龙胆中龙胆苦苷提取工艺的研究
摘 要龙胆具有益肝胆的功能，减轻炎症，强化胃和降低血压。龙胆主要含有环烯醚萜苷，龙胆是主要的有效成分。本试验以龙胆科龙胆的干燥根和根茎为原料，采用加热和回流提取法测定龙胆里面主要的成分龙胆苦苷提取率，结合单因素的实验的结果，研究了乙醇的浓度（A）,提取的次数（B），提取的时间（C）和料液比（D），把龙胆苦苷提取率当作指标，进行L9（34）正交试验。研究各水平因子对于的龙胆苦苷的提取率的影响，并对结果进行预测和分析，选择了最佳的提取工艺条件，最后终于确定了乙醇的浓度（A）为70％，提取的次数（B）为3次，萃取时间（C）为1小时，料液比为（1:10），萃取率为67.82 mg / g。
目 录
1 绪论 1
1.1 龙胆苦苷提取方法 1
1.1.1 超声波水提法 1
1.1.2 超声波的乙醇提法 1
1.1.3 酒炙法 2
1.1.4 乙醇提取法 2
1.1.5 乙醇热回流法 2
1.1.6 高速逆流色谱结合大孔树脂法 2
1.2 龙胆的药理作用 2
1.2.1 利胆以及保肝的作用 2
1.2.2 利尿作用 3
1.2.3 对于中枢神经的系统作用 3
1.2.4 对心肌缺血再灌注损伤有保护作用 3
1.2.5 对多种肝损伤有一定的保护作用 3
1.2.6 镇痛作用 4
1.2.7 对肺损伤有保护作用 5
1.2.8 减轻CCl4的毒性作用 4
1.3 龙胆的临床应用 5
1.4 研究的目的和意义 5
2 实验内容 7
2.1 实验仪器 7
2.2实验与结果 7
2.2.1供试品溶液的制备 7
2.2.2 最大吸收波长的确定 7
2.2.3对照品溶液的制备 7
2.2.4标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 8
2.2.6 重复性试验 8
2.2.7 稳定性试验 8
2.2.8 加样回收率试验 8
2.3 单因素实验的考察 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
9
2.3.1提取溶剂浓度的选择 9
2.3.2提取次数的选择 9
2.3.3提取的时间选择 9
2.3.4料液比的选择 10
2.4 正交试验设计 10
3 结论 13
参考文献 14
致谢 16
1 绪论
龙胆药材性寒，入肝经，主胃经，具有泻肝火，除下焦热证，，通胆经，清热除湿的功效[1]，临床主要是用来治疗湿热性的水痘、红眼、抽搐等病症。现代天然化学研究的结果表示，龙胆药材中含有着苷类、生物碱，环烯醚萜苷类、环烯萜苷类等几类成分 [2]。龙胆中研究比较多的活性研究成分分别是龙胆素和当归素，他们具有独特的免疫能力、还有抗炎等多种药理作用。我国龙胆资源特别的多，而且龙胆的药用价值非常高。所以说，龙胆的活性成分相关质量检测以及鉴定分析特别重要。龙胆苦苷具有利胆、消炎、健胃、降压等作用。目前，对龙胆中龙胆苦苷提取的研究越来越多，因此开发龙胆中的龙胆苦苷具有重要意义[3]。
其次，龙胆应用范围日益扩大，在危、急、重症的治疗中起着重要作用，而且在治疗肝胆方面也显示着强大的威力，应积极深入开展对龙胆开发利用的研究。将龙胆(单味或以龙胆为主组成配方)制成丸、散、膏、丹或利用现代科学技术制成片剂、散剂、冲剂、针剂、栓剂、霜剂、洗剂、酊剂、口服液、灌肠液、透析液等投放市场[4]，不但会赢得国内外巨大的市场，获得丰厚的利润，而且对祖国医药学的传承创新、走向世界，都具有重要意义。
1.1 龙胆苦苷提取方法
1.1.1 超声波水提法
操作过程：取蒸馏水20 mL，每次提取的时间长短为30 min，提取次数为3次，每一次提取的温度是35 ℃，把龙胆苦苷的质量分数做为考察的指标。分别用水、以及乙醇还有甲醇当做本次实验提取的溶剂，然后用频率为20 kHz的超声波法来提取龙胆里面的龙胆苦苷即可，且还要用HPLC法来测量样品里面的龙胆苦苷的含有量，最后的结果表明了超声波提取是可以明显的提高龙胆里面龙胆苦苷的溶出率的，通过一次正交试验法还可以确定的水超声处理起来的最佳工艺，也就是说采用20目大小的筛粒径，然后超声处理7 min，再用30倍左右的水量就可以了[5,6]。
