不同地理种源活血丹uplc指纹图谱研究
[目的]建立活血丹UPLC指纹图谱的测定方法，为不同产地活血丹的质量控制提供较全面的评价。[方法]色谱柱ACQUITY UPLC HSSTM T3(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)，流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱，检测波长326 nm，柱温40℃，体积流量0.4 mL·min-1，运用相似度评价、聚类分析、主成分分析3种方法对16批连钱草饮片的指纹图谱进行研究。[结果] 建立了活血丹的专属性UPLC指纹图谱，确定了21个共有峰，对照指纹图谱相似度范围在0.825~0.994；16批活血丹样品质量差异较大，可聚为四大类，不同产地间样品均具有一定差异。[结论]建立的UPLC指纹图谱检测方法高效、快速、准确，专属性强，为连钱草质量控制及评价提供了更加有效的可行方法。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 3
1 材料与方法 3
1．1 仪器与试药 3
1．1．1 仪器 3
1．1．2 药品 3
1．2 实验样品 3
2 结果与分析 4
2．1 溶液的制备 4
2．1．1 对照品溶液的制备 4
2．1．2 供试品溶液的制备 4
2．2 色谱条件 4
2．3 方法学考察 4
2．3．1 精密度考察 4
2．3．2 重复性考察 4
2．3．3 稳定性考察 5
2．4 样品测定及指纹图谱的建立 5
2．5 活血丹指纹图谱的评价 6
2．5．1 相似度评价 6
2．5．2 聚类分析 8
2．5．3 主成分分析 9
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
图1 16批活血丹色谱峰匹配图 5
图2 活血丹的共有模式图谱 6
图3 聚类分析结果 8
图4 地理信息标记图 9
图5 主成分得分图 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
表1 16批次活血丹样品的来源 4
表2 活血丹样品指纹图谱相似度评价 7
表3 主成分特征值及方差 10
表4 主成分载荷矩阵 10
表5 样本主成分得分 11
不同地理种源活血丹UPLC指纹图谱研究
引言
连钱草为唇形科植物活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.的干燥地上部分，春至秋季采收，除去杂质，晒干。其性辛，微苦，微寒；归肝、肾、膀胱经；具有利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿的功能，有治疗热淋，石淋，湿热黄疸，跌扑损伤的作用[1]；现代药理学研究表明，连钱草对金黄色葡萄球菌极度敏感，对痢疾杆菌、绿脓杆菌和伤寒杆菌中度敏感，具有抗炎、抑菌、降血糖、降胆固醇等药理活性[24]；临床上主要用于利小便，治疗膀胱结石、肾结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸、胆囊炎、胆石症、烧伤等。连钱草以三萜酸类、黄酮类为主要化学成分，并含有多种挥发油、醇类和甾体类化合物[511]。
中药指纹图谱（fingerprints of traditional Chinese medicine）指采用某种特定的分析手段，获得经过适当处理后的中药材或中成药的用于标示该中药材或中成药特征共有峰的色谱或光谱图[12]。中药指纹图谱分析是针对中医药基础理论知识建立的一种新的质量控制模式，是根据中药方剂不仅多为复方，而且有效成分复杂，非单一活性成分所能表达、非线性的特点建立的。这种多成分、多指标的质量控制模式，比仅仅测定某种单一成分所获得的信息量更丰富，能比较全面的反映中药材或中成药所含化学成分的种类和数量，更加有效地体现出中药成分的整体性和综合性，从而更全面地评价中药及其制剂的品质[1314]。借用了法医学的指纹鉴定概念的中药指纹图谱鉴别，不仅具备个体的、绝对的唯一性，更重要的是说明了物种特征的专属性与同种个体之间的相似性。它与当前常规中药质量控制模式的主要区别在于，它强调的是多个成分而非单一的成分，以相对恒定的峰面积和保留时间的完整色谱或综合的光谱特征为研究对象，即指纹图谱的整体性特征，以及在共同特征的基础上个体之间又互有差异的模糊性特征[15]。
