无土栽培不同染色体倍性半夏生物量与有机酸的初步研究
目录
摘要2
关键词2
引言2
1 材料与方法2
1．1 材料2
1．2 方法2
1．2．1 半夏染色体数量观察3
1．2．3 半夏生长指标测定3
1．2．4 半夏琥珀酸含量测定3
1．3 数据处理4
2 结果与分析4
2．1 半夏染色体数目和倍性观察4
2．2 不同染色体倍性对半夏生长指标的比较5
2．2．1 不同染色体倍性半夏叶面积与须根数测定结果5
2．2．2 不同染色体倍性半夏块茎质量测定结果5
2．3 染色体倍性对琥珀酸含量的影响6
3 讨论6
3．1 不同染色体倍性半夏生长指标的比较6
3．2 染色体倍性对琥珀酸含量的影响6
3．2．1 关于半夏染色体的数目6
3．2．2 染色体倍性对琥珀酸含量的影响6
致谢7
参考文献7
［Abstract］7
引言
无土栽培不同染色体倍性半夏生物量与有机酸的初步研究
学 生 司敏洁
[摘要] 目的：比较无土栽培不同染色体倍性半夏生物量与琥珀酸含量的差异。方法：HPLC谱法测定琥珀酸含量。BSG低渗去壁法测定染色体数量。结果：在相同培养条件下，(1)高倍体半夏块茎质量大于低倍体半；(2)九倍体半夏琥珀酸含量为0.0620%高于六倍体半夏琥珀酸含量0.0078%。结论：(1)染色体倍性与半夏块茎质量正相关；(2)染色体倍性与半夏琥珀酸含量正相关。
[关键词]：半夏；无土栽培；生物量；琥珀酸；染色体数目
半夏（Pinellia Rhizoma（PR））为天南星科半夏属植物半夏（Pinellia ternate (Thunb．)Breit．）的天然块茎[1]。主产于我国四川、山东、河南、陕西、云南、贵州等省[2]。半夏为中医临床常用中药，其性辛、温，具有燥湿化痰、消痞散结之功[3]。半夏的主要化学成分有核苷类、生物碱类和有机酸类[45]。天南星科半夏属染色体数目约9种，
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该属染色体数目变异幅度较大，在属内、种间、种内呈现多样性变异[6]。十六倍体半夏块茎中鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷与麻黄碱的绝对含量均高于八倍体半夏及野生半夏，而这3种成分相对于其总量的比率稳定，说明十六倍体半夏在染色体数目增倍后，所含有效药用成分的增加是同步的[7]。针对不同染色体倍性半夏生物量的差异进行初步研究，可提高无土栽培半夏产量。测定不同染色体倍性半夏琥珀酸的含量，选择有效成分含量较高的品种进行无土栽培，为半夏良种繁育提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料
实验材料引自徐州，经吴健鉴定为半夏（Pinellia ternate ( Thunb．) Breit．）的新鲜块茎。
1．1．1 仪器 GXZ260A只能光照培养箱、 LI3000C叶面积测定仪(LICDR)、FA1104分析天平（上海精科天平）、KQ250B微波超声仪（昆山市超声仪器公司）、TGL16G离心机（飞鸽）FC20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司，包括输液泵LC20AT Liquid Pump、紫外检测器SPD20A、岛津色谱柱150×4.6mm、手动进样阀7725i）、Lichrospher C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱、Olympus BX51显微镜。
1．1．2试剂 琥珀酸对照品（上海东懿化学试剂公司，纯度≥99.5%，分析纯，生产批号141211）、磷酸二氢钾（K2HPO4）、硫酸钾(K2SO4)、硝酸铵（NH4NO3）等试剂均为分析纯，甲醇（色谱纯）。
1．2 方法
1．2．1半夏染色体测定 选取3×6育苗盆（口径×深度×下口径=6×5×3cm），育苗盆中每穴装普通沙100g，2/3深度处埋两个新鲜半夏块茎，共36个样品，放入光照培养箱（温度28±1℃，光照强度20002500lx，光照时间18hd1）定期浇适量水保持块茎活力。待其萌发后，开始施加营养液，间隔5天施加一次，每次每盆10mL，共施加5次。
营养液配方：氮肥、磷肥微量元素等与霍格兰营养液配方相同。钾肥使用硫酸钾(K2SO4)，K元素浓度为2mmolL1。
待半夏块茎次生根生长至0.5~1cm，剪下放入0.02molL1 8羟基喹啉水溶液中，室温下处理3h，卡诺固定液固定24h。
染色体标本制备:固定的材料先用蒸馏水冲洗，用0．075molL1 HCl溶液在60℃水浴下解离30min，再用蒸馏水洗净浸泡7min，滴1滴卡宝染色液染色，常规压片。采用Olympus BX51显微镜观察。染色体数目按植株分别统计。
1．2．2 半夏生长指标测定
在生长期内观察植株长势，测定半夏叶面积、须根数和块茎质量。
1．2．3 半夏琥珀酸含量测定
对照品溶液的制备 精密称取琥珀酸对照品适量，加蒸馏水配制成每1mL约含4mg琥珀酸的对照品溶液。
样品溶液的制备 取生长情况相似的半夏块茎除去次生根后，80℃下烘干，打粉，过40目筛，得样品粉末。取样品粉末12g，置于干燥的三角烧瓶中,准确加入60mL石油醚，过滤，滤弃石油醚,粉末挥干石油醚，加入60mL95%乙醇，超声提取30min，滤过;残渣再加入40mL95%乙醇两次, 超声提取20min，滤过；合并滤液，回收乙醇至干，残渣加入适量的蒸馏水溶解并定容至2mL，溶液用0.45μm微孔滤膜滤过后，滤液作为供试品溶液备用。
色谱条件 色谱柱为Lichrospher C18（250 mm×4．6 mm，5 μm）。流动相为甲醇0.02molL1磷酸二氢钾溶液(pH=2.5，7:93)；柱温30℃，流速0.5mLmin1，检测波长为214 nm，进样量10 μL。在该色谱条件下，琥珀酸与其他成分分离效果良好，对照品和样品的HPLC图见图1。
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