正红菇多糖提取研究
正红菇多糖提取研究[20200408172238]
摘 要
正红菇是闽西北的重要红菇种类之一, 是一种非常有名的食用菌。长期以来被用于一种名贵的药用真菌, 具有很好的营养和保健作用。目前，针对红菇多糖的提取研究还较少，因此本研究用热浸提法对红菇多糖的提取及初步纯化进行了研究，为正红菇的开发利用提供实验依据。
本课题以红菇为实验材料，采用热水浸提法提取红菇中的多糖，从而利用正交实验方法来得出提取多糖的最佳提取条件为：提取温度为90℃、浸提时间5h、料液比1：40、乙醇醇沉体积为1：3，在最佳条件下，正红菇多糖提取率为3.164%。将提取的粗多糖经除蛋白后进行了活性碳脱色研究，分别对活性碳的用量、脱色温度和时间进行了优化实验，得出最优化脱色条件为：1%活性炭用量，脱色温度为30℃，脱色时间50min效果最佳，根据最佳条件下多糖的脱色率为89%，多糖的损失率为2.037%。
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关键字:红菇多糖提取正交试验
目 录
1.引言 1
1.1食用菌多糖 1
1.2食用菌多糖的活性 1
1.2.1免疫调节功能 1
1.2.2抗肿瘤作用 1
1.2.3抗菌与抗病毒作用 2
1.2.4抗氧化和抗衰老作用 2
1.2.5降血糖和将血脂的作用 2
1.3食用菌多糖的提取、分离和纯化 2
1.3.1食用菌多糖提取方法 2
1.3.2总结 4
1.3.3食用菌多糖的纯化 4
1.4 多糖研究的目的和意义 5
2.材料与方法 6
2.1实验材料与仪器 6
2.2实验方法 6
2.2.1样品准备 7
2.2.2实验步骤 7
2.2.3红菇多糖提取的单因素实验 7
2.2.4 正交实验的设计 7
2.2.5 红菇多糖的活性炭脱色实验 7
3.结果与分析 9
3.1单因素试验的结果分析 9
3.1.1料液比对多糖得率的影响 9
3.1.2提取温度对多糖得率的影响 9
3.1.3提取时间对多糖得率的影响 10
3.1.4乙醇醇沉体积对多糖得率的影响 10
3.1.5提取条件优化结果 11
3.1.6 Sevag法去除蛋白质 12
3.1.7活性炭用量对多糖脱色的影响 13
3.1.8活性炭脱色温度对多糖脱色的影响 13
3.1.9活性炭脱色时间对多糖脱色的影响 13
3.1.10验证实验 14
3.1.11实验展望 14
4.结论 15
参考文献 16
致谢 17
1.引言
食用菌是世界最具发展的一种公认的营养和保健的食品。在农业增产、农民增收方面，食用菌产业是非常具有潜力的产业。食用菌是一种子实体的高等真菌，其中含有的营养成分比较高，是绿色和健康的食品【1】。多糖是在食用菌中有生物学活性的成分，而且多糖是天然的生物制剂，在生物方面起到了巨大的作用。
1.1 食用菌多糖
当前，一些食用菌多糖已作为生物制剂进入临床实验阶段，用来针对食用菌多糖的抗肿瘤及其免疫调节等生物学活性，通过增强人体免疫能力来防止癌症的发生。对于癌症患者和医疗单位这些食用菌多糖是非常重要的。其次，多糖制剂的量在很少的时候，可以利用生物技术来进行大规模的生产，当前在市场中食用菌多糖的制剂非常受到人们的欢迎，因为食用菌多糖可以对提高全民的身体健康。在此我们对食用菌多糖的提取方法、结构和生物活性进行了概括，为提取红菇多糖的研究提供理论基础。
1.2 食用菌多糖的生物活性
在很早之前食用菌就被人们开始研究，在研究中大量的数据表明食用菌多糖是无毒的，它在生物学和医学等方面都起着至关重要的作用。在研究中得到了食用菌多糖在抗肿瘤、杀菌、抗氧化等方面有很好的效果。
1.2.1免疫调节功能
食用菌的多糖可以产生许多的细胞因子，这些因子能够将巨噬细胞和淋巴等细胞激活出来，起到了免疫的功能。Miyakoshi H[2]等人在研究中表示，香菇多糖在免疫细胞中是非常有代表性的具有免疫功能的多糖。
