abagas和温度协同作用对芹菜种子萌发的影响
芹菜作为我国大面积栽培的主要蔬菜之一，其种子萌发的问题受到广泛关注，而使用外源植物激素处理可破除休眠，促进种子萌发。本实验通过不同浓度的GAs和ABA对两种芹菜种子进行处理，结果表明GAs、ABA单因素处理过程中，GAs处理能显著提高芹菜种子的发芽率及发芽势，ABA则能显著抑制种子萌发，其中，浓度为2.00g/L的GAs溶液处理，对芹菜种子萌发的促进作用最强，而ABA浓度越高，对种子萌发的抑制作用越强。GAs和ABA协同作用处理中，浓度为0.05g/L，体积比为1:1的条件，对种子萌发的促进作用最强，说明GAs和ABA的动态平衡对芹菜种子萌发具有重要意义。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 试验材料 2
1．2 试验方法 2
1．2．1 预处理 2
1．2．2 对照组处理 2
1．2．3 外源GAs、ABA单因素处理 2
1．2．4 外源GAs和ABA协同处理 3
1．2．5 RNA的提取及cDNA的合成 3
1．2．6 芹菜苗中α淀粉酶基因的克隆 3
1．2．7 序列分析 3
1．2．8 实时定量PCR反应 3
2 结果与分析 3
2．1 数据处理与分析 3
2．1．1 对照组处理 4
2．1．2 外源GAs、ABA单因素处理 4
2．1．3 外源GAs和ABA协同处理 5
2．1．4 芹菜苗中α淀粉酶基因的克隆 6
2．1．5 实时定量PCR 7
3 讨论 7
致谢 8
参考文献 8
ABA、GAs和温度协同作用对芹菜种子萌发的影响
引言
引言：芹菜(Apium graveolens L.)是伞形科的二年生草本植物，适宜在冷凉环境中生长，最宜的生长温度为1015℃，原产地为欧洲地中海一带的的沼泽地区。其营养价值非常高，含有丰富的维生素、矿 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
物质以及人体不可或缺的各种蛋白质及膳食纤维，是被公认的重要的天然保健品之一[1]。芹菜作为全球的十大蔬菜之一，在我国的栽培历史也十分悠久，而且分布范围很广，不少地区已经实行排开种植，做到了周年供应[2]。按照《中国农业统计资料》的记载[3]，截止到2008年，全国范围内的的芹菜栽培面积已经达到了860万亩，并有逐年上升的趋势，因此，成为了我国七大重点蔬菜栽培种类之一。
随着现代社会的不断发展前进，人们的经济水平逐渐提升，生活水平也获得了显著改善，对生活质量的要求也日益增强，各种蔬菜的消费量在持续增加，因此，芹菜的栽培面积也随之不断扩展。然而，由于芹菜种子颗粒较小，千粒重仅有0.41g，外皮革质化，含有大量的挥发油，致使其透水性很差[4]，导致发芽、出苗的速度十分缓慢且不整齐，发芽率一般仅有5060%，因此，严重影响了芹菜种植业的发展以及芹菜的产量和质量，同时，因为芹菜种子的休眠期较长，因此限制了芹菜种植业当年种子的及时生产和销售，对其造成了一定程度的损失。
Marianna G. Nikolaeva在对种子休眠的研究过程中，设计了一种分类系统，反映了休眠由种子的形态和生理特性决定的事实。Baskin基于这一方案，进一步提出了一个综合分类系统，其中包括五类种子休眠：形态休眠（Morphological dormancy，MD），生理休眠（Physiological dormancy，PD），物理休眠（Physical dormancy，PY），形态生理休眠（Morphophysiological dormancy，MPD）以及组合休眠（Combinational dormancy，PY + PD）[5]。而芹菜则属于其中的形态休眠（MD），形态休眠存在于具有未充分发育但分化的胚的种子中，这些胚不是生理上的休眠，而是需要时间来生长和发芽。
