茯砖茶中金花菌”生长条件研究
摘要：茯砖茶是一种非常重要的砖茶，茯砖茶表面普遍存在“金花菌”，即冠突散囊菌。“金花菌”是茯砖茶品质好坏的重要指标。本研究分离茯砖茶中的优势菌，通过形态鉴定为冠突散囊菌，将分离纯化出的“金花菌”斜面保存在4℃冰箱中，以便后面使用。经鉴定培养“金花菌”的最适培养基为改良马丁培养基，根据冠突散囊菌属性控制培养基营养条件优化最适培养基，最后选取冠突散囊菌生长的最佳最优培养基为：氯化钠4%，葡萄糖4%，蛋白胨1%，酵母浸出粉0.05%，pH值为6。在了解了“金花菌”的生长条件后，可根据试验结果进行扩大培养。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料和方法 2
1.1 材料与设备 2
1.1.1 茶叶 2
1.1.2试剂 2
1.1.3设备 2
1.1.4培养基以及配制 2
1.2 方法 3
1.2.1茯砖茶中金花菌的分离 3
1.2.2金花菌的形态学鉴定 3
1.2.3确定最佳培养基 3
1.2.4优化最佳培养基 3
2 结果与分析 4
2.1 分离纯化出冠突散囊菌的优势菌种 4
2.2 最适合冠突散囊菌生长的培养基 4
2.3 确定最佳的改良马丁培养基 5
2.3.1 含氮量和含碳量对冠突散囊菌生长的影响 6
2.3.2 NaCl浓度对冠突散囊囊菌生长影响 6
2.3.3 酸碱度对冠突散囊囊菌生长影响 7
2.3.4 茶叶茶汁对冠突散囊囊菌生长影响 7
3 讨论 8
致谢 8
参考文献： 9
茯砖茶中“金花菌”的生长条件研究
引言
茯砖茶茶砖表面普遍存在一种金黄色的小点，俗称“金花”，是由“金花菌”形成的闭囊壳堆。金花菌学名冠突散囊菌，这种菌能有效的抑制肠癌，胃癌，肝癌细胞的扩散。在高倍放大镜下，“金花”呈金黄色，形状如球形蘑菇。“金花””的数量和大小是判断茯砖茶品质好坏的重要指标，
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
而且有试验证书“金花”的多少影响着茯砖茶的口感、色泽以及香气等[1]。
大量的研究和临床数据表明，冠突散囊菌的功效与前年灵芝孢子粉非常的类同，能够有效的提升人体免疫能力，防癌，抗癌，抗氧化，抗衰老，令人延年益寿，冠突散囊菌是也是优质黑茶的标志。
过去，人们一直认为冠突散囊菌是茯砖茶特有的[2] .但最近研究表明，在康砖和青砖茶中也可分离到冠突散囊菌[3]。该菌对营养物质的需求及外界环境条件的要求很低，能在PDA、孟加拉红培养基上生长，适应力强[4]。蔡正安等[5]选用几种非黑茶茶类和几种常见的药用植物枝叶为材料，模拟茯砖茶成型工艺和发花工艺，在不接种冠突散囊菌的条件下进行“发花”试验，结果表明，这些材料中均有“金花”长出。结果显示冠突散囊菌可在多种材料上生长并产生子囊孢子，说明其生长时对寄主所含的营养并无特殊要求。
大部分冠突散囊菌菌株可以在CZG（改良察氏培养基),PDA培养基上较快生长，且呈现“s”形生长曲线;其生长最适温度为2 5 ~3 5 ℃，产生子囊孢子的最佳温度为25~30 ℃，最适生长pH值为5[67]。一般在温度低于30 ℃和低渗透压条件下产生子囊孢子[8]。但在40℃条件下，若CZG培养基中的NaCI质量分数达14 %或蔗糖质量分数达60 %时即进行无性繁殖，产生分生孢子等结构[9]。液态培养条件下，与未添加茶汤培养基相比，冠突散囊菌在添加黑茶汤的培养基中生长较好[1011]，这可能是由于茶汤中所含的特殊物质和微量元素促进了冠突散囊菌的生长。
本研究通过实验获取冠突散囊菌最适生长条件，以此扩大冠突散囊菌的生产，以提高茶叶品质。
1 材料和方法
1.1 材料与设备
1.1.1 茶叶
湖南益阳茶厂生产的茯砖茶，净重量500 g。
1.1.2试剂
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠（NaCl）、硫酸镁（MgSO47H2O）、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸亚铁、马铃薯、蔗糖、葡萄糖、酵母浸出粉、氯霉素、氢氧化钠溶液（l mol/L）、稀盐酸（l mo1/L）、琼脂粉。
1.1.3设备
培养箱、超净工作台、9 CM培养皿、玻棒、酒精灯、摇床、10 CM试管、分析天平、电子天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、pH计
1.1.4培养基以及配制
（1）PDA培养基
称取300 g马铃薯，洗净后去皮切碎，加入l000 mL蒸馏水煮沸约30 min，双层纱布过滤，再加入20 g葡萄糖与20g琼脂，最后用蒸馏水定容至l000 mL，高压灭菌备用。
（2）察氏培养基
称取硝酸钠（NaNO3）3 g、氯化钾（Kcl）0.5 g、硫酸镁（MgS047H20） 0.5 g、磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）1 g、硫酸亚铁（Fe2SO4）0.0l g、蔗糖
