山豆根中苦参碱的提取优化研究
摘 要山豆根是我国常见的中草药，有效部位主要是其干燥根与根茎，具有抗癌抗菌等作用，其中苦参碱是其主要有效成分之一。本文对山豆根中苦参碱的提取工艺进行优化研究。运用乙醇回流法，用紫外分光光度计测定苦参碱的含量，再进行单因素的考察和正交试验，考察了乙醇浓度、料液比、提取时间与提取次数这4个影响因素。得出最好的提取方案乙醇浓度为40%，料液比为1:25，提取时间为2h，提取次数2次。该方法简单可行，操作简便，可为苦参碱的研究提供理论依据。
目 录
1 绪论 1
1.1 山豆根中的化学成分 1
1.1.1 生物碱 1
1.1.2 多糖类 1
1.1.3 黄酮类 2
1.1.4 其他成分 2
1.2山豆根的药理及毒理作用 2
1.2.1 抗肿瘤的作用 2
1.2.2抑菌、抗病毒作用 2
1.2.3 镇痛抗炎的作用 3
1.2.4 抗肝炎、抗肝损伤作用 3
1.2.5 毒性研究 3
1.3苦参碱的药理作用 3
1.3.1 苦参碱的抗肿瘤作用 3
1.3.2苦参碱的抗炎症作用 4
1.3.3苦参碱的抗病毒作用 4
1.3.4 苦参碱的镇痛作用 4
1.3.5 苦参碱的抗心律失常作用 4
1.3.6 苦参碱的抑制免疫作用 4
1.4 各类提取方法 5
1.4.1 快速溶剂提取法 5
1.4.2 微波辅助提取法 5
1.4.3 超声波提取法 5
1.4.4 乙醇加热回流法 6
1.4.5 其他提取方法 6
2 实验部分 7
2.1 实验药品以及器材 7
2.1.1 药材与试剂 7
2.1.2 主要仪器 7
2.2 试验方法 7
2.2.1 山豆根中苦参碱的提取 7
2.3 苦参碱的含量测定 7
2.3.1 标准品和供试液的制备 8
2.3.2测定波长的选择 8
2.3.3 标准曲线绘制 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
8
2.4.单因素试验 8
2.4.1 考察乙醇浓度 8
2.4.2 考察料液比 8
2.4.3 考察提取时间 9
2.4.4 考察提取次数 9
2.5 试验结果分析 9
2.5.1 线性关系 9
2.5.2 单因素实验结果 10
2.6 正交设计优化工艺 13
2.6.1 因素水平的确定及正交表的选择 13
2.6.2 最佳提取工艺 14
2.6.3 验证试验 15
3 讨论 16
参考文献 17
致 谢 20
1 绪论
山豆根一般生长于潮湿温热的地带，一般挖采的时间在春季或者秋季，最主要的功效是解除热症。炮制步骤一般是留根去茎，用水浸置一段时间后洗干净，切成较厚的片状。颜色以深黄色为主[1]。山豆根是一味典型的药理与毒理兼具的中草药，在药理方面能抑制癌细胞生长、抵御细菌与病毒、消灭炎症和缓解疼痛、保护肝器官的损伤等多种药理作用，但其毒性上能引起各器官的毒性反应。山豆根草药或其中成药的药效、毒性不仅仅和服药的剂量、服药者的身体状况有关系，更重要的还是与提取方式、提取细节有关。
苦参碱为山豆根的化学成分之一，提到苦参碱就必须涉及其提取方法。苦参碱的提取方法有很多，如水浸泡、醇渗漉、酸水渗漉、酸水浸泡、水煎煮、醇回流、CO2超临界萃取法等等，其中渗漏、温浸法属于传统方法。主要使用蒸馏水、稀盐酸等提取溶剂，目前，药典中和工业上最常用的提取手段还是传统的提取方法。近几年来，新方法的不断出现，学者们思路更加开阔，使中药提取手段的研究上升到了一个前所未有的高度，如超临界CO2提取法是近几年来比较新颖的技术，该技术具备萃取能力高、提取充分、无高温危险、且时间效益较高，学习过程不复杂。
1.1 山豆根中的化学成分
1.1.1 生物碱
潘其明曾提取山豆根的有效部位，采用多类分离技术对化学成分展开了研究，得出了有各类型的生物碱，如：槐果碱、苦参碱、金雀花碱等等，共计27种[2]。
1.1.2 多糖类00