鉴于中药活性成分复杂性、体内的代谢浓度低、内源性杂质较多，给中药的现代化和国际化带来很大挑战。近年来，指纹图谱技术已被广泛用于中药的质量控制领域，因其可较全面地反映中药材及植物药产品的药效学物质特征，评价其稳定性及一致性而受到国际的认可[1617]。美国食品药品监督管理局（FDA）及世界卫生组织（WHO）相关的草药指南中均提到草药制剂如果其有效成分不明，可以用指纹图谱反映产品质量的一致，用于检测中药及其相关产品的质量[1820]。超高效液相色谱（UPLC）比高效液相色谱（HPLC）具有更高的分离速度、精确度与灵敏度，可大大缩短分析时间，实现指纹图谱的快速获得，提高中药质量评价效率，为高效、快速评价连钱草药材的质量提供参考。
本实验将以连钱草为研究材料，运用中药指纹图谱技术，利用UPLC对来自16批来自不同产地的连钱草进行快速测定，建立了连钱草的UPLC指纹图谱，在数据标准化处理的基础上，进一步结合相似度分析（SA）、聚类分析（HCA）和主成分分析（PCA）3种方法对不同产地连钱草的质量进行评价，以期能更为全面地评价连钱草药材的质量。
1 材料与方法
1．1 仪器与试药
1．1．1 仪器 ACQUITY UPLCTM液相色谱仪，配有四元高压泵系统，在线脱气系统，自动进样恒温管理器，柱温箱和TUV检测器，数据采集与处理采用Empower 3.0色谱工作站（美国Waters公司）；超声波清洗器（KQ3200E型，昆山市超声仪器有限公司）；分析天平（XS204型，美国Mettler Toledo公司）；纯水仪（MilliQ?型，美国Millipore公司）；真空干燥箱（DZF6050型，上海博讯医疗设备厂）。
1．1．2 药品 乙腈为色谱纯（德国Merck公司）；磷酸为色谱纯（天津市光复精细化工研究所）。绿原酸（批号110753200413）、咖啡酸（批号110885200102）、迷迭香酸（批号111871201404）对照品均购自中国食品药品检定研究院。
1．2 实验样品连钱草样品于2015年9月至2015年11月期间进行采集，经大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为连钱草基原植物活血丹G.longituba (Nakai) Kupr，活血丹样品来源见表1。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 3
1 材料与方法 3
1．1 仪器与试药 3
1．1．1 仪器 3
1．1．2 药品 3
1．2 实验样品 3
2 结果与分析 4
2．1 溶液的制备 4
2．1．1 对照品溶液的制备 4
2．1．2 供试品溶液的制备 4
2．2 色谱条件 4
2．3 方法学考察 4
2．3．1 精密度考察 4
2．3．2 重复性考察 4
2．3．3 稳定性考察 5
2．4 样品测定及指纹图谱的建立 5
2．5 活血丹指纹图谱的评价 6
2．5．1 相似度评价 6
2．5．2 聚类分析 8
2．5．3 主成分分析 9
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
图1 16批活血丹色谱峰匹配图 5
图2 活血丹的共有模式图谱 6
图3 聚类分析结果 8
图4 地理信息标记图 9
图5 主成分得分图 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
表1 16批次活血丹样品的来源 4
表2 活血丹样品指纹图谱相似度评价 7
表3 主成分特征值及方差 10
表4 主成分载荷矩阵 10
表5 样本主成分得分 11
不同地理种源活血丹UPLC指纹图谱研究
引言
