台湾豆柿组培快繁体系的建立
摘要：本研究以柿树科（Ebenaceae）柿属（Diospyros L.）品种台湾豆柿（Diospyros lotus L.）为材料，以两年生枝条上的休眠芽为外植体较系统的研究建立了该品种的外植体初代、继代增殖培养等技术体系，以期为豆柿的生理生化及遗传转化方面的研究等奠定技术基础，同时也为我国的豆柿品种——台湾豆柿的快速繁育和生产推广提供了技术途径。
目录
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摘 要 III
ABSTRACT III
缩略词（ABBREVIATION） III
引言
1 试验材料 3
2 试验方法 4
2.1 外植体的灭菌及接种前处理 4
2.2 不同基本培养基对台湾豆柿组培苗初代的影响 4
2.3 基本培养基、ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响 4
2.4 不同种类、不同浓度的细胞分裂素和细胞生长素对台湾豆柿继代增殖影响..............................4
3 培养条件.......................................................................................................................................................4
4 数据分析方法 4
5 结果与分析 4
5.1 不同消毒方法对台湾豆柿初代影响 4
5.2 不同基本培养基对台湾豆柿休眠芽初代影响 5
5.3 不同种类、浓度的细胞分裂素对组培苗生长的影响 6
5.4 不同种类、浓度的细胞生长素对组培苗生长的影响.....................................................................6
6 讨论 6
致 谢 7
台湾豆柿组培快繁体系的建立
STUDY ON TISSUE CULTURE AND PLANT
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
REGENERATION OF PERSIMMON
Student majoring in horticulture Zhao Jiaan
Tutor Qu Shenchun
Abstract：Dormant buds taken from one year old persimmon branches,as in vitro explants materials,to study the early generations and subculture. The paper laid the foundation of studying the genetic transformation aspects and physiological traits aspects.At the same time promote the rapid breeding and production promotion of Taiwandoushi.
Key words: Persimmon(Diospyros lotus L.);Tissue culture;Primary culture;Subculture
柿树通常为高79米的落叶乔木。传统上主要采用君迁子、油柿、野柿等优良砧木进行嫁接繁殖[1]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[2]。君迁子（Diospyros lotus L.）为柿树科（Ebenaceae）柿属（Diospyros L.）植物的一个种，别名黑枣、软枣、牛奶枣、丁香柿、高加索柿等[3]。君迁子属于落叶乔木，树干挺直，树冠圆整，适应性强，亦可作园林绿化用。君迁子在生产上最广泛的用途是做柿树砧木[4]。近年来，国内在君迁子种子萌发特性[5]、组织培养[6]、种质低温保存[7]、抗盐抗旱胁迫生理[8]、DNA 提取和ISSR体系构建[9]、城市园林绿化应用[10]、叶片Vc含量[11]、药理学研究[12]等方面已有研究。因此，君迁子的价值越来越被人们所重视。
为进一步研究台湾豆柿的生物学和遗传学特性，必须建立起台湾豆柿组培快繁技术体系。因此在前人研究的基础上，本研究初步建立了台湾豆柿的组培快繁技术体系，为快速获得大量苗木提供可能，促进了豆柿树种产业在我国的推广和快速发展。同时，豆柿组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究等奠定了基础。
1 试验材料
1.1 台湾豆柿两年生枝条于2013年11月取自江苏省盐城市东台县农业示范园内，树龄约为3年。
1.2 在ZT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+PVP1.0 mg/L的培养基上继代了3—5代的台湾豆柿组培苗作为继代增殖培养试验的材料。
2 试验方法
2.1 外植体的灭菌及接种前处理
取两年生豆柿枝条上休眠芽，用镊子剥取芽外侧2~3个鳞片，用洗衣粉洗涤2~3遍，流水冲洗2h以上，继而在超净工作台上消毒。分别按以下三种方法进行后续消毒：（1）用75%乙醇进行表面灭菌30s，然后在含有10%H2O2溶液中分别浸泡10min、20min、30min，浸泡过程中要不间断摇动。最后用无菌水冲洗4~5次;（2）用75%乙醇表面灭菌30s然后在含有0.1%吐温80的5% NaClO（次氯酸钠）溶液中浸泡6min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗4~5次 (3)用75%乙醇表面灭菌30s，然后在含有0.1%吐温80的0.1%HgCl (升汞)溶液中浸泡8min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗4~5次。
2.2 不同基本培养基对台湾豆柿组培苗初代的影响
萌动生长的休眠芽分别接种在含有ZT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+PVP1.0 mg/L的MS、1/2MS、MS（1/2N）培养基上培养2代后观察统计组培苗的生长情况及植株高度，比较基本培养基对台湾豆柿组培苗初代生长的影响。
2.3 基本培养基、ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响
