拟南芥abi4基因的分子克隆与过表达载体的构建
：ABI4是高等植物胞信号通路中一个关键的转录因子，是多条信号通路的靶作用位点。本研究以拟南芥（Arabidopsis thaliana）为材料，通过设计引物和RT-PCR，克隆了ABI4基因的CDS区序列，其开放阅读框长为987bp，编码328个氨基酸残基，是高度保守的序列。将目的基因ABI4与克隆载体pMD19-T连接，重组质粒转化大肠杆菌，获得大量单克隆重组质粒，进行BglⅡ和NcoⅠ双酶切后，与表达载体pCAMBIA-1301连接，构建重组质粒转化农杆菌，侵染野生型拟南芥，获得ABI4突变体株型的植株，以期进行后续科学研究。
目录
摘要 1
关键词 1
1 引言 1
1.1 ABA的功效 1
1.2 ABI4基因的发现 2
1.3 ABI4蛋白功能及其在植物发育中的作用 2
2 材料和方法 2
2.1 植物材料与处理 2
2.2 菌株和质粒载体 2
2.3 主要分子生物学和生物化学试剂 2
2.4 主要仪器设备 2
2.5 引物设计 3
2.6 拟南芥叶片总RNA的提取 3
2.7 cDNA第一链的合成 3
2.8 拟南芥ABI4基因开放阅读框的PCR扩增、克隆载体的构建 3
2.9 重组克隆载体质粒提取及酶切验证 5
2.10 拟南芥ABI4基因过表达载体pCAMBIA1301ABI4的构建及转化 6
3 结果与分析 6
3.1 拟南芥叶片RNA的提取 7
3.2 拟南芥ABI4基因CDS区的PCR扩增 7
3.3 克隆载体pMD19ABI4的构建 8
3.4 双酶切质粒pMD19ABI4和pCAMBIA 1301 10
3.5 过表达载体pCAMBIA 1301ABI4的构建 11
3.6 农杆菌的转化 11
4 讨论 11
4.1 实验研究意义 11
4.2 实验过程的收获与体会 12
致谢 13
参考文献 13
拟南芥ABI4
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
基因的分子克隆与过表达载体的构建
国家生命科学与技术人才培养基地学生 霍珺好慧
目录
摘要 1
关键词 1
1 引言 1
1.1 ABA的功效 1
1.2 ABI4基因的发现 2
1.3 ABI4蛋白功能及其在植物发育中的作用 2
2 材料和方法 2
2.1 植物材料与处理 2
2.2 菌株和质粒载体 2
2.3 主要分子生物学和生物化学试剂 2
2.4 主要仪器设备 2
2.5 引物设计 3
2.6 拟南芥叶片总RNA的提取 3
2.7 cDNA第一链的合成 3
2.8 拟南芥ABI4基因开放阅读框的PCR扩增、克隆载体的构建 3
2.9 重组克隆载体质粒提取及酶切验证 5
2.10 拟南芥ABI4基因过表达载体pCAMBIA1301ABI4的构建及转化 6
3 结果与分析 6
3.1 拟南芥叶片RNA的提取 7
3.2 拟南芥ABI4基因CDS区的PCR扩增 7
3.3 克隆载体pMD19ABI4的构建 8
3.4 双酶切质粒pMD19ABI4和pCAMBIA 1301 10
3.5 过表达载体pCAMBIA 1301ABI4的构建 11
3.6 农杆菌的转化 11
4 讨论 11
4.1 实验研究意义 11
4.2 实验过程的收获与体会 12
致谢 13
参考文献 13
拟南芥ABI4
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
基因的分子克隆与过表达载体的构建
国家生命科学与技术人才培养基地学生 霍珺好慧
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