1.1.2 超声波的乙醇提法
操作过程：用30 mL的乙醇进行实验，每次提取20 min，提取4次，提取温度为50 ℃，就可以最大程度提取出龙胆中的龙胆苦苷了[7,8]。
1.1.3 酒炙法
操作过程：把水里面提取出来的物质含量当成一个指标，然后将水提物里面的龙胆苦苷的含有量作为另外一个指标，然后再一次采用正交设计的方法筛选出来最佳的炮制工艺。把龙胆药材仔细切成5～10 mm小短段，之后大约加入药材重量1/5 的白酒，然后闷润上2 h ,再用文火炒出来的炮制品里面水浸出物的含量还有水浸出物里面龙胆苦苷的含有量是最高的[9]。
1.1.4 乙醇提取法
操作过程：用正交试验的方法来进行筛选，将龙胆苦苷含有量做为指标，选取最佳的提取工艺。最终确定为乙醇的体积浓度是700 mL / L，每次提取所用的时间是36小时，所用的溶剂的量大约为药材的10倍即可，提取的次数为3次[10]的时候龙胆苦苷有较大的提取率。
1.1.5 乙醇热回流法
操作过程：选择出来正交试验法对与龙胆里面对龙胆红素等提取工艺来进行加热回流，然后再用60 mL / L乙醇进行多次回流，每一次2 h，乙醇的用量就是药材的重量18倍[11]左右。
1.1.6高速逆流色谱结合大孔树脂法
操作过程：把龙胆里面纯度较高的龙胆苦苷[12]用最快的办法分离出来，即高速逆流色谱法：直接用D101这大孔吸附树脂柱对药物中用乙醇提出来的物质进行分离。将正丁醇水（2：1：3）作为溶剂的体系[13,14]，下面一层相是流动的相，流速为1.5毫升/分钟，检测出来的波长为254 nm时，分离的温度是30 ℃，最后再将得出来的物质通过HPLC还有质谱法来进行分析。然后将测试的结果和对照品溶液进行比较[15]，最后得出结论。
1.2 龙胆的药理作用
龙胆草以及龙胆苦苷可以促使胃液以及胃酸不断的分泌。对那些引起肠胃不适的小鼠来说，皮下注射少量的龙胆苦苷就可以让它们产生胃液，游离盐酸不断的变多，食欲不断地增加。在舌下注释或者静脉注射没有任何作用的，因为这样龙胆苦苷进入不到肠胃里面。龙胆苦苷可以让胃液不断的分泌出来，让游离酸不断地增加。
目 录
1 绪论 1
1.1 龙胆苦苷提取方法 1
1.1.1 超声波水提法 1
1.1.2 超声波的乙醇提法 1
1.1.3 酒炙法 2
1.1.4 乙醇提取法 2
1.1.5 乙醇热回流法 2
1.1.6 高速逆流色谱结合大孔树脂法 2
1.2 龙胆的药理作用 2
1.2.1 利胆以及保肝的作用 2
1.2.2 利尿作用 3
1.2.3 对于中枢神经的系统作用 3
1.2.4 对心肌缺血再灌注损伤有保护作用 3
1.2.5 对多种肝损伤有一定的保护作用 3
1.2.6 镇痛作用 4
1.2.7 对肺损伤有保护作用 5
1.2.8 减轻CCl4的毒性作用 4
1.3 龙胆的临床应用 5
1.4 研究的目的和意义 5
2 实验内容 7
2.1 实验仪器 7
2.2实验与结果 7
2.2.1供试品溶液的制备 7
2.2.2 最大吸收波长的确定 7
2.2.3对照品溶液的制备 7
2.2.4标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 8
2.2.6 重复性试验 8
2.2.7 稳定性试验 8
2.2.8 加样回收率试验 8
2.3 单因素实验的考察 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
9
2.3.1提取溶剂浓度的选择 9
2.3.2提取次数的选择 9
2.3.3提取的时间选择 9
2.3.4料液比的选择 10
2.4 正交试验设计 10
3 结论 13
参考文献 14
致谢 16
1 绪论
