梨僵芽的形成和机理研究
摘要：本实验以不同梨品种的正常花芽和僵芽作为实验材料，从形态和生理两个个方面研究梨出现僵芽的原因，以便更深入了解僵芽形成机理，并以此为基础，提出可能降低僵芽发生率的技术措施，提高花芽分化质量，打破僵芽，提高座果率，达到以果压冠，来控制树势，实现连年丰产的目的。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料和方法 2
1.1 研究材料 2
1.2 研究方法和手段 2
2结果与分析 4
2.1花芽的矿质元素（ B、P、K、Ca、Mg、Zn ）含量对僵芽率的影响 4
2.2花芽的激素（ IAA、ABA、GA、ZR ）含量对僵芽率的影响 6
2.3花芽的酶活性（ POD、SOD）对僵芽率的影响 7
3小结与讨论 8
致谢 8
参考文献 8
梨僵芽的形成和机理研究
引言
绪论
梨（Pyrus spp）是蔷薇科(Rosaceae)苹果亚科(Maloideae)梨属(Pyrus)植物，是继葡萄和苹果之后的第三大温带果树。梨作为我国主要果树，其栽培面积和产量均居世界首位。
优质中熟梨——‘玉露香梨’以其汁多、酥脆、含糖高、无公害等特点畅销东南亚、俄罗斯等地 (孙艳改等，2013)。但近来，河南、河北、山西等地，部分‘玉露香梨’出现僵芽现象，严重影响其产量和梨农收益。
僵芽形成原因有很多。研究表明（盖国强，2013），‘玉露香梨’僵芽形成原因：幼树长势旺，大量结果后树势中庸，幼树初果期管理不到位，造成营养生长与生殖生长不协调，花芽分化不良，形成僵芽。尽管僵芽现象已得到关注，人们也猜测了一些形成原因并提出了相关防治措施，但对其生理生化指标的研究鲜见报道。
植物激素对植物的生长、发育、分化、开花、结果等生理活动起着至关重要的调控作用。目前，果树花芽分化（林玲等，2012；高佳缘，2012；付传明等，2014）、花芽休眠（Bai S，2013；Zhong W，2013）的相关激素研究已有一定的相关报道。众所周知，抗氧化代谢与植物的抗性有关。近年来，国内外
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
研究表明，抗氧化代谢与芽休眠有关，在多种果树如桃(王孝娣等，2010)、苹果(秦栋，2009)、葡萄(Pere′z等，2008；张昂等，2012 )和梨(毕磊，2009；Bai S，2013)上都有报道。由此看来，花芽萌发过程也很可能与植物激素代谢和抗氧化作用有着一定的联系。
鉴于以上，本实验以不同梨品种的正常花芽和僵芽作为实验材料，从形态、生理、分子三个方面研究梨出现僵芽的原因，以便更深入了解僵芽形成的生理、分子机制，并以此为基础，提出可能降低僵芽发生率的技术措施，提高花芽分化质量，打破僵芽，提高座果率，达到以果压冠，来控制树势，实现连年丰产的目的。
工作假说：
僵芽的形成跟矿质元素含量、植物激素代谢和抗氧化作用可能有关。
研究内容：
调查郑州农科院实验基地、石家庄果树所实验基地、大学江浦基地不同品种的梨僵芽发生情况；
根据调查结果，在花芽萌发前一周对郑州农科院实验基地存在僵芽现象的梨品种进行采样；同时，将江浦基地不同品种的梨分成两组——有僵芽组、基本无僵芽组，从花芽刚开始萌发，确定正常花芽和僵芽后开始，每隔2天采一次样，直至开花。对采集的样品进行如下研究：
制作花芽的石蜡切片，从形态上对比两种花芽的组织结构，即芽的饱满度、鳞片发育状态等；
测定花芽的生理指标（矿质元素含量、激素含量、POD及SOD活性），统计比较二者差异；
1 材料和方法
1.1研究材料：
不同梨品种的正常花芽和僵芽
1.2研究方法和手段：
1.石蜡切片的制作
固定：将花芽剥去鳞片，放于FAA 固定液中，抽气并固定24h 备用；
脱水：将花芽转入50%酒精并按照 50%→70%→85%→90%→95%→100%→100%乙醇的梯度逐级脱水处理，每级酒精浓度处理1h；
透明：将花芽从无水乙醇转入1/2无水乙醇+1/2二甲苯，且按照 1/2无水乙醇+1/2 二甲苯→二甲苯→二甲苯的梯度进行透明，每级透明处理 0.5h；
浸蜡：小瓶内二甲苯倒出一半，将之前切好的碎蜡屑不断加入小瓶，直至饱和为止，然后放入恒温箱37℃过夜，3天后将恒温箱升至65℃，用包埋所用的纯蜡每2h换一次，共处理二次；
包埋：迅速取出装有花芽的小瓶，将石蜡连同花芽一起转入包埋盒内，用热镊子将材料在盒内整齐排放，彼此间留一定距离。待到盒内蜡面凝固时平放水中，浸没、冷却凝固；
