浴锅（HH4型，常州国华电器有限公司）；
循环水式真空粟（SHBm型，郑州长城科工贸有限公司）；
台式离心机（TDL5型，上海安亭科学仪器厂)；
旋转蒸发器（Laborota400型，德国Heidolph）；
电热恒温鼓风干燥箱（DHG9140A型，上海一恒科技有限公司）；
电子天平（AY120 型，SHIMADZU）；
工业乙醇等为市售常规试剂。
1．3 实验方法
1．3．1 黑果枸杞粗多糖提取工艺
黑果枸杞→干燥→粉碎→预处理→干燥→热水浸提→滤液合并→抽滤取上清液→旋蒸至1/5 V→醇沉、冷藏过夜→离心取沉淀→乙醚洗涤沉淀→离心取沉淀→60 ℃烘干→粗多糖
1. 3. 1. 1 原料预处理
黑果枸杞中含有大量的低分子物质[12]，影响多糖的提取[13]，因此用80%乙醇进行预处理，可去掉黑果枸杞中的小分子物质，如小分子糖类、色素以及氨基酸等。
将干燥的黑果枸杞用组织粉碎机粉碎，按1：8料液比，用80%酒精在70 ℃条件下提取，反复进行4次，每次40 min，直至溶液基本无色，此时黑果枸杞粉末为淡褐色。处理结束后进行抽滤，取滤渣，滤渣在60 ℃烘箱中烘干，再粉碎备用。
1. 3. 1. 2 多糖提取
取适量处理后的黑果枸杞粉末，按照一定提取温度、提取时间、液料比及提取次数进行提取。提取液经抽滤后取上清，滤渣继续浸提。合并几次上清液，在旋转蒸发仪上50 ℃旋蒸，直至浓缩液为原来的1/5体积。浓缩液加入4倍体积工业酒精，放冰箱冷藏过夜，之后离心（4000r/min，5 min）取沉淀，沉淀用乙醚洗涤，再次离心取沉淀，放60 ℃烘箱烘干，称重，得到的即为黑果枸杞粗多糖。粗多糖得率公式如下：
1．3．2 单因素试验
选取提取温度、提取时间、液料比及提取次数4个单因素，分别进行试验。
（1）提取温度共设置60、70、80、90、100 ℃五个梯度，其余条件为：提取时间1 h，液料比25 mL/g，提取次数3次。
（2）提取时间共设置1、2、3、4、5、6 h六个梯度，其余条件为：提取温度90 ℃，液料比25 mL/g，提取次数3次。
（3）提取液料比共设置10、20、30、40、50 mL/g五个梯度，其余条件为：提取温度90 ℃，提取时间1 h，提取次数3次。
（4）提取次数共设置1、2、3、4次，其余条件为：提取温度90 ℃，提取时间1 h，液料比25 mL/g。
1．3．3 粗多糖提取条件优化
根据单因素试验结果，选取提取温度、时间和液料比为响应面实验因素，应用DesignExpert软件进行三因素三水平的BoxBenhnken试验[14]，并利用响应面法对黑果枸杞多糖的提取方法进行优化[15]。
1. 3. 4 黑果枸杞粗多糖理化性质研究
1．3．4．1 多糖含量的测定
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