萝卜同源四倍体的诱导与鉴定
摘要：比较胭脂红萝卜在不同浓度秋水仙素诱导下的效果，通过形态学鉴定和细胞学鉴定的方法初步鉴定同源四倍体。结果表明，1.0g·L-1浓度秋水仙素处理胭脂红品种的诱导效率较高。诱导过程中，经处理的幼苗生长缓慢，真叶期叶片皱缩、加厚、颜色加深；与二倍体相比，四倍体萝卜的花粉粒变大，形态变异，气孔密度降低，花器官增大。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 实验材料 1
1.2 诱导方法1
1.3鉴定方法2
1.3.1苗期鉴定2
1.3.2气孔鉴定2
1.3.3花期鉴定2
1.4统计分析方法2
2 结果与分析2
2.1不同品种、不同处理诱导同源四倍体萝卜的效果 2
2.2二、四倍体萝卜形态学特征鉴定3
2.2.1苗期鉴定结果3
2.2.2花器官鉴定3
2.3二、四倍体萝卜解剖学特征5
2.3.1 气孔鉴定5
2.3.2花粉萌发率鉴定6
2.3.3 花粉粒形态鉴定6
3讨论7
致谢7
参考文献7
图1 二、四倍体萝卜苗期形态学特征比较3
图2 胭脂红萝卜二、四倍体花器官形态学特征比较4
图3 二、四倍体气孔形态比较5
图4 二、四倍体花粉萌发率的对比6
图5 二、四倍体花粉形态特征对比6
表1 不同品种萝卜受秋仙素诱导同源四倍体的效果3
表2 二倍体与同源四倍体萝卜花器官比较4
表3 二倍体和同源四倍体萝卜解剖学比较5
萝卜同源四倍体的诱导与鉴定
引言
萝卜为十字花科萝卜属植物，染色体数2n = 2x = 18, 是我国最大的蔬菜作物之一，在我国蔬菜周年供应中占有重要地位。胭脂红是生活中常见的萝卜品种，针对这种常见品种进行研究更具有实用性。多倍体因其“巨大性” 的特点使多倍体育种逐渐成为园艺作物, 尤其是以营
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
养器官或多汁多肉果实为食用器官的蔬菜作物育种的主要途径之一(孙敏红,et al,2004)。目前利用秋水仙素诱导四倍体的研究在不结球白菜(韩业飞,et al,2013)、黄瓜(陈劲枫,et al,2004)、结球甘蓝(张巍巍,et al,2015)、茄子(李树贤,et al,2000)等蔬菜上已有报道。20世纪中期国外进行了四倍体萝卜的研究(刘慧吉,et al,1995)，我国张纪增等在1976至1981年也进行了萝卜多倍体育种的研究。Loureiro等(Loureiro J,et al,2005)认为四倍体植株比二倍体具有优越性，除形态特征发生变化外，多倍体植株的遗传适应性、抗逆性以及功能成分等也会得到改进。近几年对四倍体萝卜的研究报道较少，但长期以来，受育种技术及水平的限制，资源利用及创新与国外先进水平相比还有很大差距。所以对萝卜的育种技术进行创新，加速萝卜的育种工作进程，改善和提高萝卜育种工作的效率是现代蔬菜作物遗传育种中重要的研究方向。本试验采用形态学鉴定和细胞学鉴定的方法, 利用不同秋水仙素诱变两常见品种二倍体萝卜，创制四倍体萝卜新种质。
1 材料与方法
1．1 试验材料
二倍体萝卜(2n=2x=18)，大学园艺学院萝卜课题组保存的萝卜品种：胭脂红。
1．2 诱导方法
2014年9月26日播种，采用1gL1和2gL1秋水仙素水溶液处理二倍体萝卜幼苗两叶一心期的幼苗生长点，每天上午8：00、下午6:00用胶头滴管各滴一次，每个浓度分别处理10株幼苗，每个质量浓度处理6次。以滴蒸馏水处理为对照(CK)。处理期间注意遮荫，以防药液分解和挥发，过一段时间后，去掉遮阳网，常规肥水管理，促其生长。
1．3 鉴定方法
1.3.1苗期鉴定
生长点滴定处理后，当叶片达到4~5片时，观察处理植株的苗期生长情况。然后根据苗期表型特征进行鉴定。生长缓慢，叶肉增厚，叶色加深等明显者定为变异株。统计变异株数，计算变异率。
1.3.2气孔鉴定