30 g、琼脂20 g、蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（3）改良察氏培养基
硝酸钠（NaNO3）20.0 g，磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）0.7 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.3 g，氯化钾（KCl）0.5 g/L，硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g，硫酸亚铁（Fe2SO4）0.01 g，蔗糖30.0 g，吐温0.5 ml，蒸馏水定容到
l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（4）高氏一号培养基
淀粉20 g，氯化钠（NaCl）0.5 g，硝酸钾（KNO3）1 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.5 g，硫酸镁（MgSO47H2O） 0.5 g，硫酸亚铁（FeSO47H2O） 0.01 g，琼脂 20 g，蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（5）改良马丁培养基
称取蛋白胨5.0 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）1.0 g，硫酸镁（MgSO47H2O） 0.5 g，酵母粉2.0 g，葡萄糖20.0 g，蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（6）改良PDA培养基
称取牛肉膏2 g，酵母粉2 g，磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）2.5 g和吐温20 1.5 ml蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（7）孟加拉红培养基
称取蛋白胨5 g、葡萄糖10 g、磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）1 g、硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g、琼脂20 g、1/3000孟加拉红溶液100 mL、蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料和方法 2
1.1 材料与设备 2
1.1.1 茶叶 2
1.1.2试剂 2
1.1.3设备 2
1.1.4培养基以及配制 2
1.2 方法 3
1.2.1茯砖茶中金花菌的分离 3
1.2.2金花菌的形态学鉴定 3
1.2.3确定最佳培养基 3
1.2.4优化最佳培养基 3
2 结果与分析 4
2.1 分离纯化出冠突散囊菌的优势菌种 4
2.2 最适合冠突散囊菌生长的培养基 4
2.3 确定最佳的改良马丁培养基 5
2.3.1 含氮量和含碳量对冠突散囊菌生长的影响 6
2.3.2 NaCl浓度对冠突散囊囊菌生长影响 6
2.3.3 酸碱度对冠突散囊囊菌生长影响 7
2.3.4 茶叶茶汁对冠突散囊囊菌生长影响 7
3 讨论 8
致谢 8
参考文献： 9
茯砖茶中“金花菌”的生长条件研究
引言
茯砖茶茶砖表面普遍存在一种金黄色的小点，俗称“金花”，是由“金花菌”形成的闭囊壳堆。金花菌学名冠突散囊菌，这种菌能有效的抑制肠癌，胃癌，肝癌细胞的扩散。在高倍放大镜下，“金花”呈金黄色，形状如球形蘑菇。“金花””的数量和大小是判断茯砖茶品质好坏的重要指标，
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
而且有试验证书“金花”的多少影响着茯砖茶的口感、色泽以及香气等[1]。
大量的研究和临床数据表明，冠突散囊菌的功效与前年灵芝孢子粉非常的类同，能够有效的提升人体免疫能力，防癌，抗癌，抗氧化，抗衰老，令人延年益寿，冠突散囊菌是也是优质黑茶的标志。
过去，人们一直认为冠突散囊菌是茯砖茶特有的[2] .但最近研究表明，在康砖和青砖茶中也可分离到冠突散囊菌[3]。该菌对营养物质的需求及外界环境条件的要求很低，能在PDA、孟加拉红培养基上生长，适应力强[4]。蔡正安等[5]选用几种非黑茶茶类和几种常见的药用植物枝叶为材料，模拟茯砖茶成型工艺和发花工艺，在不接种冠突散囊菌的条件下进行“发花”试验，结果表明，这些材料中均有“金花”长出。结果显示冠突散囊菌可在多种材料上生长并产生子囊孢子，说明其生长时对寄主所含的营养并无特殊要求。
