大丽花离体快繁技术的初步研究
摘要：本试验研究了大丽花离体快繁中的不同外植体类型和灭菌方法的效果，及不同激素配比等因素对大丽花增殖和生根的影响，结果表明，用75%的酒精消毒30s，再用0.1%升汞消毒4min为较好的外植体消毒方法，污染率在25%下。同时以带腋芽茎段为外植体材料较好，成活率可达77%。适宜的壮苗培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，30d后试管苗可以长到5-8cm。最佳的增殖培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，繁殖系数为6.31。适宜的生根培养基是：1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，30d后生根率达到97.4%，生根数达2.7条。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法1
1.1试验材料 2
1.2试验方法 2
1.2.1无菌苗的获取2
1.2.2壮苗培养基2
1.2.3增殖培养基2
1.2.4生根培养基2
2结果分析3
2.1灭菌实验3
2.2壮苗培养基4
2.3增殖培养基5
2.4生根培养基6
3讨论 7
致谢8
参考文献9
大丽花离体快繁技术的初步研究
引言
引言 大丽花（Dahlia pinnata）为菊科大丽花属多年生球根花卉，其花色艳丽，花型多变，品种极其丰富，常作花境、花坛或盆栽观赏使用。大丽花属植物具有很高的综合利用价值，在园林绿化、食品工业、生物能源和医药研究等方面发挥了很大的作用[1,2]。大丽花为异源八倍体，基因型高度杂合[3]，生产繁殖上以扦插和分球为主，此种方式不仅繁殖系数低，还会造成病毒的积累和病毒病的广泛传播及品种退化等问题，给生产和经营者带来很大的经济损失，因此，增加扩繁系数、杜绝病毒病的传播及培育新型无毒品种已成为大丽花产销过程中一个亟待解决的问题[4]。鉴于大丽花新品种快速繁殖以满足推广的需要，以及新品种选育对快繁和再生体系建
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
立的需要，均要求建立高效的大丽花快繁体系。但目前国内外研究最多的是大丽花属植物的分类、栽培繁殖、遗传育种及病虫害方面的研究，而关于组培快繁及离体再生方面的研究较少。
1 材料与方法
1.1 实验材料
供试验材料品种为‘斗牛舞’，种球购自浙江缘艺吧，定植于大学锁石基地。
1.2 试验方法
1.2.1 无菌苗的获取
选取长势相同的茎尖、带腋芽茎段、叶片、花托、花瓣作为外植体消毒实验材料。消毒方法：先将外植体流水冲洗2h待用，然后在超净工作台中使用75%酒精消毒30s后，使用不同灭菌方法对外植体进行灭菌处理，分别以0.1%升汞（3、4、5、6min）、4%次氯酸钠(4、5、6、7min)、15%过氧化氢(6、8、10、12min)为茎段、茎尖的灭菌方法；以0.1%升汞（2、3、4、5min）、4%次氯酸钠(4、5、6、7min)、15%过氧化氢(5、7、9、11min)为叶片、花瓣的灭菌方法，并用无菌水清洗5遍进行消毒实验。接种于MS基本培养基上，蔗糖30g/L、琼脂7.0g/L，pH5.8。每瓶接种4个外植体（叶片每盘接种5个），每组接种20瓶（盘），放置于22℃，光照2000xl培养室中培养，，15天后统计污染和褐化数。
1.2.2 壮苗培养基
选取经过初代培养后长势相同的无菌苗作为母株，统一将茎尖、带腋芽茎段切成1.5cm大小，接种至培养基上，每瓶接种3个，每组20瓶，每组实验重复3次，30天后测定植株生长高度。
壮苗培养基以MS为基本培养基，蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：S1: 6BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；S2: 6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；S3: 6BA1.0 mg/L+ NAA0.5mg/L；S4: 6BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；S5: 6BA2.0mg/L+NAA0.5 g/L；S6: 6BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L；S7: 6BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L；S8为空白对照。
1.2.3 增殖培养基
当无菌苗长到68cm高时，选取健康的组培苗的茎尖、带腋芽茎段为实验材料，统一切成1.5cm大小，分别接种在不同激素水平的培养基上，进行最佳激素配比的筛选，每种组合接种20瓶，每瓶接种3个。观察30天后它们的出芽情况。这样重复3次，统计品均出芽数并计算增殖系数。以MS为基本培养基，蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：T1: 6BA1.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T2: 6BA1.0 mg/L+NAA0.5mg/L；T3: 6BA1.0 mg/L+NAA0.8mg/L；T4: 6BA3.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T5: 6BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L；T6: 6BA3.0 mg/L+NAA0.8mg/L；T7: 6BA4.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T8: 6BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L；T9: 6BA4.0mg/L+NAA0.8mg/L。
1.2.4 生根培养基
探究不同基本培养基和不同的激素配比对无菌苗生根的影响，分别以MS、1/2MS与不同激素配比组合，选取健壮且生长状况相似的组培苗，截取2cm左右的茎尖或茎段，作为实验材料，接种在不同激素水平的培养基中，每组接种20瓶，每瓶接种3个，30天后观察各组的生根情况，统计根长、根的数量以及生根率。生根培养基中蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：R1:MS；R2:MS+NAA0.2mg/ L；R3:1/2MS培养基；R4:1/2MS+NAA0.2mg / L；R5:1/2MSNAA0.5mg/ L； R6:1/2MSNAA0.8mg/ L。
材料均在2000 3000lx，白天16h夜晚8h，温度在22℃的培养室中培养。
2 结果与分析
2.1 灭菌实验
表31 不同灭菌方法对茎段、茎尖外植体污染率和褐化率的影响
