外源no和h2o2诱导洋葱花青素积累
花青素对人体有益，植物颜色越深，花青素含量就越高，因此黄色洋葱含有可测量的花青素。NO和H2O2作为活性物质参与对植物生命活动调控，是植物细胞应答逆境产生的重要信号分子。本实验以大学洋葱实验室465黄皮洋葱为材料，采用不同浓度的SNP和H2O2对不同时期的洋葱进行处理，研究外源NO、H2O2、NO+H2O2处理对洋葱合成花青素的影响。结果表明经外源NO以及H2O2处理后，不仅洋葱花青素含量升高，而且PAL、PPO和CHI活性增强；处理时期以鳞茎膨大期处理最有效，且SNP与H2O2组合效果最佳，其他处理效果以0.25 mmol/L H2O2、0.3 mmol/L SNP、0.2mmol/L SNP、0.1mmol/L SNP、清水（CK）依次递减。因此得出结果外源NO和H2O2说可以促进鳞茎膨大时期洋葱花青素的合成，呈明显的加性效应。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2方法 2
1.3测定方法3
1.3.1花青素含量测定3
1.3.2苯丙氨酸裂解酶（PAL）活性测定3
1.3.3多酚氧化酶（PPO）活性测定3
1.3.4 查尔酮异构酶（CHI）活性测定3
2 结果与分析4
2.1不同浓度SNP和H2O2处理对不同时期洋葱花青素含量的影响4
2.2 不同浓度SNP 和H2O2处理对不同颜色洋葱PAL、CHI、PPO 活性的影响4
3 讨论 5
致谢6
参考文献6
图1 “465”黄皮洋葱2
表1供试洋葱品种特性和块茎主要干物质含量2
表2不同浓度SNP和H2O2处理对不同时期洋葱花青素含量的影响4
表 3 SNP 和H2O2处理不同时期洋葱对PAL、PPO 和CHI 活性的影响5
外源NO和H2O2诱导洋葱花青素积累
引言
引言：洋葱是我国国内重要的食用和出口蔬菜之一，无论栽培面积还是产量在全球都是名列前茅[1] *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
。洋葱具有极高的营养价值，还可以起到降血压、预防血管硬化、缓解糖尿病病情等保健作用，进而越来越受到人们的关注[2]。
花青素作为植物中广泛存在的一类水溶性天然色素，在多数情况下是以糖苷形式存在，极少情况下是以游离形式存在[3]，这是造成洋葱颜色差异的一个重要因素。现在，人们越来越重视富含花青素蔬菜的保健功能，洋葱的颜色成为一个重要的商品性状。园艺植物中常见的花青素种类包括矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、天竺葵色素、牵牛花色素和锦葵色素等，不同植物中花青素的种类存在一定的差异，除此以外，同种植物的不同部位花青素种类含量也不尽相同[4]。对于洋葱花青素种类、稳定性和抗氧化能力已有研究[5]，但对于提高洋葱花青素含量的研究还未见报道。关于测定花青素含量的方法，Wrolstad研究发现的pH示差法是目前测定花青素含量最为简单有效的方法[6]，自然条件下，花青素与糖以糖苷键结合形成花色苷，由于吸光性的不同从而呈现出各种各样的颜色，除此以外，花青素具有许多强大功效，例如抗氧化，抗辐射，预防癌症，增进视力，改善睡眠，抗突变等重要作用[7]。近几年来对于NO和H2O2在植物胁迫中的报道层出不穷，其中NO被发现是植物体内特殊的生物信号分子，参与植物的生长发育调控以及胁迫应激反应，作为植物胁迫应激以及一些生理生化的重要信号分子，对植物的次生代谢过程中意义十分巨大，并可以凭借ROS反应对植物抗性进行相关调节[8]。而H2O2也被大量实验证明是植物体内的一种重要的应激生物信号，并且通过刺激使植物细胞产生一系列防御机制以及合成多种代谢物质防止外界的伤害从而起到保护植物正常生理活动的作用 [9]。除此以外，也有相关报道得出NO和H2O2通过次生代谢，可以产生紫杉醇[1011]，葛根素[12]，金丝桃素[13]等一系列重要物质，但其对植物花青素代谢的研究很少。本实验采用了SNP，H2O2，SNP + H2O2处理黄皮洋葱，研究了洋葱色素积累及相关酶的调节作用。本研究的目的是探索NO和H2O2在洋葱不同的生理阶段对花青素合成的反应机制和洋葱花青素代谢调控，以及为优质洋葱品种的选育以及洋葱保健功能的开发具有重大的指导意义，为促进洋葱风味口感，丰富市民饮食生活也有一定作用。