大部分冠突散囊菌菌株可以在CZG（改良察氏培养基),PDA培养基上较快生长，且呈现“s”形生长曲线;其生长最适温度为2 5 ~3 5 ℃，产生子囊孢子的最佳温度为25~30 ℃，最适生长pH值为5[67]。一般在温度低于30 ℃和低渗透压条件下产生子囊孢子[8]。但在40℃条件下，若CZG培养基中的NaCI质量分数达14 %或蔗糖质量分数达60 %时即进行无性繁殖，产生分生孢子等结构[9]。液态培养条件下，与未添加茶汤培养基相比，冠突散囊菌在添加黑茶汤的培养基中生长较好[1011]，这可能是由于茶汤中所含的特殊物质和微量元素促进了冠突散囊菌的生长。
本研究通过实验获取冠突散囊菌最适生长条件，以此扩大冠突散囊菌的生产，以提高茶叶品质。
1 材料和方法
1.1 材料与设备
1.1.1 茶叶
湖南益阳茶厂生产的茯砖茶，净重量500 g。
1.1.2试剂
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠（NaCl）、硫酸镁（MgSO47H2O）、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸亚铁、马铃薯、蔗糖、葡萄糖、酵母浸出粉、氯霉素、氢氧化钠溶液（l mol/L）、稀盐酸（l mo1/L）、琼脂粉。
1.1.3设备
培养箱、超净工作台、9 CM培养皿、玻棒、酒精灯、摇床、10 CM试管、分析天平、电子天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、pH计
1.1.4培养基以及配制
（1）PDA培养基
称取300 g马铃薯，洗净后去皮切碎，加入l000 mL蒸馏水煮沸约30 min，双层纱布过滤，再加入20 g葡萄糖与20g琼脂，最后用蒸馏水定容至l000 mL，高压灭菌备用。
（2）察氏培养基
称取硝酸钠（NaNO3）3 g、氯化钾（Kcl）0.5 g、硫酸镁（MgS047H20） 0.5 g、磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）1 g、硫酸亚铁（Fe2SO4）0.0l g、蔗糖
30 g、琼脂20 g、蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（3）改良察氏培养基
硝酸钠（NaNO3）20.0 g，磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）0.7 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.3 g，氯化钾（KCl）0.5 g/L，硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g，硫酸亚铁（Fe2SO4）0.01 g，蔗糖30.0 g，吐温0.5 ml，蒸馏水定容到
l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（4）高氏一号培养基
淀粉20 g，氯化钠（NaCl）0.5 g，硝酸钾（KNO3）1 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.5 g，硫酸镁（MgSO47H2O） 0.5 g，硫酸亚铁（FeSO47H2O） 0.01 g，琼脂 20 g，蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（5）改良马丁培养基
称取蛋白胨5.0 g，磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）1.0 g，硫酸镁（MgSO47H2O） 0.5 g，酵母粉2.0 g，葡萄糖20.0 g，蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（6）改良PDA培养基
称取牛肉膏2 g，酵母粉2 g，磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）2.5 g和吐温20 1.5 ml蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
（7）孟加拉红培养基
称取蛋白胨5 g、葡萄糖10 g、磷酸二氢钾（KH2PO43H2O）1 g、硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g、琼脂20 g、1/3000孟加拉红溶液100 mL、蒸馏水定容到l000 mL，搅拌均匀，高压灭菌备用。
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