lz35降解除草剂2,4d的机制研究(附件)

2,4-二氯苯氧乙酸，即2,4-D，是一种合成激素类除草剂，在其浓度高的时候可杀死杂草，利用微生物降解菌可以对其造成的污染进行修复。从长期受2,4-D污染的土壤中分离到一株高效降解该农药的菌株，根据生理生化特性以及16S rRNA基因系列的系统发育分析，将其鉴定为Achromobacter denitrificans LZ35。该菌株可以在24h降解100 mg/L 2,4-D至检测不出的水平，在20-40℃条件下降解效果良好。通过每2h间隔定时取样，液质联用后确定Achromobacter denitrificans LZ35降解2,4-D的中间产物，由此得到菌株的代谢途径。并通过PCR扩增和鸟枪法建库克隆的方法，寻找并验证每一步的关键降解酶基因。最后通过毒害实验再一次证明，被高浓度2,4-D毒害的玉米添加菌剂后，根长、叶长和株高明显得到改善，由此验证了菌株的快速解毒功能。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法 3
1.1 培养基与试剂 3
1.2 降解菌的富集与分离3
1.3 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定3
1.4 降解菌株的16S rRNA基因序列的测定3
1.4.1 菌体基因组总DNA的提取3
1. 4. 2 降解菌株16S rRNA基因的PCR扩增4
1.4.3 PCR产物的T/A克隆4
1. 4. 4 E. coli DH5α感受态细胞的制备5
1.4.5酶连产物的转化5
1.4.6 质粒DNA的小量提取5
1.4.7 16S rRNA基因序列测定5
1.5 降解菌株系统发育地位的确定5
1.6 菌体生长量的测定6
1.7 2,4D含量测定方法与代谢途径的研究6
1.8 玉米药害实验与菌株解毒能力验证6
2 结果与分析7
2.1 2,4D降解菌株的富集7
2.2降解菌株的分离鉴定及菌落形态8
2. 3 降解菌系统分类地位鉴定9
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2.4 2,4D含量的测定与代谢途径研10
2.5 玉米药害实验和菌株解毒能力验证13
3 结果与讨论15
致谢16
参考文献16
Achromobacter denitrificans LZ35降解除草剂2,4D的机制研究

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