忍冬叶中绿原酸的提取工艺研究
摘 要本论文主要是为了研究中药忍冬叶（honeysuckle）中绿原酸的最佳提取工艺，以便进一步提高该药材的药用价值。本实验利用微波炉提取忍冬叶中的绿原酸，紫外可见分光光度计测定忍冬叶的绿原酸含量，采用正交实验得出忍冬叶中绿原酸最佳提取工艺。实验结果表明，忍冬叶中绿原酸的最佳提取工艺条件为用3倍量的80%乙醇在微波输出功率为500W的条件下预处理80S；然后加25倍量的水在70℃的水浴中浸提3次，每次14min。在此最佳实验条件下进行提取实验，提取得到绿原酸含量为6.142mg／g。
目 录
1 文献综述
1.1本草考证 1
1.2 资源分布 1
1.3 化学成分 1
1.3.1 有机酸类 1
1.3.2 黄酮类 2
1.3.3 环烯醚萜类 2
1.3.4 挥发油类 2
1.4 生物活性 3
1.4.1心血管保护作用 3
1.4.2 抗氧化作用 3
1.4.3 抗紫外和抗辐射作用 3
1.4.4 抗诱变及抗癌作用 3
1.4.5 抗肿瘤作用 4
1.4.6 抗病原微生物作用 4
1.4.7 抗炎作用 4
1.4.8 降压降脂作用 4
1.4.9 对免疫系统的作用 5
1.4.10 其他作用 5
1.5 本课题研究的意义 5
2 实验研究
2.1 实验药材、仪器与试剂 6
2.1.1 药材 6
2.1.2 仪器、试剂 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 忍冬叶预处理 6
2.2.2 绿原酸提取方法 6
2.2.3 绿原酸含量的测定 6
2.2.4 绿原酸最大吸收波长的确定 7
2.2.5 绿原酸回归方程的建立 8
2.2.6 绿原酸含量的计算方法 8
2.2.7单因素和正交实验确定最佳提取工艺 8
结 论 18
参考文献 19
致 谢 22< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
br /> 1 文献综述
1.1本草考证
忍冬叶为忍冬科忍冬属植物忍冬(honeysuckle )的干燥叶片[1]。味甘，入肺、心、胃经，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风的功效，可用于胀满下疾、温病发热，热毒痈疡和肿瘤等病症。忍冬叶作为中药应用已有几千年的历史，在我国最早记录忍冬的医书为梁代陶弘景著作的《本草经集注》，书中以“忍冬”之名予以记述，指出忍冬的药用部位为忍冬藤和忍冬叶。梁陶弘景集《名医别录》载，列为上品，曰：“似藤生，凌冬不凋”，“十二月采，阴干”，推知当时使用的乃为忍冬茎叶，而非忍冬的花[2]。现代医学研究表明，忍冬叶含有绿原酸、木犀草素苷等药理活性成分，对溶血性链球菌、金黄葡萄球菌等多种致病菌及上呼吸道感染致病病毒等有较强的抑制力，另外还可增强免疫力、抗早孕、护肝、抗肿瘤、消炎、解热、止血（凝血）、抑制肠道吸收胆固醇等作用。忍冬叶在临床上有抗菌，消炎，抗病毒，清热解毒，疏风通络的功效[3,4]。
1.2 资源分布
忍冬叶在我国资源丰富，分布地区较广，遍及全国十几个省份；据国外书籍记载，日本和朝鲜均有有忍冬叶的分布。在我国不少地区已栽培生产，山东、河南、河北，安徽、陕西、广东等地均能种植。主产于山东、河南、安徽等地区，尤其以封丘所产忍冬叶最为著名。其它产区虽然也有资源，但其采摘加工还没有形成规模，可供商品较少。
1.3 化学成分
忍冬叶中含有的生物活性成分十分丰富，可以分为有机酸类、黄酮类、环烯醚萜类、其他化学成分如忍冬叶还含有（Mg、P、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn）等无机元素以及蛋白质等，其含量与花的含量极为相近，但Zn仅在叶中检出，Fe元素的含量远远高于花和部分其他生物活性物质等[5]。其中研究比较多的成分主要有下列几种。
1.3.1 有机酸类