龙胆药材性寒，入肝经，主胃经，具有泻肝火，除下焦热证，，通胆经，清热除湿的功效[1]，临床主要是用来治疗湿热性的水痘、红眼、抽搐等病症。现代天然化学研究的结果表示，龙胆药材中含有着苷类、生物碱，环烯醚萜苷类、环烯萜苷类等几类成分 [2]。龙胆中研究比较多的活性研究成分分别是龙胆素和当归素，他们具有独特的免疫能力、还有抗炎等多种药理作用。我国龙胆资源特别的多，而且龙胆的药用价值非常高。所以说，龙胆的活性成分相关质量检测以及鉴定分析特别重要。龙胆苦苷具有利胆、消炎、健胃、降压等作用。目前，对龙胆中龙胆苦苷提取的研究越来越多，因此开发龙胆中的龙胆苦苷具有重要意义[3]。
其次，龙胆应用范围日益扩大，在危、急、重症的治疗中起着重要作用，而且在治疗肝胆方面也显示着强大的威力，应积极深入开展对龙胆开发利用的研究。将龙胆(单味或以龙胆为主组成配方)制成丸、散、膏、丹或利用现代科学技术制成片剂、散剂、冲剂、针剂、栓剂、霜剂、洗剂、酊剂、口服液、灌肠液、透析液等投放市场[4]，不但会赢得国内外巨大的市场，获得丰厚的利润，而且对祖国医药学的传承创新、走向世界，都具有重要意义。
1.1 龙胆苦苷提取方法
1.1.1 超声波水提法
操作过程：取蒸馏水20 mL，每次提取的时间长短为30 min，提取次数为3次，每一次提取的温度是35 ℃，把龙胆苦苷的质量分数做为考察的指标。分别用水、以及乙醇还有甲醇当做本次实验提取的溶剂，然后用频率为20 kHz的超声波法来提取龙胆里面的龙胆苦苷即可，且还要用HPLC法来测量样品里面的龙胆苦苷的含有量，最后的结果表明了超声波提取是可以明显的提高龙胆里面龙胆苦苷的溶出率的，通过一次正交试验法还可以确定的水超声处理起来的最佳工艺，也就是说采用20目大小的筛粒径，然后超声处理7 min，再用30倍左右的水量就可以了[5,6]。
1.1.2 超声波的乙醇提法
操作过程：用30 mL的乙醇进行实验，每次提取20 min，提取4次，提取温度为50 ℃，就可以最大程度提取出龙胆中的龙胆苦苷了[7,8]。
1.1.3 酒炙法
操作过程：把水里面提取出来的物质含量当成一个指标，然后将水提物里面的龙胆苦苷的含有量作为另外一个指标，然后再一次采用正交设计的方法筛选出来最佳的炮制工艺。把龙胆药材仔细切成5～10 mm小短段，之后大约加入药材重量1/5 的白酒，然后闷润上2 h ,再用文火炒出来的炮制品里面水浸出物的含量还有水浸出物里面龙胆苦苷的含有量是最高的[9]。
1.1.4 乙醇提取法
操作过程：用正交试验的方法来进行筛选，将龙胆苦苷含有量做为指标，选取最佳的提取工艺。最终确定为乙醇的体积浓度是700 mL / L，每次提取所用的时间是36小时，所用的溶剂的量大约为药材的10倍即可，提取的次数为3次[10]的时候龙胆苦苷有较大的提取率。
1.1.5 乙醇热回流法
操作过程：选择出来正交试验法对与龙胆里面对龙胆红素等提取工艺来进行加热回流，然后再用60 mL / L乙醇进行多次回流，每一次2 h，乙醇的用量就是药材的重量18倍[11]左右。
1.1.6高速逆流色谱结合大孔树脂法
操作过程：把龙胆里面纯度较高的龙胆苦苷[12]用最快的办法分离出来，即高速逆流色谱法：直接用D101这大孔吸附树脂柱对药物中用乙醇提出来的物质进行分离。将正丁醇水（2：1：3）作为溶剂的体系[13,14]，下面一层相是流动的相，流速为1.5毫升/分钟，检测出来的波长为254 nm时，分离的温度是30 ℃，最后再将得出来的物质通过HPLC还有质谱法来进行分析。然后将测试的结果和对照品溶液进行比较[15]，最后得出结论。
1.2 龙胆的药理作用
龙胆草以及龙胆苦苷可以促使胃液以及胃酸不断的分泌。对那些引起肠胃不适的小鼠来说，皮下注射少量的龙胆苦苷就可以让它们产生胃液，游离盐酸不断的变多，食欲不断地增加。在舌下注释或者静脉注射没有任何作用的，因为这样龙胆苦苷进入不到肠胃里面。龙胆苦苷可以让胃液不断的分泌出来，让游离酸不断地增加。
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