利用srap分子标记鉴别梨的芽变品种
梨是世界上栽培最广泛的水果之一，其具有丰富的品种资源。芽变是果树新品种选育的重要方法之一，为了有效鉴别梨的原种及其芽变品种，促进梨芽变育种的进程。本研究以19个（9组）梨及其芽变品种为试材，进行SRAP标记的鉴定。从19对SRAP引物组合中筛选出6对适宜的引物组合，并对所有梨样品进行了PCR扩增，共检测扩增条带数701条，其中多态性条带数94条，多态位点百分率为13.4%。应用NTSYS-pc2.1软件对所有样品的聚类分析，以0.67遗传相似系数为阈值，供试材料可聚为4组。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
前言1
1材料与方法2
1.1 材料2
1.2 方法2
1.2.1 基因组DNA提取2
1.2.2 PCR扩增及引物筛选2
1.2.3 扩增产物检测3
1.2.4 谱带记录及数据分析4
2 结果与分析4
2.1 SRAP引物筛选4
2.2 芽变品种SRAP扩增谱带分析4
2.3 芽变品种聚类分析5
3 讨论6
3.1 关于芽变类型的SRAP鉴定6
3.2 SRAP分析梨原种及其芽变品种的亲缘关系6
致谢7
参考文献7
附表19
利用SRAP分子标记鉴别梨的芽变品种
引言
前言
梨为蔷薇科(Rosaceae)，梨亚科(Maloideae)，梨属植物，世界梨属植物约有60余种，分布于欧、亚、北美洲及南半球温带地区。我国目前梨属有18个种，其中原产我国的有13个种[1]，而且我国梨的生产总量、栽培面积和出口量均居世界首位[2]，其栽培面积和产量仅次于柑橘和苹果，位居第三位，具有重要的经济价值。
果树芽变是果树生理学研究的重要内容，它与生产紧密联系，对果树上的一些具有特异性状的芽变资源进行深入研究，对于解析重要性状性状的生理及分子机制、加速果树育种进程具 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
有重要的理论和实践意义。与传统杂交育种方式相比，芽变育种可以避开童期等因素的干扰，可在基本保持原有品种综合性状同时针对个别缺点进行改良，能大大简化育种程序，显著缩短育种时间，节省大量人力、物力和土地；此外新的芽变品种还可以不断丰富原有的种质资源库，给杂交育种提供新的选择亲本。我国通过芽变选育新品种已经取得了一定的成就，例如在鸭梨的自交亲和芽变‘金坠’，库尔勒香梨的自交亲和芽变‘沙01’，‘安久’的红皮芽变‘红安久’等等[3]。
多年来，研究者从形态学、生物化学、孢粉学和酶学等不同的角度进行了梨及其芽变品种的鉴定，取得了一定的进展。随着分子生物学技术的快速发展，各种分子标记技术不断出现，大大提高了科研人员对植物进行遗传分析研究的能力，其中相关序列扩增多态性SRAP ( Sequence Related Amplified Polymorphism )是一种高效的分子标记类型。SRAP是一种新型的基于PCR技术的标记，由美国加州大学蔬菜作物系Li与Quiros[4]于2001年提出，该标记利用一对引物对基因组 DNA 进行扩增。它具有操作简便、高度共显性、遍布整个基因组、便于克隆测序目标片断等特点。SRAP克服了RAPD重复性差、多态性低，SSR技术引物开发费时费力，AFLP技术复杂、成本昂贵的缺点。目前，它已在植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱构建、重要性状基因标记定位与克隆以及比较基因组学研究等众多领域得到广泛应用[516]。但目前SRAP标记在果树芽变鉴定中的应用还较少，在梨芽变鉴定中的研究更少。
本研究拟采用SRAP标记，对梨的19个（共9组）原种及其芽变品种进行分子鉴定，并从DNA水平研究其亲缘关系。研究结果将为今后开展梨的芽变品种鉴别及其亲缘关系分析提供有效的标记。
1 材料和方法
1.1 材料
试验材料为大学江浦农场采集的19个梨品种资源。采集供试材料健康植株的幼嫩叶片，于－70℃冰箱中保存备用。供试品种编号、名称及来源详见表 1。
表1 19个梨属植物材料
Table 1 19 materials of pear cultivars
分组
编号
原种/芽变
名称
来源
分组
编号
原种/芽变
名称
来源
1
1
原种
鸭梨
河北
6
12
原种
巴梨
英国
2
芽变
金坠梨
河北
13
芽变
红巴梨
澳大利亚
3
闫庄鸭梨
河北
7
14
原种
考密斯
法国
2
4
原种
库尔勒香梨
新疆
15
芽变
早红考密斯
英国
5
芽变
沙01
河北
8
16
原种
黄花
浙江
3
6
原种
南果梨
辽宁
17
芽变
大果黄花