切片：分割下每个花芽，修整蜡块切面呈梯形，固着于台木上，沿花芽侧面纵切切片厚度为10μｍ；
展片和粘片：蘸一滴粘片剂于载玻片中央,用手指涂抹均匀至整张载玻片，滴加1滴蒸馏水，将蜡带光面向下平放于载玻片上并将载玻片放于展片台上，当蜡片受热均匀完全伸展看不到有任何皱纹时，从展片台上取下，用滤纸吸去多余的液体，放入40℃恒温箱烘干；
脱蜡，复水：取出已经烘干的载玻片，放在染色缸内，经以下顺序二甲苯（20min）→二甲苯（20min）→1/2二甲苯+1/2 100%乙醇（10min）→100%乙醇（5min）→100%乙醇（5min）→95%乙醇（5min）→85%乙醇（5min）→70%乙醇（5min）进行脱蜡复水；
染色：将材料依次放入1%番红20—48h、50%乙醇1—5min 、70%乙醇1—5min、85%乙醇1—5min、0.1%固绿（固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml）5s—30s、95%乙醇1—5min、100%乙醇1—5min（重复一次）、1/2二甲苯+1/2无水乙醇5—10min、二甲苯5—10min（重复一次）。
镜检观察：将切片放于显微镜下进行拍照观察、分析。
2.矿质元素的测定
将样品烘干，研磨，称取0.1g样品，用微波消解仪、电感耦合等离子光谱发生仪测定各矿质元素的含量。每个样品，重复3次。
3.激素的测定
将样品(0.5g左右)放到预冷的研钵中研磨，加入4mL预冷的80%色谱甲醇，4℃下避光浸提12h，之后4℃下10000r/min离心10min，取上清液避光保存于4℃冰箱中，残渣加入预冷80%色谱甲醇2.5mL，重复提取2次，间隔12h，同上离心，收集合并全部浸提液，将提取液按0.2g/g FW加入PVPP吸附酚类物质及色素，在摇床上4℃避光振荡60min，摇匀，同上离心，将上清液避光缓慢过C18小柱，流出液倒入直径12cm培养皿中，放入光合培养箱中4℃避光干燥，取出加入2mL色谱甲醇溶解，过0.45μm有机系超微滤膜，最终的滤液保存到棕色试剂瓶中，采用反相高效液相色谱(HPLC)技术进行激素含量的测定。每个样品，重复3次。
4.POD活性的测定
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料和方法 2
1.1 研究材料 2
1.2 研究方法和手段 2
2结果与分析 4
2.1花芽的矿质元素（ B、P、K、Ca、Mg、Zn ）含量对僵芽率的影响 4
2.2花芽的激素（ IAA、ABA、GA、ZR ）含量对僵芽率的影响 6
2.3花芽的酶活性（ POD、SOD）对僵芽率的影响 7
3小结与讨论 8
致谢 8
参考文献 8
梨僵芽的形成和机理研究
引言
绪论
梨（Pyrus spp）是蔷薇科(Rosaceae)苹果亚科(Maloideae)梨属(Pyrus)植物，是继葡萄和苹果之后的第三大温带果树。梨作为我国主要果树，其栽培面积和产量均居世界首位。
优质中熟梨——‘玉露香梨’以其汁多、酥脆、含糖高、无公害等特点畅销东南亚、俄罗斯等地 (孙艳改等，2013)。但近来，河南、河北、山西等地，部分‘玉露香梨’出现僵芽现象，严重影响其产量和梨农收益。
僵芽形成原因有很多。研究表明（盖国强，2013），‘玉露香梨’僵芽形成原因：幼树长势旺，大量结果后树势中庸，幼树初果期管理不到位，造成营养生长与生殖生长不协调，花芽分化不良，形成僵芽。尽管僵芽现象已得到关注，人们也猜测了一些形成原因并提出了相关防治措施，但对其生理生化指标的研究鲜见报道。
植物激素对植物的生长、发育、分化、开花、结果等生理活动起着至关重要的调控作用。目前，果树花芽分化（林玲等，2012；高佳缘，2012；付传明等，2014）、花芽休眠（Bai S，2013；Zhong W，2013）的相关激素研究已有一定的相关报道。众所周知，抗氧化代谢与植物的抗性有关。近年来，国内外
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
研究表明，抗氧化代谢与芽休眠有关，在多种果树如桃(王孝娣等，2010)、苹果(秦栋，2009)、葡萄(Pere′z等，2008；张昂等，2012 )和梨(毕磊，2009；Bai S，2013)上都有报道。由此看来，花芽萌发过程也很可能与植物激素代谢和抗氧化作用有着一定的联系。