在研究人员不断地对种子萌发过程的科学研究中，为了提高种子的发芽率、发芽势及种子活力等，各位专家学者积累了相当丰富的经验，其中利用低温、化学药剂、物理搓种、射线照射等方法处理种子[6]，可促进种子萌发，而利用外源植物激素诱导种子萌发，作为一种新兴的处理方法，因外源激素处理可使酶的活性增强，促进种子萌发，提高种子的发芽率，发芽势及种子活力[7]，且激素处理方法简单易行，效果十分显著，同时不受季节与气候的影响和限制[8]，已经引起了国内外的普遍重视。研究人员在试验过程中发现，种子的休眠状态可以被GAs解除，而被ABA诱导和维持 [9]，GAs与ABA之间不仅存在着明显的拮抗作用，同时还彼此相互抑制着控制对方合成以及分解代谢的信号基因的表达[10]。种子发育过程中，内源ABA抑制种子萌发，促进贮藏蛋白的积累和胚的生长，促进热稳定蛋白的合成与积累，增强种子的逆境保护能力，提高种子活力。在萌发的种子内，内源ABA含量非常低，但对外源ABA的敏感性高，ABA抑制萌发必需的蛋白质的合成，导致种子的萌发过程受到抑制[11]。研究表明，GAs和ABA调控种子萌发可能是源于靶标基因——α淀粉酶基因，因为它们均可调控α淀粉酶基因的转录，而且 GAs/ ABA的阈值范围能够调控植物种子的萌发及休眠。
因此，本试验参考蒋素梅[12]研究中GAs、ABA对水稻种子的处理方法，采用GAs、ABA单因素及二者协同作用对‘文图拉’及‘津南实芹’种子进行试验处理，通过统计不同处理的发芽率及发芽势，对这两种外源激素对芹菜种子萌发产生的影响进行分析，同时对芹菜25天苗中的α淀粉酶基因进行克隆及初步分析。
1 材料与方法
1．1 试验材料
美国西芹—‘文图拉’（青县青丰种业有限公司）、‘津南实芹’（大学伞形科蔬菜课题组）
1．2 试验方法
1．2．1 预处理
将‘文图拉’及‘津南实芹’种子分别在蒸馏水中浸泡24h，之后于20%次氯酸钠溶液中振荡30min，蒸馏水冲洗三次，每组50粒种子置于5mL离心管中，编号备用。
1．2．2 对照组处理
将经预处理过的两个品种种子于蒸馏水中浸泡24h后，蒸馏水冲洗三次，转入底部铺有两层吸水纸的一次性培养皿中，于15℃恒温培养箱中培养，编号为CK1、CK2（‘文图拉’种子编号为1、‘津南实芹’种子编号为2），并设三次重复。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 试验材料 2
1．2 试验方法 2
1．2．1 预处理 2
1．2．2 对照组处理 2
1．2．3 外源GAs、ABA单因素处理 2
1．2．4 外源GAs和ABA协同处理 3
1．2．5 RNA的提取及cDNA的合成 3
1．2．6 芹菜苗中α淀粉酶基因的克隆 3
1．2．7 序列分析 3
1．2．8 实时定量PCR反应 3
2 结果与分析 3
2．1 数据处理与分析 3
2．1．1 对照组处理 4
2．1．2 外源GAs、ABA单因素处理 4
2．1．3 外源GAs和ABA协同处理 5
2．1．4 芹菜苗中α淀粉酶基因的克隆 6
2．1．5 实时定量PCR 7
3 讨论 7
致谢 8
参考文献 8
ABA、GAs和温度协同作用对芹菜种子萌发的影响
引言
引言：芹菜(Apium graveolens L.)是伞形科的二年生草本植物，适宜在冷凉环境中生长，最宜的生长温度为1015℃，原产地为欧洲地中海一带的的沼泽地区。其营养价值非常高，含有丰富的维生素、矿 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
物质以及人体不可或缺的各种蛋白质及膳食纤维，是被公认的重要的天然保健品之一[1]。芹菜作为全球的十大蔬菜之一，在我国的栽培历史也十分悠久，而且分布范围很广，不少地区已经实行排开种植，做到了周年供应[2]。按照《中国农业统计资料》的记载[3]，截止到2008年，全国范围内的的芹菜栽培面积已经达到了860万亩，并有逐年上升的趋势，因此，成为了我国七大重点蔬菜栽培种类之一。