1 材料与方法
1．1 实验材料
参与实验的洋葱品种为465黄皮洋葱，由大学白菜系统生物学实验室提供，如图1所示。其产品相关的品种特性以及主要的营养物质含量见表1。
表1 供试洋葱品种特性和块茎主要干物质含量
Table 1 tested onion varieties and the main dry matter content of tubers
品种
颜色
生育期
可溶性糖
可溶性蛋白
丙酮酸
Vc
465洋葱
黄色
80d
3.24g/100g
40.97ug/g
86.87ug/g
7.05mg/g
图1 “465”黄皮洋葱
Figure 1 "465" yellow onion
1．2 试验方法
（1）分别配制0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体），以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2和清水六种试验试剂。
（2）将种子分成A,B,C三组，A组用0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体）以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2试剂分别浸种，其余两组用清水浸种四小时。
（3）浸种后进行催芽，将B组种子置于含有0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体），以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2试剂的棉布上分别催芽，其余两组则置于湿棉布上进行催芽二十四小时。
（5）5月初，洋葱成熟时进行取样测定各指标。
1.3 测定项目
1.3.1 花青素含量测定
参照 Longo和刘玉芹等[1415]提取花青素的方法，并作适当修改提取洋葱花青素。精确称重10.0g新鲜洋葱，在4℃下混合匀浆，再用高速匀浆器15000r / min，破碎细胞结构2min。将洋葱匀浆放入50ml离心管中，料液比（1:10），加入35mL含0.1％盐酸的80％乙醇，在室温下超声波（功率700W）处理3次，每次10min。用布氏漏斗真空过滤，再用30mL含有0.1％盐酸的80％乙醇溶液萃取残余物，合并3次滤液。 离心4000r/min，离心10分钟，在30℃真空中去除上清液，除去甲醇，然后用0.01％盐酸去离子水定容至25 mL。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2方法 2
1.3测定方法3
1.3.1花青素含量测定3
1.3.2苯丙氨酸裂解酶（PAL）活性测定3
1.3.3多酚氧化酶（PPO）活性测定3
1.3.4 查尔酮异构酶（CHI）活性测定3
2 结果与分析4
2.1不同浓度SNP和H2O2处理对不同时期洋葱花青素含量的影响4
2.2 不同浓度SNP 和H2O2处理对不同颜色洋葱PAL、CHI、PPO 活性的影响4
3 讨论 5
致谢6
参考文献6
图1 “465”黄皮洋葱2
表1供试洋葱品种特性和块茎主要干物质含量2
表2不同浓度SNP和H2O2处理对不同时期洋葱花青素含量的影响4
表 3 SNP 和H2O2处理不同时期洋葱对PAL、PPO 和CHI 活性的影响5
外源NO和H2O2诱导洋葱花青素积累
引言
引言：洋葱是我国国内重要的食用和出口蔬菜之一，无论栽培面积还是产量在全球都是名列前茅[1] *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
。洋葱具有极高的营养价值，还可以起到降血压、预防血管硬化、缓解糖尿病病情等保健作用，进而越来越受到人们的关注[2]。