吴学昊曾采取MAE技术，选用的溶剂为强极性，充分利用了其技术特点，将有效成分分离开来。结论表示：山豆根多糖类的组成有：甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸等等[3]。崔瑛在他的研究中指出：山豆根的多糖分别包括淀粉类、Hemicellulose、果胶，并且其中淀粉所占比例最高[4]。
1.1.3 黄酮类
谭桂山等人通过提取、分离、整理数据之后发现山豆根黄酮类种类繁多，其中含量较多，较典型的有二氢黄酮、查耳酮类化合物、榭皮素、rutin、Maackiain等[5]。
1.1.4 其他成分
香豆素、人体所需的各种微量元素、游离的氨基酸[6]。
1.2山豆根的药理及毒理作用
在查找近年来各类山豆根的实验、文献资料后发现，山豆根具有抑制癌细胞的生长、抵御有害微生物、缓解疼痛、治疗肝性疾病和提高免疫力等多种药理作用。
1.2.1 抗肿瘤的作用
如今，各类肿瘤的发病率在全世界都在持续攀升，中国尤其明显。因此，抗肿瘤药物的研究是医药界的一个热门项目。张良等人在研究山豆根时，以大鼠为实验对象，发现曾山豆根能有效抵御特定类型的癌细胞的增殖，比如恶性黑色素瘤等[7]。徐朝晖等人还将山豆根作用于肝癌细胞，发现恶性细胞的活性在山豆根干扰之下大大减小，证明了山豆根确实对肿瘤有效[8]。
1.2.2抑菌、抗病毒作用
在面对感冒、发烧及流感等病时，一般人们在生活中首选的治疗药均西药，而西药在抗这方面的耐药性已经逐渐被人们重视，因此中成药将会是代替西药一个优先选择。丁凤荣等人采用药物敏感试验，发现山豆根对Ecoli、Streptococus、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等都有有效控制的效果[9]。胡庭俊等人发现山豆根的通过不同溶剂提取时，其抑菌效果也大大不同，也就是最小抑菌浓度均不同，并且还指出乙醇提取物较其它溶剂对嗜肉菌抑制效果更好[10]。此外在抗病毒的研究中，也有学者发现山豆根总碱对咽喉部常见的各类病毒均有抑制作用，比如：柯萨奇B型病毒 (CB) 、Elisa腺病毒 (ADV) 等等[11]。于启福等人还发现了山豆根中的有效成分能导致各类病毒中DNA的合成失败，阻止了病毒在体内的增殖[12]。
目 录
1 绪论 1
1.1 山豆根中的化学成分 1
1.1.1 生物碱 1
1.1.2 多糖类 1
1.1.3 黄酮类 2
1.1.4 其他成分 2
1.2山豆根的药理及毒理作用 2
1.2.1 抗肿瘤的作用 2
1.2.2抑菌、抗病毒作用 2
1.2.3 镇痛抗炎的作用 3
1.2.4 抗肝炎、抗肝损伤作用 3
1.2.5 毒性研究 3
1.3苦参碱的药理作用 3
1.3.1 苦参碱的抗肿瘤作用 3
1.3.2苦参碱的抗炎症作用 4
1.3.3苦参碱的抗病毒作用 4
1.3.4 苦参碱的镇痛作用 4
1.3.5 苦参碱的抗心律失常作用 4
1.3.6 苦参碱的抑制免疫作用 4
1.4 各类提取方法 5
1.4.1 快速溶剂提取法 5
1.4.2 微波辅助提取法 5
1.4.3 超声波提取法 5
1.4.4 乙醇加热回流法 6
1.4.5 其他提取方法 6
2 实验部分 7
2.1 实验药品以及器材 7
2.1.1 药材与试剂 7
2.1.2 主要仪器 7
2.2 试验方法 7
2.2.1 山豆根中苦参碱的提取 7
2.3 苦参碱的含量测定 7
2.3.1 标准品和供试液的制备 8
2.3.2测定波长的选择 8
2.3.3 标准曲线绘制 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
8
2.4.单因素试验 8
2.4.1 考察乙醇浓度 8
2.4.2 考察料液比 8
2.4.3 考察提取时间 9
2.4.4 考察提取次数 9
2.5 试验结果分析 9
2.5.1 线性关系 9
2.5.2 单因素实验结果 10
2.6 正交设计优化工艺 13
2.6.1 因素水平的确定及正交表的选择 13