基本培养基、激素的种类及浓度对休眠芽萌动生长的影响，采用L9（34）正交试验设计，其因素水平如表1。
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摘 要 III
ABSTRACT III
缩略词（ABBREVIATION） III
引言
1 试验材料 3
2 试验方法 4
2.1 外植体的灭菌及接种前处理 4
2.2 不同基本培养基对台湾豆柿组培苗初代的影响 4
2.3 基本培养基、ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响 4
2.4 不同种类、不同浓度的细胞分裂素和细胞生长素对台湾豆柿继代增殖影响..............................4
3 培养条件.......................................................................................................................................................4
4 数据分析方法 4
5 结果与分析 4
5.1 不同消毒方法对台湾豆柿初代影响 4
5.2 不同基本培养基对台湾豆柿休眠芽初代影响 5
5.3 不同种类、浓度的细胞分裂素对组培苗生长的影响 6
5.4 不同种类、浓度的细胞生长素对组培苗生长的影响.....................................................................6
6 讨论 6
致 谢 7
台湾豆柿组培快繁体系的建立
STUDY ON TISSUE CULTURE AND PLANT
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REGENERATION OF PERSIMMON
Student majoring in horticulture Zhao Jiaan
Tutor Qu Shenchun
Abstract：Dormant buds taken from one year old persimmon branches,as in vitro explants materials,to study the early generations and subculture. The paper laid the foundation of studying the genetic transformation aspects and physiological traits aspects.At the same time promote the rapid breeding and production promotion of Taiwandoushi.
Key words: Persimmon(Diospyros lotus L.);Tissue culture;Primary culture;Subculture
柿树通常为高79米的落叶乔木。传统上主要采用君迁子、油柿、野柿等优良砧木进行嫁接繁殖[1]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[2]。君迁子（Diospyros lotus L.）为柿树科（Ebenaceae）柿属（Diospyros L.）植物的一个种，别名黑枣、软枣、牛奶枣、丁香柿、高加索柿等[3]。君迁子属于落叶乔木，树干挺直，树冠圆整，适应性强，亦可作园林绿化用。君迁子在生产上最广泛的用途是做柿树砧木[4]。近年来，国内在君迁子种子萌发特性[5]、组织培养[6]、种质低温保存[7]、抗盐抗旱胁迫生理[8]、DNA 提取和ISSR体系构建[9]、城市园林绿化应用[10]、叶片Vc含量[11]、药理学研究[12]等方面已有研究。因此，君迁子的价值越来越被人们所重视。
为进一步研究台湾豆柿的生物学和遗传学特性，必须建立起台湾豆柿组培快繁技术体系。因此在前人研究的基础上，本研究初步建立了台湾豆柿的组培快繁技术体系，为快速获得大量苗木提供可能，促进了豆柿树种产业在我国的推广和快速发展。同时，豆柿组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究等奠定了基础。
1 试验材料
1.1 台湾豆柿两年生枝条于2013年11月取自江苏省盐城市东台县农业示范园内，树龄约为3年。
1.2 在ZT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+PVP1.0 mg/L的培养基上继代了3—5代的台湾豆柿组培苗作为继代增殖培养试验的材料。
2 试验方法
2.1 外植体的灭菌及接种前处理
取两年生豆柿枝条上休眠芽，用镊子剥取芽外侧2~3个鳞片，用洗衣粉洗涤2~3遍，流水冲洗2h以上，继而在超净工作台上消毒。分别按以下三种方法进行后续消毒：（1）用75%乙醇进行表面灭菌30s，然后在含有10%H2O2溶液中分别浸泡10min、20min、30min，浸泡过程中要不间断摇动。最后用无菌水冲洗4~5次;（2）用75%乙醇表面灭菌30s然后在含有0.1%吐温80的5% NaClO（次氯酸钠）溶液中浸泡6min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗4~5次 (3)用75%乙醇表面灭菌30s，然后在含有0.1%吐温80的0.1%HgCl (升汞)溶液中浸泡8min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗4~5次。
2.2 不同基本培养基对台湾豆柿组培苗初代的影响
萌动生长的休眠芽分别接种在含有ZT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+PVP1.0 mg/L的MS、1/2MS、MS（1/2N）培养基上培养2代后观察统计组培苗的生长情况及植株高度，比较基本培养基对台湾豆柿组培苗初代生长的影响。
2.3 基本培养基、ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响
基本培养基、激素的种类及浓度对休眠芽萌动生长的影响，采用L9（34）正交试验设计，其因素水平如表1。
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