忍冬叶中的有机酸类物质主要有绿原酸、异绿原酸和咖啡酸等成分。其中，异绿原酸是一混合物，其异构体有7种；咖啡酸是绿原酸的水解产物。马俊利等 [6]采用反复硅胶柱色谱法和Sephadex LH20柱色谱法，从忍冬叶中分离得到了包括绿原酸在内的5个咖啡酰基奎宁酸类化合物，其中5O咖啡酰基奎宁酸甲酯（5Ocaffeoyl quinic acid methyl ester）和1,3O二咖啡酰基奎宁酸（1,3diOcaffeoyl quinic acid）为首次从该属植物中分离得到，(3,4O二咖啡酰基奎宁酸甲酯3,4diOcaffeoyl quinic acid methyl ester）和(3,4O二咖啡酰基奎宁酸3,4diOcaffeoyl quinic acid）为首次从该植物中分离得到。忍冬不同部位均含有绿原酸，按含量依次为花＞叶＞茎＞根；同一生长期叶中绿原酸含量约为花的60％～70％，以8～9月份含量最高[7]。干叶中绿原酸的含量则与加工方法有关，干燥及时的叶为绿色，绿原酸含量高，而棕绿色的叶含量偏低。
1.3.2 黄酮类
忍冬叶的黄酮类物质主要有木犀草素、木犀草苷和忍冬素等。忍冬叶中黄酮类成分含量丰富，王丽婷等[8]花中槲皮素和木犀草素的含量，忍冬叶中二者的含量分别为27.53μg/g 和147.3μg/g，优于花中20.94μg/g和41.66μg/g。郭玉等[9]采用高效液相色谱法测定了同一株忍冬来源的花和叶中木犀草苷含量，叶中含量0.326%，为花中含量的3倍。
1.3.3 环烯醚萜类
忍冬叶中含有环烯醚苷、马钱苷等成分。Machida K [10]分离到（E）氧代开联番木鳖苷和4个新的环烯醚苷类，分别是：L苯丙氨酸四乙酰开联番木鳖苷、7O（4βD吡喃葡糖氧基3茴香醛）四乙酰开联番木鳖苷酸、6O7α羟基当药酰氧番木鳖苷、（Z）氧代开联番木鳖苷。
1.3.4 挥发油类
肖敏等[11]采用水蒸气蒸馏乙醚萃取法，用提取挥发油的装置提取出忍冬叶中挥发油成分，共识别出26种化合物。主要成分包括有机酸和有机酸酯，其他成分主要有酮、醛和醇类化合物，其中有机酸酯类化合物占29.44%，有机酸类化合物占 27.56%，其他类如烷烃、醇、酮、醛类化合物占22.3%。忍冬叶中主要的挥发油成分包括棕榈酸、9,12,15十八碳三稀酸甲基酯、9,12十八碳二稀酸乙基酯、十六烷酸乙基酯、亚油酸以及芳樟醇等。钟玲[12]等运用超临界CO2流体萃取技术对忍冬叶中的绿原酸和脂溶性成分进行萃取，并用GCMS对提取物的脂溶性成分进行分析并鉴定出39种化合物，主要成分有邻苯二甲酸单乙基己酯、反式角鲨烯、十八烷、植物醇和邻苯二甲酸二异丁酯等。
目 录
1 文献综述
1.1本草考证 1
1.2 资源分布 1
1.3 化学成分 1
1.3.1 有机酸类 1
1.3.2 黄酮类 2
1.3.3 环烯醚萜类 2
1.3.4 挥发油类 2
1.4 生物活性 3
1.4.1心血管保护作用 3
1.4.2 抗氧化作用 3
1.4.3 抗紫外和抗辐射作用 3
1.4.4 抗诱变及抗癌作用 3
1.4.5 抗肿瘤作用 4
1.4.6 抗病原微生物作用 4
1.4.7 抗炎作用 4
1.4.8 降压降脂作用 4
1.4.9 对免疫系统的作用 5
1.4.10 其他作用 5
1.5 本课题研究的意义 5
2 实验研究
2.1 实验药材、仪器与试剂 6
2.1.1 药材 6
2.1.2 仪器、试剂 6
2.2 实验方法 6
2.2.1 忍冬叶预处理 6
2.2.2 绿原酸提取方法 6
2.2.3 绿原酸含量的测定 6
2.2.4 绿原酸最大吸收波长的确定 7
2.2.5 绿原酸回归方程的建立 8
2.2.6 绿原酸含量的计算方法 8
2.2.7单因素和正交实验确定最佳提取工艺 8
结 论 18
参考文献 19
致 谢 22< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
br /> 1 文献综述
1.1本草考证