1.2.2抗肿瘤作用
在如今的社会中，人们始终关注着如何防患和治疗肿瘤。目前发现的能够具有抗癌效果的食用菌大约有150多种，其发挥抗肿瘤的功能主要通过两个方面，一个是多糖可以直接产生毒性来杀死肿瘤细胞，另一个是多糖间接性的将肿瘤细胞通过免疫调节剂来清除。
1.2.3杀菌与抗病毒作用
目前食用菌多糖大多都可以抑制病毒，比较多的一般是艾滋病毒(HIV-1)、单纯疱疹病毒、流感病毒等病毒[3]。食用菌多糖能够提高人体的免疫能力从而直接杀灭细菌和病毒。
目前对于杀菌灭毒这方面，研究比较具体化的是香菇多糖，研究发现香菇多糖对非常多的病毒和菌类都起着非常好的效果。
1.2.4 抗氧化和抗衰老作用
当前，很多医学人士都发现了疾病发生都会与人体的自由代谢发生失控和脂类氧化比较严重相关联。由于体内的正常的细胞被氧化自由基破坏了，导致了人体的疾病和衰老的过早来临。在抗氧化方面，食用菌多糖是一种天然无毒无害的抗氧化多糖，它能够提高抗氧化酶的活性和降低脂类过氧化产物，这样人体就不会受到氧化破坏。
1.2.5降血糖降血脂作用
在目前的研究中显示，食用菌多糖在降低血糖浓度，胆固醇含量和防止凝血等方面都有很好的前景。Kim[4]、曾凯宏[5]等从姬松茸中提取出p．葡聚糖，再从p一葡聚糖中分离出一种寡糖，实验结果显示B．葡聚糖和寡糖两者都能提高葡萄糖的代谢，降低血糖。目前，食用菌多糖在降血糖方面的作用受到了社会非常高的关注，因为它没有毒副作用，而且能够起到预防糖尿病的作用。
1.3 食用菌多糖的提取、分离和纯化
1.3.1 食用菌多糖提取方法
国内外对食用菌多糖的研究及开发利用方面的进展很快，并且研究的基础是食用菌多糖的提取和利用，细胞内释放穿过基质扩散到溶剂中的过程是食用菌多糖的提取过程，酸、碱提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶法提取法、热水提取法等一系列方法是现在许多的食用菌提取的方法。
1.3.1.1 酸、碱提取法
目前多糖的提取一般不大采用酸溶液。因为在酸性条件下，多糖的糖苷键比较容易发生水解。但有的生产中采用了酸提法，比如果胶的工业化。细胞、细胞壁在酸性或碱性会充分溶胀、直至破碎，从而能够使真菌菌丝体在酸性或碱性溶液中，增加游离的多糖，提高真菌多糖的提取率[7]。研究表明，提取酸性多糖用碱性水溶液是最佳的，而且利用该方法提取的多糖能够有一定的生物活性。
1.3.1.2 超声波辅助提取法
超声波的高频振荡能够使真菌细胞组织内部产生局部高温、高压的环境，能够使他破裂，从而将其内部的有效成分释放出来。超声波的空化现象、机械振动及热效应等特性是超声波提取多糖的主要性质[8]。在空化现象中产生的几千帕的压力，使微小气泡发生破裂并且破坏了原料的细胞壁，这样快速使多糖流出。[9]超声波能产生非常多的次级效应加速有效成分的扩散释放，对多糖的提取起着很好的作用。
1.3.1.3 微波辅助提取法
微波提取法是目前比较新的一种提取方法，因为微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁的内部时，细胞内部温度升高使压力增大，当压力达到细胞的承受能力时，细胞壁会发生破裂，从而使位于细胞内部的多糖从细胞中释放出来[10]。
在微波提取法的实验中，微波功率、提取时间、以及提取次数等因素是主要的影响因素。
1.3.1.4 酶法提取
利用酶反应的高度专一的性质，可以使植物细胞壁发生水解，将其中的有效成分充分释放出来，常用的酶有纤维素酶、蛋白酶等。对于有效成分含量很低，或是溶剂影响大，容易发生结构变化的植物有效成分的提取比较适合用酶法提取。[11]当前将酶解与各种技术相结合来提取多糖，可以提高粗多糖的提取率，如超声酶法提取、酶法与膜分离技术相结合等。
1.3.1.5 热水提取
摘 要