气孔大小、密度的测定：撕取二倍体和变异株的成熟叶片一小块下表皮，置载玻片上，用I2KI稀溶液滴1滴，盖片，在Nikon显微镜（物镜40x，目镜10x）下，用显微测微尺测量气孔长度、宽度、气孔密度（个/400倍镜视野）并拍照。
1.3.3花期鉴定
萝卜开花时，对经苗期鉴定为变异株的植株，进行观察，记录和复选。并在花期，观察花器官的形态特征，用游标卡尺测四倍体突变株与对照花器官的大小，包括花蕾的横径和纵径，花瓣纵径与横径，雄蕊长度，雌蕊长度，测量10朵花求平均值。与对照相比，花蕾、花瓣大、雄蕊、雌蕊长的定为变异株。
花粉粒观察：采用当天开花的新鲜花，将花粉均匀涂在载玻片上，在Nikon显微镜（物镜40x，目镜10x）下观察花粉粒的形态，并用显微测微尺测量花粉粒的纵径与横径。并观察花粉粒的形态。
花粉萌发力的测定：于晴天上午9~10时左右分别采取二倍体和同源四倍体盛花期的花瓣张开但尚未散粉的花，采用花粉悬浮培养技术，吸取少量的培养基（20%蔗糖，0.01%硼酸，pH值7.0）于凹形载玻片上，将刚采集的花粉抖落在培养基上，后将载玻片放入铺有湿滤纸的培养皿中，于25℃的培养箱中培养，24h后观察花粉的萌发情况，花粉管长度大于或等于花粉粒直径的花粉粒为萌发花粉粒，并求萌发率(王康,et al,2011)。
1.4统计分析方法
所获数据均采用Excel软件进行统计分析。
2 结果与分析
2．1 不同品种、不同处理诱导同源四倍体萝卜的效果
实验结果见表1，不同浓度秋水仙素处理的诱导效果不同，随着浓度的提高，变异株率下降，成活率下降。
从10株1.0gL1秋水仙素处理的胭脂红植株中共得到变异株8株，总变异株率为80%，筛选获得2株同源四倍体萝卜植株，总四倍体诱变率为20%；从10株2.0gL1秋水仙素处理的胭脂红植株中共得到变异株6株，总变异株率为60%，筛选获得1株同源四倍体萝卜植株，总四倍体诱变率为10%。因此，对于胭脂红品种，1.0gL1秋水仙素浓度处理比较能获得较多的同源四倍体植株。
表1 胭脂红萝卜受秋仙素诱导同源四倍体的效果
Table 1 Effect of colchicines treatments on induction of autotetraploid in YZH radish
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 实验材料 1
1.2 诱导方法1
1.3鉴定方法2
1.3.1苗期鉴定2
1.3.2气孔鉴定2
1.3.3花期鉴定2
1.4统计分析方法2
2 结果与分析2
2.1不同品种、不同处理诱导同源四倍体萝卜的效果 2
2.2二、四倍体萝卜形态学特征鉴定3
2.2.1苗期鉴定结果3
2.2.2花器官鉴定3
2.3二、四倍体萝卜解剖学特征5
2.3.1 气孔鉴定5
2.3.2花粉萌发率鉴定6
2.3.3 花粉粒形态鉴定6
3讨论7
致谢7
参考文献7
图1 二、四倍体萝卜苗期形态学特征比较3
图2 胭脂红萝卜二、四倍体花器官形态学特征比较4
图3 二、四倍体气孔形态比较5
图4 二、四倍体花粉萌发率的对比6
图5 二、四倍体花粉形态特征对比6
表1 不同品种萝卜受秋仙素诱导同源四倍体的效果3
表2 二倍体与同源四倍体萝卜花器官比较4
表3 二倍体和同源四倍体萝卜解剖学比较5
萝卜同源四倍体的诱导与鉴定
引言
萝卜为十字花科萝卜属植物，染色体数2n = 2x = 18, 是我国最大的蔬菜作物之一，在我国蔬菜周年供应中占有重要地位。胭脂红是生活中常见的萝卜品种，针对这种常见品种进行研究更具有实用性。多倍体因其“巨大性” 的特点使多倍体育种逐渐成为园艺作物, 尤其是以营
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