连钱草为唇形科植物活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.的干燥地上部分，春至秋季采收，除去杂质，晒干。其性辛，微苦，微寒；归肝、肾、膀胱经；具有利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿的功能，有治疗热淋，石淋，湿热黄疸，跌扑损伤的作用[1]；现代药理学研究表明，连钱草对金黄色葡萄球菌极度敏感，对痢疾杆菌、绿脓杆菌和伤寒杆菌中度敏感，具有抗炎、抑菌、降血糖、降胆固醇等药理活性[24]；临床上主要用于利小便，治疗膀胱结石、肾结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸、胆囊炎、胆石症、烧伤等。连钱草以三萜酸类、黄酮类为主要化学成分，并含有多种挥发油、醇类和甾体类化合物[511]。
中药指纹图谱（fingerprints of traditional Chinese medicine）指采用某种特定的分析手段，获得经过适当处理后的中药材或中成药的用于标示该中药材或中成药特征共有峰的色谱或光谱图[12]。中药指纹图谱分析是针对中医药基础理论知识建立的一种新的质量控制模式，是根据中药方剂不仅多为复方，而且有效成分复杂，非单一活性成分所能表达、非线性的特点建立的。这种多成分、多指标的质量控制模式，比仅仅测定某种单一成分所获得的信息量更丰富，能比较全面的反映中药材或中成药所含化学成分的种类和数量，更加有效地体现出中药成分的整体性和综合性，从而更全面地评价中药及其制剂的品质[1314]。借用了法医学的指纹鉴定概念的中药指纹图谱鉴别，不仅具备个体的、绝对的唯一性，更重要的是说明了物种特征的专属性与同种个体之间的相似性。它与当前常规中药质量控制模式的主要区别在于，它强调的是多个成分而非单一的成分，以相对恒定的峰面积和保留时间的完整色谱或综合的光谱特征为研究对象，即指纹图谱的整体性特征，以及在共同特征的基础上个体之间又互有差异的模糊性特征[15]。
鉴于中药活性成分复杂性、体内的代谢浓度低、内源性杂质较多，给中药的现代化和国际化带来很大挑战。近年来，指纹图谱技术已被广泛用于中药的质量控制领域，因其可较全面地反映中药材及植物药产品的药效学物质特征，评价其稳定性及一致性而受到国际的认可[1617]。美国食品药品监督管理局（FDA）及世界卫生组织（WHO）相关的草药指南中均提到草药制剂如果其有效成分不明，可以用指纹图谱反映产品质量的一致，用于检测中药及其相关产品的质量[1820]。超高效液相色谱（UPLC）比高效液相色谱（HPLC）具有更高的分离速度、精确度与灵敏度，可大大缩短分析时间，实现指纹图谱的快速获得，提高中药质量评价效率，为高效、快速评价连钱草药材的质量提供参考。
本实验将以连钱草为研究材料，运用中药指纹图谱技术，利用UPLC对来自16批来自不同产地的连钱草进行快速测定，建立了连钱草的UPLC指纹图谱，在数据标准化处理的基础上，进一步结合相似度分析（SA）、聚类分析（HCA）和主成分分析（PCA）3种方法对不同产地连钱草的质量进行评价，以期能更为全面地评价连钱草药材的质量。
1 材料与方法
1．1 仪器与试药
1．1．1 仪器 ACQUITY UPLCTM液相色谱仪，配有四元高压泵系统，在线脱气系统，自动进样恒温管理器，柱温箱和TUV检测器，数据采集与处理采用Empower 3.0色谱工作站（美国Waters公司）；超声波清洗器（KQ3200E型，昆山市超声仪器有限公司）；分析天平（XS204型，美国Mettler Toledo公司）；纯水仪（MilliQ?型，美国Millipore公司）；真空干燥箱（DZF6050型，上海博讯医疗设备厂）。
1．1．2 药品 乙腈为色谱纯（德国Merck公司）；磷酸为色谱纯（天津市光复精细化工研究所）。绿原酸（批号110753200413）、咖啡酸（批号110885200102）、迷迭香酸（批号111871201404）对照品均购自中国食品药品检定研究院。
1．2 实验样品连钱草样品于2015年9月至2015年11月期间进行采集，经大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为连钱草基原植物活血丹G.longituba (Nakai) Kupr，活血丹样品来源见表1。
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