Table 31 Effect of different sterilization methods on contamination and browning rate of
Stem section and shoot tips explants
灭菌药剂
灭菌时间(min)
污染数(个)
褐化数(个)
成活率(%)
0.1%升汞
3
5
1.6
62
4
2.6
1.6
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法1
1.1试验材料 2
1.2试验方法 2
1.2.1无菌苗的获取2
1.2.2壮苗培养基2
1.2.3增殖培养基2
1.2.4生根培养基2
2结果分析3
2.1灭菌实验3
2.2壮苗培养基4
2.3增殖培养基5
2.4生根培养基6
3讨论 7
致谢8
参考文献9
大丽花离体快繁技术的初步研究
引言
引言 大丽花（Dahlia pinnata）为菊科大丽花属多年生球根花卉，其花色艳丽，花型多变，品种极其丰富，常作花境、花坛或盆栽观赏使用。大丽花属植物具有很高的综合利用价值，在园林绿化、食品工业、生物能源和医药研究等方面发挥了很大的作用[1,2]。大丽花为异源八倍体，基因型高度杂合[3]，生产繁殖上以扦插和分球为主，此种方式不仅繁殖系数低，还会造成病毒的积累和病毒病的广泛传播及品种退化等问题，给生产和经营者带来很大的经济损失，因此，增加扩繁系数、杜绝病毒病的传播及培育新型无毒品种已成为大丽花产销过程中一个亟待解决的问题[4]。鉴于大丽花新品种快速繁殖以满足推广的需要，以及新品种选育对快繁和再生体系建
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
立的需要，均要求建立高效的大丽花快繁体系。但目前国内外研究最多的是大丽花属植物的分类、栽培繁殖、遗传育种及病虫害方面的研究，而关于组培快繁及离体再生方面的研究较少。
1 材料与方法
1.1 实验材料
供试验材料品种为‘斗牛舞’，种球购自浙江缘艺吧，定植于大学锁石基地。
1.2 试验方法
1.2.1 无菌苗的获取
选取长势相同的茎尖、带腋芽茎段、叶片、花托、花瓣作为外植体消毒实验材料。消毒方法：先将外植体流水冲洗2h待用，然后在超净工作台中使用75%酒精消毒30s后，使用不同灭菌方法对外植体进行灭菌处理，分别以0.1%升汞（3、4、5、6min）、4%次氯酸钠(4、5、6、7min)、15%过氧化氢(6、8、10、12min)为茎段、茎尖的灭菌方法；以0.1%升汞（2、3、4、5min）、4%次氯酸钠(4、5、6、7min)、15%过氧化氢(5、7、9、11min)为叶片、花瓣的灭菌方法，并用无菌水清洗5遍进行消毒实验。接种于MS基本培养基上，蔗糖30g/L、琼脂7.0g/L，pH5.8。每瓶接种4个外植体（叶片每盘接种5个），每组接种20瓶（盘），放置于22℃，光照2000xl培养室中培养，，15天后统计污染和褐化数。
1.2.2 壮苗培养基
选取经过初代培养后长势相同的无菌苗作为母株，统一将茎尖、带腋芽茎段切成1.5cm大小，接种至培养基上，每瓶接种3个，每组20瓶，每组实验重复3次，30天后测定植株生长高度。
壮苗培养基以MS为基本培养基，蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：S1: 6BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；S2: 6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；S3: 6BA1.0 mg/L+ NAA0.5mg/L；S4: 6BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；S5: 6BA2.0mg/L+NAA0.5 g/L；S6: 6BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L；S7: 6BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L；S8为空白对照。
1.2.3 增殖培养基
当无菌苗长到68cm高时，选取健康的组培苗的茎尖、带腋芽茎段为实验材料，统一切成1.5cm大小，分别接种在不同激素水平的培养基上，进行最佳激素配比的筛选，每种组合接种20瓶，每瓶接种3个。观察30天后它们的出芽情况。这样重复3次，统计品均出芽数并计算增殖系数。以MS为基本培养基，蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：T1: 6BA1.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T2: 6BA1.0 mg/L+NAA0.5mg/L；T3: 6BA1.0 mg/L+NAA0.8mg/L；T4: 6BA3.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T5: 6BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L；T6: 6BA3.0 mg/L+NAA0.8mg/L；T7: 6BA4.0 mg/L+NAA0.2mg/L；T8: 6BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L；T9: 6BA4.0mg/L+NAA0.8mg/L。
1.2.4 生根培养基
探究不同基本培养基和不同的激素配比对无菌苗生根的影响，分别以MS、1/2MS与不同激素配比组合，选取健壮且生长状况相似的组培苗，截取2cm左右的茎尖或茎段，作为实验材料，接种在不同激素水平的培养基中，每组接种20瓶，每瓶接种3个，30天后观察各组的生根情况，统计根长、根的数量以及生根率。生根培养基中蔗糖水平为30g/L，琼脂水平为7.0g/L，激素水平为：R1:MS；R2:MS+NAA0.2mg/ L；R3:1/2MS培养基；R4:1/2MS+NAA0.2mg / L；R5:1/2MSNAA0.5mg/ L； R6:1/2MSNAA0.8mg/ L。
材料均在2000 3000lx，白天16h夜晚8h，温度在22℃的培养室中培养。
2 结果与分析
2.1 灭菌实验
表31 不同灭菌方法对茎段、茎尖外植体污染率和褐化率的影响
Table 31 Effect of different sterilization methods on contamination and browning rate of
Stem section and shoot tips explants
灭菌药剂
灭菌时间(min)
污染数(个)
褐化数(个)
成活率(%)
0.1%升汞
3
5
1.6
62
4
2.6
1.6
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