养器官或多汁多肉果实为食用器官的蔬菜作物育种的主要途径之一(孙敏红,et al,2004)。目前利用秋水仙素诱导四倍体的研究在不结球白菜(韩业飞,et al,2013)、黄瓜(陈劲枫,et al,2004)、结球甘蓝(张巍巍,et al,2015)、茄子(李树贤,et al,2000)等蔬菜上已有报道。20世纪中期国外进行了四倍体萝卜的研究(刘慧吉,et al,1995)，我国张纪增等在1976至1981年也进行了萝卜多倍体育种的研究。Loureiro等(Loureiro J,et al,2005)认为四倍体植株比二倍体具有优越性，除形态特征发生变化外，多倍体植株的遗传适应性、抗逆性以及功能成分等也会得到改进。近几年对四倍体萝卜的研究报道较少，但长期以来，受育种技术及水平的限制，资源利用及创新与国外先进水平相比还有很大差距。所以对萝卜的育种技术进行创新，加速萝卜的育种工作进程，改善和提高萝卜育种工作的效率是现代蔬菜作物遗传育种中重要的研究方向。本试验采用形态学鉴定和细胞学鉴定的方法, 利用不同秋水仙素诱变两常见品种二倍体萝卜，创制四倍体萝卜新种质。
1 材料与方法
1．1 试验材料
二倍体萝卜(2n=2x=18)，大学园艺学院萝卜课题组保存的萝卜品种：胭脂红。
1．2 诱导方法
2014年9月26日播种，采用1gL1和2gL1秋水仙素水溶液处理二倍体萝卜幼苗两叶一心期的幼苗生长点，每天上午8：00、下午6:00用胶头滴管各滴一次，每个浓度分别处理10株幼苗，每个质量浓度处理6次。以滴蒸馏水处理为对照(CK)。处理期间注意遮荫，以防药液分解和挥发，过一段时间后，去掉遮阳网，常规肥水管理，促其生长。
1．3 鉴定方法
1.3.1苗期鉴定
生长点滴定处理后，当叶片达到4~5片时，观察处理植株的苗期生长情况。然后根据苗期表型特征进行鉴定。生长缓慢，叶肉增厚，叶色加深等明显者定为变异株。统计变异株数，计算变异率。
1.3.2气孔鉴定
气孔大小、密度的测定：撕取二倍体和变异株的成熟叶片一小块下表皮，置载玻片上，用I2KI稀溶液滴1滴，盖片，在Nikon显微镜（物镜40x，目镜10x）下，用显微测微尺测量气孔长度、宽度、气孔密度（个/400倍镜视野）并拍照。
1.3.3花期鉴定
萝卜开花时，对经苗期鉴定为变异株的植株，进行观察，记录和复选。并在花期，观察花器官的形态特征，用游标卡尺测四倍体突变株与对照花器官的大小，包括花蕾的横径和纵径，花瓣纵径与横径，雄蕊长度，雌蕊长度，测量10朵花求平均值。与对照相比，花蕾、花瓣大、雄蕊、雌蕊长的定为变异株。
花粉粒观察：采用当天开花的新鲜花，将花粉均匀涂在载玻片上，在Nikon显微镜（物镜40x，目镜10x）下观察花粉粒的形态，并用显微测微尺测量花粉粒的纵径与横径。并观察花粉粒的形态。
花粉萌发力的测定：于晴天上午9~10时左右分别采取二倍体和同源四倍体盛花期的花瓣张开但尚未散粉的花，采用花粉悬浮培养技术，吸取少量的培养基（20%蔗糖，0.01%硼酸，pH值7.0）于凹形载玻片上，将刚采集的花粉抖落在培养基上，后将载玻片放入铺有湿滤纸的培养皿中，于25℃的培养箱中培养，24h后观察花粉的萌发情况，花粉管长度大于或等于花粉粒直径的花粉粒为萌发花粉粒，并求萌发率(王康,et al,2011)。
1.4统计分析方法
所获数据均采用Excel软件进行统计分析。
2 结果与分析
2．1 不同品种、不同处理诱导同源四倍体萝卜的效果
实验结果见表1，不同浓度秋水仙素处理的诱导效果不同，随着浓度的提高，变异株率下降，成活率下降。
从10株1.0gL1秋水仙素处理的胭脂红植株中共得到变异株8株，总变异株率为80%，筛选获得2株同源四倍体萝卜植株，总四倍体诱变率为20%；从10株2.0gL1秋水仙素处理的胭脂红植株中共得到变异株6株，总变异株率为60%，筛选获得1株同源四倍体萝卜植株，总四倍体诱变率为10%。因此，对于胭脂红品种，1.0gL1秋水仙素浓度处理比较能获得较多的同源四倍体植株。
表1 胭脂红萝卜受秋仙素诱导同源四倍体的效果
Table 1 Effect of colchicines treatments on induction of autotetraploid in YZH radish
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