茶树菇多肽的制备及其活性研究
目 录
1 引言 1
2 多肽的国内外研究现状 1
3 活性多肽的生理功能 1
4 多肽的制备方法 2
5 本课题研究的目的、意义和内容 2
5.1本课题研究的目的和意义 3
5.2本课题研究的内容 3
6 材料和方法 3
6.1主要原料、设备和试剂 3
6.2试验方法 4
7 结果与分析 8
7.1茶树菇粗蛋白的制备 8
7.2响应面优化酶解工艺 9
7.3多肽制备结果分析 15
7.4茶树菇多肽活性研究 17
结论 23
致谢 24
参考文献 24
1 引言
肽是由两个或两个以上的氨基酸以肽键连接而形成的化合物，在人体内起着重要的生理作用。通常由三个或三个以上氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做多肽[1]。
多肽分为生物活性多肽和人工合成多肽两种。人工合成的多肽很多是没有活性，而生物提取的多肽一般具有很强的活性，所以被称为活性肽。活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，若活性多肽减少会使人体机能发生重要改变，主要影响是：免疫能力降低、消化不良、新陈代谢紊乱、生长发育障碍等等。进而使身体健康的人产生疾病，使身患疾病的人难以康复。此外，由于活性肽还作用于神经系统，缺乏的话会导致人体动作迟缓，头脑不再聪慧，直接引起人身体各部位逐渐出现全面衰老，引发各种疾病[1]。多肽可被人体完全吸收，我们应充分利用多肽的吸收机制，提高人类的健康水平。
2 多肽的国内外研究现状
活性肽的开发应用是当前生物工程领域的热门课题，生物活性肽在医疗保健和食 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
品、化妆品等行业被广泛应用，前景十分广阔。上世纪80年代，日本开始将多肽应用于食品，随后在美国、西欧等发达国家多肽食品也方兴未艾。目前多肽食品已经形成产业，许多著名的公司开发出一系列的多肽产品，产品主要有两个方面，一类是多肽药品和试剂，世界上现已有100多种多肽药物上市，纯度非常高并且也十分昂贵；另一类是含有功能性多肽保健食品和普通食品 [2]。
我国于20世纪80年代中后期开展了大量有关大豆多肽的研究，并在大豆蛋白肽的酶法生产、功能特性和生理活性取得一定成就。武汉肽类物质研究所致力于多肽物质的研究、开发及应用，目前肽类物质研究所已完成中药蛋白多肽系列、植物蛋白多肽系列、海产蛋白多肽系列、多肽系列食品添加剂、多肽系列调料添加剂、多肽系列植物生长调节剂等几十个成品和原料粉产品的研制。目前，我国多肽产品的开发应用日益广泛，国内的多肽产品市场正在逐步形成，但由于技术水平低、规模小等因素的局限，多肽的研究仍处于初步阶段，有待于进一步发展。
3 活性多肽的生理功能
活性多肽在人体内发挥着巨大的生理作用，其生理功能主要有一下几点：
1、调节体内的水分、电解质平衡；调节内分泌系统与神经系统；
2、具有抗菌作用，为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体并可消除体内突变细胞，甚至可以杀死肿瘤细胞，提高免疫功能；
3、促进蛋白质、酶、酵素的合成与调控；
4、具有抗氧化性，消除体内多余的自由基，可预防脂质过度氧化、延缓衰老等；
5、在细胞间、器官间传递信息；
6、降血压、降血脂、降血脂等，预防心脑血管、糖尿病等疾病；
7、易被人体消化吸收，可改善消化系统、治疗慢性胃肠道疾病；
8、促进造血功能，治疗贫血，防止血小板聚集，能提高血红细胞的载氧能力等[1]。
4 多肽的制备方法
目前，国内外制备多肽的方法主要有：蛋白酶水解法、化学合成法、基因重组法、分离提取法等。龚吉军等人[5]研究菜籽多肽的制备方法，确定了最佳酶解条件，在该条件下氨基酸态氮生成率高达34.64%，通过茶籽蛋白酶酶解制备的茶籽多肽可强烈清除超氧自由基和羟基自由；班玉凤等人[6]利用Alcalase酶酶解制备大豆蛋白寡肽，确定了最佳酶解条件，其水解度达到了24.1%；刘大川等[7]也利用碱性蛋白酶酶解富硒菜籽制备蛋白肽，水解度达32.51%，制得的富硒菜籽蛋白肽几乎都是小分子多肽，且分子量分布较好，分子量均在1500D以下。综上，蛋白酶水解法的应用较为广泛，本课题将采用酶解法制备茶树菇多肽。
5 本课题研究的目的、意义和内容
5.1 本课题研究的目的和意义
多肽来源十分丰富，在自然界的动物、植物和微生物中广泛存在，且原料的组成十分复杂。活性多肽一直是生物工程领域的研究热点，因为它生理功效明显、对人体的安全性高，可开发成功能性食品、医疗药品和化妆品等附加值高的生物制品[8]。随着科技的快速发展，从天然生物中提取多肽的手段不断得到提高，新的肽类物质相继被发现且应用于防病治病之中。但目前我国对多肽的研究水还不够深入，技术水平有待提高，资源利用率较低，很多蛋白资源被直接当作粗饲料、燃料甚至作为废弃物丢弃，十分浪费。茶树菇是一种常见的食用菌，且营养丰富。梁一[9]等人通过H22 荷瘤小鼠模型对茶树菇活性 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