忍冬叶为忍冬科忍冬属植物忍冬(honeysuckle )的干燥叶片[1]。味甘，入肺、心、胃经，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风的功效，可用于胀满下疾、温病发热，热毒痈疡和肿瘤等病症。忍冬叶作为中药应用已有几千年的历史，在我国最早记录忍冬的医书为梁代陶弘景著作的《本草经集注》，书中以“忍冬”之名予以记述，指出忍冬的药用部位为忍冬藤和忍冬叶。梁陶弘景集《名医别录》载，列为上品，曰：“似藤生，凌冬不凋”，“十二月采，阴干”，推知当时使用的乃为忍冬茎叶，而非忍冬的花[2]。现代医学研究表明，忍冬叶含有绿原酸、木犀草素苷等药理活性成分，对溶血性链球菌、金黄葡萄球菌等多种致病菌及上呼吸道感染致病病毒等有较强的抑制力，另外还可增强免疫力、抗早孕、护肝、抗肿瘤、消炎、解热、止血（凝血）、抑制肠道吸收胆固醇等作用。忍冬叶在临床上有抗菌，消炎，抗病毒，清热解毒，疏风通络的功效[3,4]。
1.2 资源分布
忍冬叶在我国资源丰富，分布地区较广，遍及全国十几个省份；据国外书籍记载，日本和朝鲜均有有忍冬叶的分布。在我国不少地区已栽培生产，山东、河南、河北，安徽、陕西、广东等地均能种植。主产于山东、河南、安徽等地区，尤其以封丘所产忍冬叶最为著名。其它产区虽然也有资源，但其采摘加工还没有形成规模，可供商品较少。
1.3 化学成分
忍冬叶中含有的生物活性成分十分丰富，可以分为有机酸类、黄酮类、环烯醚萜类、其他化学成分如忍冬叶还含有（Mg、P、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn）等无机元素以及蛋白质等，其含量与花的含量极为相近，但Zn仅在叶中检出，Fe元素的含量远远高于花和部分其他生物活性物质等[5]。其中研究比较多的成分主要有下列几种。
1.3.1 有机酸类
忍冬叶中的有机酸类物质主要有绿原酸、异绿原酸和咖啡酸等成分。其中，异绿原酸是一混合物，其异构体有7种；咖啡酸是绿原酸的水解产物。马俊利等 [6]采用反复硅胶柱色谱法和Sephadex LH20柱色谱法，从忍冬叶中分离得到了包括绿原酸在内的5个咖啡酰基奎宁酸类化合物，其中5O咖啡酰基奎宁酸甲酯（5Ocaffeoyl quinic acid methyl ester）和1,3O二咖啡酰基奎宁酸（1,3diOcaffeoyl quinic acid）为首次从该属植物中分离得到，(3,4O二咖啡酰基奎宁酸甲酯3,4diOcaffeoyl quinic acid methyl ester）和(3,4O二咖啡酰基奎宁酸3,4diOcaffeoyl quinic acid）为首次从该植物中分离得到。忍冬不同部位均含有绿原酸，按含量依次为花＞叶＞茎＞根；同一生长期叶中绿原酸含量约为花的60％～70％，以8～9月份含量最高[7]。干叶中绿原酸的含量则与加工方法有关，干燥及时的叶为绿色，绿原酸含量高，而棕绿色的叶含量偏低。
1.3.2 黄酮类
忍冬叶的黄酮类物质主要有木犀草素、木犀草苷和忍冬素等。忍冬叶中黄酮类成分含量丰富，王丽婷等[8]花中槲皮素和木犀草素的含量，忍冬叶中二者的含量分别为27.53μg/g 和147.3μg/g，优于花中20.94μg/g和41.66μg/g。郭玉等[9]采用高效液相色谱法测定了同一株忍冬来源的花和叶中木犀草苷含量，叶中含量0.326%，为花中含量的3倍。
1.3.3 环烯醚萜类
忍冬叶中含有环烯醚苷、马钱苷等成分。Machida K [10]分离到（E）氧代开联番木鳖苷和4个新的环烯醚苷类，分别是：L苯丙氨酸四乙酰开联番木鳖苷、7O（4βD吡喃葡糖氧基3茴香醛）四乙酰开联番木鳖苷酸、6O7α羟基当药酰氧番木鳖苷、（Z）氧代开联番木鳖苷。
1.3.4 挥发油类
肖敏等[11]采用水蒸气蒸馏乙醚萃取法，用提取挥发油的装置提取出忍冬叶中挥发油成分，共识别出26种化合物。主要成分包括有机酸和有机酸酯，其他成分主要有酮、醛和醇类化合物，其中有机酸酯类化合物占29.44%，有机酸类化合物占 27.56%，其他类如烷烃、醇、酮、醛类化合物占22.3%。忍冬叶中主要的挥发油成分包括棕榈酸、9,12,15十八碳三稀酸甲基酯、9,12十八碳二稀酸乙基酯、十六烷酸乙基酯、亚油酸以及芳樟醇等。钟玲[12]等运用超临界CO2流体萃取技术对忍冬叶中的绿原酸和脂溶性成分进行萃取，并用GCMS对提取物的脂溶性成分进行分析并鉴定出39种化合物，主要成分有邻苯二甲酸单乙基己酯、反式角鲨烯、十八烷、植物醇和邻苯二甲酸二异丁酯等。
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