鉴于以上，本实验以不同梨品种的正常花芽和僵芽作为实验材料，从形态、生理、分子三个方面研究梨出现僵芽的原因，以便更深入了解僵芽形成的生理、分子机制，并以此为基础，提出可能降低僵芽发生率的技术措施，提高花芽分化质量，打破僵芽，提高座果率，达到以果压冠，来控制树势，实现连年丰产的目的。
工作假说：
僵芽的形成跟矿质元素含量、植物激素代谢和抗氧化作用可能有关。
研究内容：
调查郑州农科院实验基地、石家庄果树所实验基地、大学江浦基地不同品种的梨僵芽发生情况；
根据调查结果，在花芽萌发前一周对郑州农科院实验基地存在僵芽现象的梨品种进行采样；同时，将江浦基地不同品种的梨分成两组——有僵芽组、基本无僵芽组，从花芽刚开始萌发，确定正常花芽和僵芽后开始，每隔2天采一次样，直至开花。对采集的样品进行如下研究：
制作花芽的石蜡切片，从形态上对比两种花芽的组织结构，即芽的饱满度、鳞片发育状态等；
测定花芽的生理指标（矿质元素含量、激素含量、POD及SOD活性），统计比较二者差异；
1 材料和方法
1.1研究材料：
不同梨品种的正常花芽和僵芽
1.2研究方法和手段：
1.石蜡切片的制作
固定：将花芽剥去鳞片，放于FAA 固定液中，抽气并固定24h 备用；
脱水：将花芽转入50%酒精并按照 50%→70%→85%→90%→95%→100%→100%乙醇的梯度逐级脱水处理，每级酒精浓度处理1h；
透明：将花芽从无水乙醇转入1/2无水乙醇+1/2二甲苯，且按照 1/2无水乙醇+1/2 二甲苯→二甲苯→二甲苯的梯度进行透明，每级透明处理 0.5h；
浸蜡：小瓶内二甲苯倒出一半，将之前切好的碎蜡屑不断加入小瓶，直至饱和为止，然后放入恒温箱37℃过夜，3天后将恒温箱升至65℃，用包埋所用的纯蜡每2h换一次，共处理二次；
包埋：迅速取出装有花芽的小瓶，将石蜡连同花芽一起转入包埋盒内，用热镊子将材料在盒内整齐排放，彼此间留一定距离。待到盒内蜡面凝固时平放水中，浸没、冷却凝固；
切片：分割下每个花芽，修整蜡块切面呈梯形，固着于台木上，沿花芽侧面纵切切片厚度为10μｍ；
展片和粘片：蘸一滴粘片剂于载玻片中央,用手指涂抹均匀至整张载玻片，滴加1滴蒸馏水，将蜡带光面向下平放于载玻片上并将载玻片放于展片台上，当蜡片受热均匀完全伸展看不到有任何皱纹时，从展片台上取下，用滤纸吸去多余的液体，放入40℃恒温箱烘干；
脱蜡，复水：取出已经烘干的载玻片，放在染色缸内，经以下顺序二甲苯（20min）→二甲苯（20min）→1/2二甲苯+1/2 100%乙醇（10min）→100%乙醇（5min）→100%乙醇（5min）→95%乙醇（5min）→85%乙醇（5min）→70%乙醇（5min）进行脱蜡复水；
染色：将材料依次放入1%番红20—48h、50%乙醇1—5min 、70%乙醇1—5min、85%乙醇1—5min、0.1%固绿（固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml）5s—30s、95%乙醇1—5min、100%乙醇1—5min（重复一次）、1/2二甲苯+1/2无水乙醇5—10min、二甲苯5—10min（重复一次）。
镜检观察：将切片放于显微镜下进行拍照观察、分析。
2.矿质元素的测定
将样品烘干，研磨，称取0.1g样品，用微波消解仪、电感耦合等离子光谱发生仪测定各矿质元素的含量。每个样品，重复3次。
3.激素的测定
将样品(0.5g左右)放到预冷的研钵中研磨，加入4mL预冷的80%色谱甲醇，4℃下避光浸提12h，之后4℃下10000r/min离心10min，取上清液避光保存于4℃冰箱中，残渣加入预冷80%色谱甲醇2.5mL，重复提取2次，间隔12h，同上离心，收集合并全部浸提液，将提取液按0.2g/g FW加入PVPP吸附酚类物质及色素，在摇床上4℃避光振荡60min，摇匀，同上离心，将上清液避光缓慢过C18小柱，流出液倒入直径12cm培养皿中，放入光合培养箱中4℃避光干燥，取出加入2mL色谱甲醇溶解，过0.45μm有机系超微滤膜，最终的滤液保存到棕色试剂瓶中，采用反相高效液相色谱(HPLC)技术进行激素含量的测定。每个样品，重复3次。
4.POD活性的测定
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