江苏
7
芽变
红南果
辽宁
9
18
原种
安久
美国
4
8
原种
早酥
河南
19
芽变
红安久
美国
9
芽变
六月酥
河南
5
10
原种
新高
日本
11
芽变
金秋梨
湖南
1.2 方法
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
前言1
1材料与方法2
1.1 材料2
1.2 方法2
1.2.1 基因组DNA提取2
1.2.2 PCR扩增及引物筛选2
1.2.3 扩增产物检测3
1.2.4 谱带记录及数据分析4
2 结果与分析4
2.1 SRAP引物筛选4
2.2 芽变品种SRAP扩增谱带分析4
2.3 芽变品种聚类分析5
3 讨论6
3.1 关于芽变类型的SRAP鉴定6
3.2 SRAP分析梨原种及其芽变品种的亲缘关系6
致谢7
参考文献7
附表19
利用SRAP分子标记鉴别梨的芽变品种
引言
前言
梨为蔷薇科(Rosaceae)，梨亚科(Maloideae)，梨属植物，世界梨属植物约有60余种，分布于欧、亚、北美洲及南半球温带地区。我国目前梨属有18个种，其中原产我国的有13个种[1]，而且我国梨的生产总量、栽培面积和出口量均居世界首位[2]，其栽培面积和产量仅次于柑橘和苹果，位居第三位，具有重要的经济价值。
果树芽变是果树生理学研究的重要内容，它与生产紧密联系，对果树上的一些具有特异性状的芽变资源进行深入研究，对于解析重要性状性状的生理及分子机制、加速果树育种进程具 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
有重要的理论和实践意义。与传统杂交育种方式相比，芽变育种可以避开童期等因素的干扰，可在基本保持原有品种综合性状同时针对个别缺点进行改良，能大大简化育种程序，显著缩短育种时间，节省大量人力、物力和土地；此外新的芽变品种还可以不断丰富原有的种质资源库，给杂交育种提供新的选择亲本。我国通过芽变选育新品种已经取得了一定的成就，例如在鸭梨的自交亲和芽变‘金坠’，库尔勒香梨的自交亲和芽变‘沙01’，‘安久’的红皮芽变‘红安久’等等[3]。
多年来，研究者从形态学、生物化学、孢粉学和酶学等不同的角度进行了梨及其芽变品种的鉴定，取得了一定的进展。随着分子生物学技术的快速发展，各种分子标记技术不断出现，大大提高了科研人员对植物进行遗传分析研究的能力，其中相关序列扩增多态性SRAP ( Sequence Related Amplified Polymorphism )是一种高效的分子标记类型。SRAP是一种新型的基于PCR技术的标记，由美国加州大学蔬菜作物系Li与Quiros[4]于2001年提出，该标记利用一对引物对基因组 DNA 进行扩增。它具有操作简便、高度共显性、遍布整个基因组、便于克隆测序目标片断等特点。SRAP克服了RAPD重复性差、多态性低，SSR技术引物开发费时费力，AFLP技术复杂、成本昂贵的缺点。目前，它已在植物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱构建、重要性状基因标记定位与克隆以及比较基因组学研究等众多领域得到广泛应用[516]。但目前SRAP标记在果树芽变鉴定中的应用还较少，在梨芽变鉴定中的研究更少。
本研究拟采用SRAP标记，对梨的19个（共9组）原种及其芽变品种进行分子鉴定，并从DNA水平研究其亲缘关系。研究结果将为今后开展梨的芽变品种鉴别及其亲缘关系分析提供有效的标记。
1 材料和方法
1.1 材料
试验材料为大学江浦农场采集的19个梨品种资源。采集供试材料健康植株的幼嫩叶片，于－70℃冰箱中保存备用。供试品种编号、名称及来源详见表 1。
表1 19个梨属植物材料
Table 1 19 materials of pear cultivars
分组
编号
原种/芽变
名称
来源
分组
编号
原种/芽变
名称
来源
1
1
原种
鸭梨
河北
6
12
原种
巴梨
英国
2
芽变
金坠梨
河北
13
芽变
红巴梨
澳大利亚
3
闫庄鸭梨
河北
7
14
原种
考密斯
法国
2
4
原种
库尔勒香梨
新疆
15
芽变
早红考密斯
英国
5
芽变
沙01
河北
8
16
原种
黄花
浙江
3
6
原种
南果梨
辽宁
17
芽变
大果黄花
江苏
7
芽变
红南果
辽宁
9
18
原种
安久
美国
4
8
原种
早酥
河南
19
芽变
红安久
美国
9
芽变
六月酥
河南
5
10
原种
新高
日本
11
芽变
金秋梨
湖南
1.2 方法
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