正红菇是闽西北的重要红菇种类之一, 是一种非常有名的食用菌。长期以来被用于一种名贵的药用真菌, 具有很好的营养和保健作用。目前，针对红菇多糖的提取研究还较少，因此本研究用热浸提法对红菇多糖的提取及初步纯化进行了研究，为正红菇的开发利用提供实验依据。
本课题以红菇为实验材料，采用热水浸提法提取红菇中的多糖，从而利用正交实验方法来得出提取多糖的最佳提取条件为：提取温度为90℃、浸提时间5h、料液比1：40、乙醇醇沉体积为1：3，在最佳条件下，正红菇多糖提取率为3.164%。将提取的粗多糖经除蛋白后进行了活性碳脱色研究，分别对活性碳的用量、脱色温度和时间进行了优化实验，得出最优化脱色条件为：1%活性炭用量，脱色温度为30℃，脱色时间50min效果最佳，根据最佳条件下多糖的脱色率为89%，多糖的损失率为2.037%。
*查看完整论文请 +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
关键字:红菇多糖提取正交试验
目 录
1.引言 1
1.1食用菌多糖 1
1.2食用菌多糖的活性 1
1.2.1免疫调节功能 1
1.2.2抗肿瘤作用 1
1.2.3抗菌与抗病毒作用 2
1.2.4抗氧化和抗衰老作用 2
1.2.5降血糖和将血脂的作用 2
1.3食用菌多糖的提取、分离和纯化 2
1.3.1食用菌多糖提取方法 2
1.3.2总结 4
1.3.3食用菌多糖的纯化 4
1.4 多糖研究的目的和意义 5
2.材料与方法 6
2.1实验材料与仪器 6
2.2实验方法 6
2.2.1样品准备 7
2.2.2实验步骤 7
2.2.3红菇多糖提取的单因素实验 7
2.2.4 正交实验的设计 7
2.2.5 红菇多糖的活性炭脱色实验 7
3.结果与分析 9
3.1单因素试验的结果分析 9
3.1.1料液比对多糖得率的影响 9
3.1.2提取温度对多糖得率的影响 9
3.1.3提取时间对多糖得率的影响 10
3.1.4乙醇醇沉体积对多糖得率的影响 10
3.1.5提取条件优化结果 11
3.1.6 Sevag法去除蛋白质 12
3.1.7活性炭用量对多糖脱色的影响 13
3.1.8活性炭脱色温度对多糖脱色的影响 13
3.1.9活性炭脱色时间对多糖脱色的影响 13
3.1.10验证实验 14
3.1.11实验展望 14
4.结论 15
参考文献 16
致谢 17
1.引言
食用菌是世界最具发展的一种公认的营养和保健的食品。在农业增产、农民增收方面，食用菌产业是非常具有潜力的产业。食用菌是一种子实体的高等真菌，其中含有的营养成分比较高，是绿色和健康的食品【1】。多糖是在食用菌中有生物学活性的成分，而且多糖是天然的生物制剂，在生物方面起到了巨大的作用。
1.1 食用菌多糖
当前，一些食用菌多糖已作为生物制剂进入临床实验阶段，用来针对食用菌多糖的抗肿瘤及其免疫调节等生物学活性，通过增强人体免疫能力来防止癌症的发生。对于癌症患者和医疗单位这些食用菌多糖是非常重要的。其次，多糖制剂的量在很少的时候，可以利用生物技术来进行大规模的生产，当前在市场中食用菌多糖的制剂非常受到人们的欢迎，因为食用菌多糖可以对提高全民的身体健康。在此我们对食用菌多糖的提取方法、结构和生物活性进行了概括，为提取红菇多糖的研究提供理论基础。
1.2 食用菌多糖的生物活性
在很早之前食用菌就被人们开始研究，在研究中大量的数据表明食用菌多糖是无毒的，它在生物学和医学等方面都起着至关重要的作用。在研究中得到了食用菌多糖在抗肿瘤、杀菌、抗氧化等方面有很好的效果。
1.2.1免疫调节功能
食用菌的多糖可以产生许多的细胞因子，这些因子能够将巨噬细胞和淋巴等细胞激活出来，起到了免疫的功能。Miyakoshi H[2]等人在研究中表示，香菇多糖在免疫细胞中是非常有代表性的具有免疫功能的多糖。
1.2.2抗肿瘤作用
