切花菊磷酸盐转运蛋白pht1家族基因的克隆和表达分析
摘要：克隆菊花磷酸盐转运蛋白基因CmPTs并分析其响应磷处理的表达特性，从而为菊花磷高效利用基因工程育种提供基因资源。本研究通过设计特异性引物，利用RT-PCR与RACE等技术克隆了切花菊品种‘南农银山’磷转运蛋白基因部分全长cDNA，命名为CmPT4。序列分析显示，CmPT4部分序列1 730bp，开放阅读框（ORF）为1 605 bp，编码535个氨基酸，跨膜结构预测分析表明该蛋白由12个亲脂的跨膜域（TM）组成，推测为一个跨膜蛋白。序列比对发现，CmPT4与已知的高亲和磷转运蛋白同源性很高，达到71.82%～78.85%。系统进化树分析表明，CmPT4和水稻的磷转运蛋白OsPT8的亲缘关系比较接近。CmPT4序列上存在Pht1家族磷转运蛋白保守特征序列GGDYPLSATIMSE，且位于第4个跨膜域，故CmPT4属于Pht1家族成员。 定量结果说明CmPT4主要在叶片和茎中表达，并受低磷抑制，推测CmPT4与植物内部磷素运输有关。
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 试剂与仪器2
1.2.1 试剂及菌株2
1.2.2 仪器设备2
1.3 实验方法2
1.3.1 克隆CmPT4基因 2
1.3.2 CmPT4基因的表达分析6
1.3.3 实时定量荧光PCR7
2 结果与分析8
2.1 CmPT4基因的克隆8
2.1.1 CmPT4基因中间保守片段的获得8
2.1.2 CmPT4基因3’RACE结果9
2.1.3 CmPT4基因5’RACE结果9
2.1.4 CmPT4基因cDNA全长及ORF的获得10
2.2 CmPT4基因及编码蛋白的生物信息学分析11
2.2.1 CmPT4基因cDNA序列及编码氨基酸疏水性分析和跨膜结构预测11
2.2.2 CmPT4氨基酸序列同源性比对12
2.3 CmPT4系统进化树分析 13
2.4
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
CmPT4荧光定量14
3 讨论15
致谢15
参考文献16
附录 植物总RNA的提取17
表一 CmPT4定量引物7
图一 ‘南农银山’CmPT4基因中间片段PCR扩增8
图二 ‘南农银山’CmPT4基因3’ RACE PCR扩增9
图三 ‘南农银山’CmPT4基因全长序列PCR扩增10
图四 CmPT4的疏水性分析11
图五 CmPT4与其它植物的高亲和磷转运蛋白的氨基酸序列比对12
图六 CmPT4的系统进化树分析（ClustalX & MEGA 4.0软件分析）13
图七 CmPT4在‘南农银山’中的表达模式14
切花菊磷酸盐转运蛋白Pht1家族基因的克隆和表达分析
目录
摘要1
关键词1
Abstract 1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 试剂与仪器2
1.2.1 试剂及菌株2
1.2.2 仪器设备2
1.3 实验方法2
1.3.1 克隆CmPT4基因 2
1.3.2 CmPT4基因的表达分析6
1.3.3 实时定量荧光PCR7
2 结果与分析8
2.1 CmPT4基因的克隆8
2.1.1 CmPT4基因中间保守片段的获得8
2.1.2 CmPT4基因3’RACE结果9
2.1.3 CmPT4基因5’RACE结果9
2.1.4 CmPT4基因cDNA全长及ORF的获得10
2.2 CmPT4基因及编码蛋白的生物信息学分析11
2.2.1 CmPT4基因cDNA序列及编码氨基酸疏水性分析和跨膜结构预测11
2.2.2 CmPT4氨基酸序列同源性比对12
2.3 CmPT4系统进化树分析 13
2.4
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CmPT4荧光定量14
3 讨论15
致谢15
参考文献16
附录 植物总RNA的提取17
表一 CmPT4定量引物7
图一 ‘南农银山’CmPT4基因中间片段PCR扩增8
图二 ‘南农银山’CmPT4基因3’ RACE PCR扩增9
图三 ‘南农银山’CmPT4基因全长序列PCR扩增10
图四 CmPT4的疏水性分析11
图五 CmPT4与其它植物的高亲和磷转运蛋白的氨基酸序列比对12
图六 CmPT4的系统进化树分析（ClustalX & MEGA 4.0软件分析）13
图七 CmPT4在‘南农银山’中的表达模式14
切花菊磷酸盐转运蛋白Pht1家族基因的克隆和表达分析
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