蛋白的抗肿瘤活性进行了研究；张松[10]等人研究发现，茶树菇活性提取物具有抗氧化和延缓衰老的作用。本课题研究茶树菇多肽的制备方法和活性，旨在为以后开发新的具有保健功能的食品提供实验依据，并且对自然界各种来源蛋白质的综合利用具有重要的现实意义。
5.2 本课题研究的内容
1. 从茶树菇中提取粗蛋白质，选择最适宜酶，通过Box-Behnken响应面分析法，确定最佳酶解条件；
2. 采用离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树菇多肽进行提纯；
3. 研究茶树菇多肽的生物活性和物理性质。
6 材料和方法
6.1 主要原料、仪器和试剂
6.1.1 主要原料及材料
名称 生产厂家
茶树菇 绿谷田家淘宝店
透析袋 志达实验器材商城
80万u/g酶活力 木瓜蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
20万u/g酶活力 中性蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
20万u/g酶活力 碱性蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
25万u/g酶活力 胰蛋白酶 南京奥多福尼生物科技有限公司
3000u/g酶活力 胃蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
DEAE-52阴离子交换树脂 南京奥多福尼生物科技有限公司
葡聚糖凝胶SephadexG-25 南京奥多福尼生物科技有限公司
6.1.2 主要仪器
仪器 厂家
DS-1型组织捣碎机 上海标本模型厂
GCM-25M-B型高速冷冻离心机 上海赫田科学仪器有限公司
凯氏定氮仪 淮安国药化学试剂有限公司
2. 0.08mmol/L DPPH溶液的配制：
精密称取DPPH4.0mg，用无水乙醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得到浓度为0.08mmol/L的DPPH溶液，避光保存，备用。
④ 茶树菇多肽起泡性和泡沫稳定性的研究
1 引言 1
2 多肽的国内外研究现状 1
3 活性多肽的生理功能 1
4 多肽的制备方法 2
5 本课题研究的目的、意义和内容 2
5.1本课题研究的目的和意义 3
5.2本课题研究的内容 3
6 材料和方法 3
6.1主要原料、设备和试剂 3
6.2试验方法 4
7 结果与分析 8
7.1茶树菇粗蛋白的制备 8
7.2响应面优化酶解工艺 9
7.3多肽制备结果分析 15
7.4茶树菇多肽活性研究 17
结论 23
致谢 24
参考文献 24
1 引言
肽是由两个或两个以上的氨基酸以肽键连接而形成的化合物，在人体内起着重要的生理作用。通常由三个或三个以上氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做多肽[1]。
多肽分为生物活性多肽和人工合成多肽两种。人工合成的多肽很多是没有活性，而生物提取的多肽一般具有很强的活性，所以被称为活性肽。活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，若活性多肽减少会使人体机能发生重要改变，主要影响是：免疫能力降低、消化不良、新陈代谢紊乱、生长发育障碍等等。进而使身体健康的人产生疾病，使身患疾病的人难以康复。此外，由于活性肽还作用于神经系统，缺乏的话会导致人体动作迟缓，头脑不再聪慧，直接引起人身体各部位逐渐出现全面衰老，引发各种疾病[1]。多肽可被人体完全吸收，我们应充分利用多肽的吸收机制，提高人类的健康水平。
2 多肽的国内外研究现状
活性肽的开发应用是当前生物工程领域的热门课题，生物活性肽在医疗保健和食 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
品、化妆品等行业被广泛应用，前景十分广阔。上世纪80年代，日本开始将多肽应用于食品，随后在美国、西欧等发达国家多肽食品也方兴未艾。目前多肽食品已经形成产业，许多著名的公司开发出一系列的多肽产品，产品主要有两个方面，一类是多肽药品和试剂，世界上现已有100多种多肽药物上市，纯度非常高并且也十分昂贵；另一类是含有功能性多肽保健食品和普通食品 [2]。