随着现代社会的不断发展前进，人们的经济水平逐渐提升，生活水平也获得了显著改善，对生活质量的要求也日益增强，各种蔬菜的消费量在持续增加，因此，芹菜的栽培面积也随之不断扩展。然而，由于芹菜种子颗粒较小，千粒重仅有0.41g，外皮革质化，含有大量的挥发油，致使其透水性很差[4]，导致发芽、出苗的速度十分缓慢且不整齐，发芽率一般仅有5060%，因此，严重影响了芹菜种植业的发展以及芹菜的产量和质量，同时，因为芹菜种子的休眠期较长，因此限制了芹菜种植业当年种子的及时生产和销售，对其造成了一定程度的损失。
Marianna G. Nikolaeva在对种子休眠的研究过程中，设计了一种分类系统，反映了休眠由种子的形态和生理特性决定的事实。Baskin基于这一方案，进一步提出了一个综合分类系统，其中包括五类种子休眠：形态休眠（Morphological dormancy，MD），生理休眠（Physiological dormancy，PD），物理休眠（Physical dormancy，PY），形态生理休眠（Morphophysiological dormancy，MPD）以及组合休眠（Combinational dormancy，PY + PD）[5]。而芹菜则属于其中的形态休眠（MD），形态休眠存在于具有未充分发育但分化的胚的种子中，这些胚不是生理上的休眠，而是需要时间来生长和发芽。
在研究人员不断地对种子萌发过程的科学研究中，为了提高种子的发芽率、发芽势及种子活力等，各位专家学者积累了相当丰富的经验，其中利用低温、化学药剂、物理搓种、射线照射等方法处理种子[6]，可促进种子萌发，而利用外源植物激素诱导种子萌发，作为一种新兴的处理方法，因外源激素处理可使酶的活性增强，促进种子萌发，提高种子的发芽率，发芽势及种子活力[7]，且激素处理方法简单易行，效果十分显著，同时不受季节与气候的影响和限制[8]，已经引起了国内外的普遍重视。研究人员在试验过程中发现，种子的休眠状态可以被GAs解除，而被ABA诱导和维持 [9]，GAs与ABA之间不仅存在着明显的拮抗作用，同时还彼此相互抑制着控制对方合成以及分解代谢的信号基因的表达[10]。种子发育过程中，内源ABA抑制种子萌发，促进贮藏蛋白的积累和胚的生长，促进热稳定蛋白的合成与积累，增强种子的逆境保护能力，提高种子活力。在萌发的种子内，内源ABA含量非常低，但对外源ABA的敏感性高，ABA抑制萌发必需的蛋白质的合成，导致种子的萌发过程受到抑制[11]。研究表明，GAs和ABA调控种子萌发可能是源于靶标基因——α淀粉酶基因，因为它们均可调控α淀粉酶基因的转录，而且 GAs/ ABA的阈值范围能够调控植物种子的萌发及休眠。
因此，本试验参考蒋素梅[12]研究中GAs、ABA对水稻种子的处理方法，采用GAs、ABA单因素及二者协同作用对‘文图拉’及‘津南实芹’种子进行试验处理，通过统计不同处理的发芽率及发芽势，对这两种外源激素对芹菜种子萌发产生的影响进行分析，同时对芹菜25天苗中的α淀粉酶基因进行克隆及初步分析。
1 材料与方法
1．1 试验材料
美国西芹—‘文图拉’（青县青丰种业有限公司）、‘津南实芹’（大学伞形科蔬菜课题组）
1．2 试验方法
1．2．1 预处理
将‘文图拉’及‘津南实芹’种子分别在蒸馏水中浸泡24h，之后于20%次氯酸钠溶液中振荡30min，蒸馏水冲洗三次，每组50粒种子置于5mL离心管中，编号备用。
1．2．2 对照组处理
将经预处理过的两个品种种子于蒸馏水中浸泡24h后，蒸馏水冲洗三次，转入底部铺有两层吸水纸的一次性培养皿中，于15℃恒温培养箱中培养，编号为CK1、CK2（‘文图拉’种子编号为1、‘津南实芹’种子编号为2），并设三次重复。
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