2.6.2 最佳提取工艺 14
2.6.3 验证试验 15
3 讨论 16
参考文献 17
致 谢 20
1 绪论
山豆根一般生长于潮湿温热的地带，一般挖采的时间在春季或者秋季，最主要的功效是解除热症。炮制步骤一般是留根去茎，用水浸置一段时间后洗干净，切成较厚的片状。颜色以深黄色为主[1]。山豆根是一味典型的药理与毒理兼具的中草药，在药理方面能抑制癌细胞生长、抵御细菌与病毒、消灭炎症和缓解疼痛、保护肝器官的损伤等多种药理作用，但其毒性上能引起各器官的毒性反应。山豆根草药或其中成药的药效、毒性不仅仅和服药的剂量、服药者的身体状况有关系，更重要的还是与提取方式、提取细节有关。
苦参碱为山豆根的化学成分之一，提到苦参碱就必须涉及其提取方法。苦参碱的提取方法有很多，如水浸泡、醇渗漉、酸水渗漉、酸水浸泡、水煎煮、醇回流、CO2超临界萃取法等等，其中渗漏、温浸法属于传统方法。主要使用蒸馏水、稀盐酸等提取溶剂，目前，药典中和工业上最常用的提取手段还是传统的提取方法。近几年来，新方法的不断出现，学者们思路更加开阔，使中药提取手段的研究上升到了一个前所未有的高度，如超临界CO2提取法是近几年来比较新颖的技术，该技术具备萃取能力高、提取充分、无高温危险、且时间效益较高，学习过程不复杂。
1.1 山豆根中的化学成分
1.1.1 生物碱
潘其明曾提取山豆根的有效部位，采用多类分离技术对化学成分展开了研究，得出了有各类型的生物碱，如：槐果碱、苦参碱、金雀花碱等等，共计27种[2]。
1.1.2 多糖类00
吴学昊曾采取MAE技术，选用的溶剂为强极性，充分利用了其技术特点，将有效成分分离开来。结论表示：山豆根多糖类的组成有：甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸等等[3]。崔瑛在他的研究中指出：山豆根的多糖分别包括淀粉类、Hemicellulose、果胶，并且其中淀粉所占比例最高[4]。
1.1.3 黄酮类
谭桂山等人通过提取、分离、整理数据之后发现山豆根黄酮类种类繁多，其中含量较多，较典型的有二氢黄酮、查耳酮类化合物、榭皮素、rutin、Maackiain等[5]。
1.1.4 其他成分
香豆素、人体所需的各种微量元素、游离的氨基酸[6]。
1.2山豆根的药理及毒理作用
在查找近年来各类山豆根的实验、文献资料后发现，山豆根具有抑制癌细胞的生长、抵御有害微生物、缓解疼痛、治疗肝性疾病和提高免疫力等多种药理作用。
1.2.1 抗肿瘤的作用
如今，各类肿瘤的发病率在全世界都在持续攀升，中国尤其明显。因此，抗肿瘤药物的研究是医药界的一个热门项目。张良等人在研究山豆根时，以大鼠为实验对象，发现曾山豆根能有效抵御特定类型的癌细胞的增殖，比如恶性黑色素瘤等[7]。徐朝晖等人还将山豆根作用于肝癌细胞，发现恶性细胞的活性在山豆根干扰之下大大减小，证明了山豆根确实对肿瘤有效[8]。
1.2.2抑菌、抗病毒作用
在面对感冒、发烧及流感等病时，一般人们在生活中首选的治疗药均西药，而西药在抗这方面的耐药性已经逐渐被人们重视，因此中成药将会是代替西药一个优先选择。丁凤荣等人采用药物敏感试验，发现山豆根对Ecoli、Streptococus、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等都有有效控制的效果[9]。胡庭俊等人发现山豆根的通过不同溶剂提取时，其抑菌效果也大大不同，也就是最小抑菌浓度均不同，并且还指出乙醇提取物较其它溶剂对嗜肉菌抑制效果更好[10]。此外在抗病毒的研究中，也有学者发现山豆根总碱对咽喉部常见的各类病毒均有抑制作用，比如：柯萨奇B型病毒 (CB) 、Elisa腺病毒 (ADV) 等等[11]。于启福等人还发现了山豆根中的有效成分能导致各类病毒中DNA的合成失败，阻止了病毒在体内的增殖[12]。
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