花青素作为植物中广泛存在的一类水溶性天然色素，在多数情况下是以糖苷形式存在，极少情况下是以游离形式存在[3]，这是造成洋葱颜色差异的一个重要因素。现在，人们越来越重视富含花青素蔬菜的保健功能，洋葱的颜色成为一个重要的商品性状。园艺植物中常见的花青素种类包括矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、天竺葵色素、牵牛花色素和锦葵色素等，不同植物中花青素的种类存在一定的差异，除此以外，同种植物的不同部位花青素种类含量也不尽相同[4]。对于洋葱花青素种类、稳定性和抗氧化能力已有研究[5]，但对于提高洋葱花青素含量的研究还未见报道。关于测定花青素含量的方法，Wrolstad研究发现的pH示差法是目前测定花青素含量最为简单有效的方法[6]，自然条件下，花青素与糖以糖苷键结合形成花色苷，由于吸光性的不同从而呈现出各种各样的颜色，除此以外，花青素具有许多强大功效，例如抗氧化，抗辐射，预防癌症，增进视力，改善睡眠，抗突变等重要作用[7]。近几年来对于NO和H2O2在植物胁迫中的报道层出不穷，其中NO被发现是植物体内特殊的生物信号分子，参与植物的生长发育调控以及胁迫应激反应，作为植物胁迫应激以及一些生理生化的重要信号分子，对植物的次生代谢过程中意义十分巨大，并可以凭借ROS反应对植物抗性进行相关调节[8]。而H2O2也被大量实验证明是植物体内的一种重要的应激生物信号，并且通过刺激使植物细胞产生一系列防御机制以及合成多种代谢物质防止外界的伤害从而起到保护植物正常生理活动的作用 [9]。除此以外，也有相关报道得出NO和H2O2通过次生代谢，可以产生紫杉醇[1011]，葛根素[12]，金丝桃素[13]等一系列重要物质，但其对植物花青素代谢的研究很少。本实验采用了SNP，H2O2，SNP + H2O2处理黄皮洋葱，研究了洋葱色素积累及相关酶的调节作用。本研究的目的是探索NO和H2O2在洋葱不同的生理阶段对花青素合成的反应机制和洋葱花青素代谢调控，以及为优质洋葱品种的选育以及洋葱保健功能的开发具有重大的指导意义，为促进洋葱风味口感，丰富市民饮食生活也有一定作用。
1 材料与方法
1．1 实验材料
参与实验的洋葱品种为465黄皮洋葱，由大学白菜系统生物学实验室提供，如图1所示。其产品相关的品种特性以及主要的营养物质含量见表1。
表1 供试洋葱品种特性和块茎主要干物质含量
Table 1 tested onion varieties and the main dry matter content of tubers
品种
颜色
生育期
可溶性糖
可溶性蛋白
丙酮酸
Vc
465洋葱
黄色
80d
3.24g/100g
40.97ug/g
86.87ug/g
7.05mg/g
图1 “465”黄皮洋葱
Figure 1 "465" yellow onion
1．2 试验方法
（1）分别配制0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体），以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2和清水六种试验试剂。
（2）将种子分成A,B,C三组，A组用0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体）以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2试剂分别浸种，其余两组用清水浸种四小时。
（3）浸种后进行催芽，将B组种子置于含有0.25 mmol/L H2O2，0.1mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L SNP（NO供体），以及0.1 mmol/L SNP+0.25 mmol/L H2O2试剂的棉布上分别催芽，其余两组则置于湿棉布上进行催芽二十四小时。
（5）5月初，洋葱成熟时进行取样测定各指标。
1.3 测定项目
1.3.1 花青素含量测定
参照 Longo和刘玉芹等[1415]提取花青素的方法，并作适当修改提取洋葱花青素。精确称重10.0g新鲜洋葱，在4℃下混合匀浆，再用高速匀浆器15000r / min，破碎细胞结构2min。将洋葱匀浆放入50ml离心管中，料液比（1:10），加入35mL含0.1％盐酸的80％乙醇，在室温下超声波（功率700W）处理3次，每次10min。用布氏漏斗真空过滤，再用30mL含有0.1％盐酸的80％乙醇溶液萃取残余物，合并3次滤液。 离心4000r/min，离心10分钟，在30℃真空中去除上清液，除去甲醇，然后用0.01％盐酸去离子水定容至25 mL。
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