我国于20世纪80年代中后期开展了大量有关大豆多肽的研究，并在大豆蛋白肽的酶法生产、功能特性和生理活性取得一定成就。武汉肽类物质研究所致力于多肽物质的研究、开发及应用，目前肽类物质研究所已完成中药蛋白多肽系列、植物蛋白多肽系列、海产蛋白多肽系列、多肽系列食品添加剂、多肽系列调料添加剂、多肽系列植物生长调节剂等几十个成品和原料粉产品的研制。目前，我国多肽产品的开发应用日益广泛，国内的多肽产品市场正在逐步形成，但由于技术水平低、规模小等因素的局限，多肽的研究仍处于初步阶段，有待于进一步发展。
3 活性多肽的生理功能
活性多肽在人体内发挥着巨大的生理作用，其生理功能主要有一下几点：
1、调节体内的水分、电解质平衡；调节内分泌系统与神经系统；
2、具有抗菌作用，为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体并可消除体内突变细胞，甚至可以杀死肿瘤细胞，提高免疫功能；
3、促进蛋白质、酶、酵素的合成与调控；
4、具有抗氧化性，消除体内多余的自由基，可预防脂质过度氧化、延缓衰老等；
5、在细胞间、器官间传递信息；
6、降血压、降血脂、降血脂等，预防心脑血管、糖尿病等疾病；
7、易被人体消化吸收，可改善消化系统、治疗慢性胃肠道疾病；
8、促进造血功能，治疗贫血，防止血小板聚集，能提高血红细胞的载氧能力等[1]。
4 多肽的制备方法
目前，国内外制备多肽的方法主要有：蛋白酶水解法、化学合成法、基因重组法、分离提取法等。龚吉军等人[5]研究菜籽多肽的制备方法，确定了最佳酶解条件，在该条件下氨基酸态氮生成率高达34.64%，通过茶籽蛋白酶酶解制备的茶籽多肽可强烈清除超氧自由基和羟基自由；班玉凤等人[6]利用Alcalase酶酶解制备大豆蛋白寡肽，确定了最佳酶解条件，其水解度达到了24.1%；刘大川等[7]也利用碱性蛋白酶酶解富硒菜籽制备蛋白肽，水解度达32.51%，制得的富硒菜籽蛋白肽几乎都是小分子多肽，且分子量分布较好，分子量均在1500D以下。综上，蛋白酶水解法的应用较为广泛，本课题将采用酶解法制备茶树菇多肽。
5 本课题研究的目的、意义和内容
5.1 本课题研究的目的和意义
多肽来源十分丰富，在自然界的动物、植物和微生物中广泛存在，且原料的组成十分复杂。活性多肽一直是生物工程领域的研究热点，因为它生理功效明显、对人体的安全性高，可开发成功能性食品、医疗药品和化妆品等附加值高的生物制品[8]。随着科技的快速发展，从天然生物中提取多肽的手段不断得到提高，新的肽类物质相继被发现且应用于防病治病之中。但目前我国对多肽的研究水还不够深入，技术水平有待提高，资源利用率较低，很多蛋白资源被直接当作粗饲料、燃料甚至作为废弃物丢弃，十分浪费。茶树菇是一种常见的食用菌，且营养丰富。梁一[9]等人通过H22 荷瘤小鼠模型对茶树菇活性 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
蛋白的抗肿瘤活性进行了研究；张松[10]等人研究发现，茶树菇活性提取物具有抗氧化和延缓衰老的作用。本课题研究茶树菇多肽的制备方法和活性，旨在为以后开发新的具有保健功能的食品提供实验依据，并且对自然界各种来源蛋白质的综合利用具有重要的现实意义。
5.2 本课题研究的内容
1. 从茶树菇中提取粗蛋白质，选择最适宜酶，通过Box-Behnken响应面分析法，确定最佳酶解条件；
2. 采用离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树菇多肽进行提纯；
3. 研究茶树菇多肽的生物活性和物理性质。
6 材料和方法
6.1 主要原料、仪器和试剂
6.1.1 主要原料及材料
名称 生产厂家
茶树菇 绿谷田家淘宝店
透析袋 志达实验器材商城
80万u/g酶活力 木瓜蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
20万u/g酶活力 中性蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
20万u/g酶活力 碱性蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
25万u/g酶活力 胰蛋白酶 南京奥多福尼生物科技有限公司
3000u/g酶活力 胃蛋白酶 江苏锐阳生物科技有限公司
DEAE-52阴离子交换树脂 南京奥多福尼生物科技有限公司
葡聚糖凝胶SephadexG-25 南京奥多福尼生物科技有限公司
6.1.2 主要仪器
仪器 厂家
DS-1型组织捣碎机 上海标本模型厂
GCM-25M-B型高速冷冻离心机 上海赫田科学仪器有限公司
凯氏定氮仪 淮安国药化学试剂有限公司
2. 0.08mmol/L DPPH溶液的配制：
精密称取DPPH4.0mg，用无水乙醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得到浓度为0.08mmol/L的DPPH溶液，避光保存，备用。
④ 茶树菇多肽起泡性和泡沫稳定性的研究
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