活血丹总黄酮检测方法与药典法的比较研究
目录
摘要3
关键词3
引言（或绪论）3
1材料与方法3
1.1试验材料3
1.2仪器与试剂3
1.3试验方法4
1.3.1对照品溶液配制4
1.3.2供试品溶液配制4
1.3.3不同显色体系下测定活血丹总黄酮含量的方法比较4
1.3.4 HPLC测定活血丹中木犀草苷的含量 5
2 结果与分析5
2.1不同显色体系下测定活血丹总黄酮含量的方法比较5
2.1.1检测波长的选择5
2.1.2标准曲线的绘制8
2.1.3总黄酮含量的测定8
2.2 HPLC测定活血丹中木犀草苷的含量8
2.3不同显色体系的比色法比较9
3讨论9
3.1不同显色体系下测定活血丹总黄酮含量的检测波长的选择分析9
3.2不同显色体系的比色法比较分析10
致谢10
参考文献10
Abstract11
Key words11
活血丹总黄酮检测条件的优化
学 生 车星星
[摘要]目的：优化活血丹总黄酮检测条件。方法：选择芦丁对照品、样品溶液及活血丹所含有的三种有机酸类物质（绿原酸、迷迭香酸、咖啡酸）对不同显色体系（NaNO2Al(NO3)3NaOH显色体系、AlCl3NaAcHAc显色体系、ZrOCl2显色体系）进行筛选，紫外分光光度法测定活血丹中总黄酮的含量。结果：优化出了连钱草总黄酮的检测条件，挑选出受非黄酮类物质影响最小的显色方法，木犀草苷是活血丹中较为主要的黄酮类化合物，运用HPLC测定活血丹中木犀草苷的含量，将HPLC测定值与紫外分光光度法的测定值进行回归分析，以此来判定所用紫外分光光度法的可信度，帮助确定最终的总黄酮测定方法。结论：AlCl3NaAcHAc比色法更适合活血丹总黄酮测定。
[关键词]活血丹；有机酸类物质；黄酮类物质；显色体系；总黄酮测定
连钱草[G1echoma longituba (Nakai) Kupr]别名活血丹、铜钱草等，《中国药典》
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收载为唇形科植物活血丹[G1echoma longituba (Nakai) Kupr]的干燥地上部分，具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能[1]，主治尿路感染、尿路结石、胃及十二指肠溃疡、黄疸性肝炎、肝胆结石等症，在治疗胆结石、跌打损伤及断肢再造方面有独特作用[2 3]。我国连钱草资源极为丰富，除新疆、甘肃、青海、西藏以外其它各省均有连钱草分布[4]。连钱草的主要化学成分有萜类、黄酮、挥发油、有机酸以及多糖等[510]。其中，萜类化合物[5]主要包括熊果酸、齐墩果酸、乌苏酸、2羟基乌苏酸等；黄酮和黄酮苷类化合物[67]包括木犀草素、芦丁、芹菜素、刺槐素、海常素、胡萝卜苷、槲皮素、连钱草酮等；挥发油[8]类化合物包括左旋薄荷酮、胡薄荷酮、旅烯、柠檬烯、1，8桉叶素、异薄荷酮、异松樟酮、α松油醇等，具有特殊的清香味；有机酸类化合物[910]包括阿魏酸、咖啡酸、介子酸、月桂酸、迷迭香酸、原儿茶醛、迷迭香酸甲酯、三十烷酸、肉豆蔻酸等有机酸。
已有文献研究表明，紫外分光光度法中的NaNO2Al(NO3)3NaOH比色法[11]、AlCl3NaAcHAc比色法[12]、ZrOCl2比色法[13]都可以检测出药材中的总黄酮含量，本研究在此基础上系统优化、比较了对于相同样品，不同显色方法测定的活血丹内总黄酮含量差异，为活血丹质量的综合评价体系完善提供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
活血丹药材于2015年5月采于江苏南京紫金山，经大学郭巧生教授鉴定为活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.，采收后去除杂质、洗净、自然干燥，粉碎后过60目筛，于阴凉干燥处贮藏，备用。
1.2 仪器与试剂
仪器：ARA520型电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司）；BSM220.4型电子天平（上海卓精电子科技有限公司）；PS60A型超声波清洗器（深圳洁康超声波清洗机有限公司）；RE2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SHZDⅢ型循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；Alpha1506型紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司）；日本岛津LC20AT型液相色谱仪：包括SPD20A紫外可见光检测器，美国Rheodyne 7725i型手动进样器及N2000色谱工作站。
试剂：亚硝酸钠，硝酸铝，氯化铝，冰乙酸：（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠，无水醋酸钠：（分析纯，西陇化工股份有限公司）；95%乙醇：（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；甲醇：（分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司）；氯氧化锆：（分析纯，纯度98%，上海麦克林生物化学有限公司）；乙腈：（色谱纯，广东光华科技股份有限公司）。绿原酸（批号110753201415），咖啡酸（批号110885200102），迷迭香酸（纯度98.6%，批号111871201404）对照品均购自中国食品药品检定研究院。木犀草苷（纯度98%，批号20130211）购于天津士兰科技有限公司。芦丁（批号Y05M6S1B20771）对照品购自上海源叶生物科技有限公司。
1.3 试验方法
1. 3. 1 对照品溶液配制 芦丁对照品溶液配制：精密称取芦丁对照品38.8 mg，置于100 mL的容量瓶中，加60%乙醇60 mL，密塞，超声使其溶解，冷却后加60%乙醇至刻度，摇匀，得芦丁标准品溶液0.388 mg.mL1，4℃贮藏。
绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品溶液配制：分别精密称取绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品适量，加60%乙醇溶解定容，4℃贮藏，配成浓度分别为0.2016，0.2530，0.2140 mg.mL1的标准品溶液。
木犀草苷对照品溶液配制：精密称取木犀草苷对照品4.20 mg置于10 mL容量瓶中，加甲醇至适量，超声使溶解后，用甲醇定容至刻度，摇匀，零下18℃贮藏，配成浓度0.420 mg.mL1的母液。使用时，取0.45 mL母液于10 mL容量瓶中，定容备用，即为18.9 μg.mL1的标准品溶液。
1. 3. 2 供试品溶液配制[11] 精密称取样品粉末1.0 g，置于具塞平底烧瓶中，加入65%乙醇60 mL，密塞，称定重量，40℃超声提取40 min，放冷后密塞，再次称定重量，用65%乙醇补足重量，摇匀；再次超声提取40 min。抽滤，滤液于75℃水浴下减压浓缩后，精密量取60%乙醇40 mL溶解析出物同时超声10 min；再次抽滤得滤液置于100 mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，即得供试品溶液，备用。
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