在如今的社会中，人们始终关注着如何防患和治疗肿瘤。目前发现的能够具有抗癌效果的食用菌大约有150多种，其发挥抗肿瘤的功能主要通过两个方面，一个是多糖可以直接产生毒性来杀死肿瘤细胞，另一个是多糖间接性的将肿瘤细胞通过免疫调节剂来清除。
1.2.3杀菌与抗病毒作用
目前食用菌多糖大多都可以抑制病毒，比较多的一般是艾滋病毒(HIV-1)、单纯疱疹病毒、流感病毒等病毒[3]。食用菌多糖能够提高人体的免疫能力从而直接杀灭细菌和病毒。
目前对于杀菌灭毒这方面，研究比较具体化的是香菇多糖，研究发现香菇多糖对非常多的病毒和菌类都起着非常好的效果。
1.2.4 抗氧化和抗衰老作用
当前，很多医学人士都发现了疾病发生都会与人体的自由代谢发生失控和脂类氧化比较严重相关联。由于体内的正常的细胞被氧化自由基破坏了，导致了人体的疾病和衰老的过早来临。在抗氧化方面，食用菌多糖是一种天然无毒无害的抗氧化多糖，它能够提高抗氧化酶的活性和降低脂类过氧化产物，这样人体就不会受到氧化破坏。
1.2.5降血糖降血脂作用
在目前的研究中显示，食用菌多糖在降低血糖浓度，胆固醇含量和防止凝血等方面都有很好的前景。Kim[4]、曾凯宏[5]等从姬松茸中提取出p．葡聚糖，再从p一葡聚糖中分离出一种寡糖，实验结果显示B．葡聚糖和寡糖两者都能提高葡萄糖的代谢，降低血糖。目前，食用菌多糖在降血糖方面的作用受到了社会非常高的关注，因为它没有毒副作用，而且能够起到预防糖尿病的作用。
1.3 食用菌多糖的提取、分离和纯化
1.3.1 食用菌多糖提取方法
国内外对食用菌多糖的研究及开发利用方面的进展很快，并且研究的基础是食用菌多糖的提取和利用，细胞内释放穿过基质扩散到溶剂中的过程是食用菌多糖的提取过程，酸、碱提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶法提取法、热水提取法等一系列方法是现在许多的食用菌提取的方法。
1.3.1.1 酸、碱提取法
目前多糖的提取一般不大采用酸溶液。因为在酸性条件下，多糖的糖苷键比较容易发生水解。但有的生产中采用了酸提法，比如果胶的工业化。细胞、细胞壁在酸性或碱性会充分溶胀、直至破碎，从而能够使真菌菌丝体在酸性或碱性溶液中，增加游离的多糖，提高真菌多糖的提取率[7]。研究表明，提取酸性多糖用碱性水溶液是最佳的，而且利用该方法提取的多糖能够有一定的生物活性。
1.3.1.2 超声波辅助提取法
超声波的高频振荡能够使真菌细胞组织内部产生局部高温、高压的环境，能够使他破裂，从而将其内部的有效成分释放出来。超声波的空化现象、机械振动及热效应等特性是超声波提取多糖的主要性质[8]。在空化现象中产生的几千帕的压力，使微小气泡发生破裂并且破坏了原料的细胞壁，这样快速使多糖流出。[9]超声波能产生非常多的次级效应加速有效成分的扩散释放，对多糖的提取起着很好的作用。
1.3.1.3 微波辅助提取法
微波提取法是目前比较新的一种提取方法，因为微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁的内部时，细胞内部温度升高使压力增大，当压力达到细胞的承受能力时，细胞壁会发生破裂，从而使位于细胞内部的多糖从细胞中释放出来[10]。
在微波提取法的实验中，微波功率、提取时间、以及提取次数等因素是主要的影响因素。
1.3.1.4 酶法提取
利用酶反应的高度专一的性质，可以使植物细胞壁发生水解，将其中的有效成分充分释放出来，常用的酶有纤维素酶、蛋白酶等。对于有效成分含量很低，或是溶剂影响大，容易发生结构变化的植物有效成分的提取比较适合用酶法提取。[11]当前将酶解与各种技术相结合来提取多糖，可以提高粗多糖的提取率，如超声酶法提取、酶法与膜分离技术相结合等。
1.3.1.5 热水提取
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