核桃分心木不同提取物对肾阳虚模型小鼠的实验研究
摘 要随着社会生活压力的升高,人们大多在快速的生活节奏中忙碌，忽略了身体健康的状况，超负荷的压力使近年来患肾阳虚的青年快速变多，这一社会性的问题越来越发的严重。肾阳虚的发病机制是由肾脏阳气不足所致，温养功能衰弱所导致，在临床上是以腰酸膝无力、身体畏寒四肢末梢发冷、精神涣散、苔厚舌白、脉速细弱低沉无力为主要表现。分心木又称胡桃隔膜，是核桃仁的干木膜重量轻。质材脆，容易折断。分心木味道苦、涩，药用可滋润脾脏、肾脏的经络、具有养肾固精的效果。分心木是核桃食用完的废产物，资源的利用空间很大，它主要用作燃料或废物，这不仅是一种巨大的资源浪费而且对环境造成污染。改善分心木的现状为研究提供依据，将我国大量的分心木合理的用于更正确的途径中并为农业发展奠定基础。本论文探讨核桃分心木水提取部位、95％乙醇提取部位以及正丁醇提取部位对肾阳虚模型小鼠的影响，主要通过观察肾阳虚小鼠模型质量增长率、各相关脏器系数等指标变化来明确分心木对于肾阳虚有治疗的药理作用；实验表明肾阳虚组模型小鼠增长率下降，对照治疗组则表明了分心木对肾阳虚小鼠有促进作用（小鼠增长率升高）；模型小鼠的内分泌脏器在水提取部位、95％乙醇提取部位以及正丁醇提取部的作用下证明了也有促进治疗作用；为进一步研究分心木对肾阳虚治疗有效成分提供参考。
目 录
1绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2分心木的传统研究 2
1.3分心木的现代研究 2
1.3.1化学成分 2
1.3.2 质量研究 2
1.3.3的药理作用及临床应用 2
1.3.4 提取及分离纯化工艺研究 3
1.4肾阳虚证的研究方法 3
1.4.1 肾阳虚证本质神经生物学研究 3
1.4.2 肾阳虚证本质亚细胞学研究 4
1.4.3 肾阳虚证细胞分子免疫学研究 4
1.5 肾阳虚动物模型研究 4
1.5.1 恐吓肾致肾阳虚动物模型 4
1.5.2 老龄大鼠肾阳虚模型 4
1.5.3 先天性肾阳虚动物模型 4
1.5.4病理性激素建模 5
2 实验部分研究 6
2.1 实验药品及仪器 6
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
2.1.1 材料 6
2.2 实验方法 7
2.2.1 药材的提取 7
2.2.2肾阳虚小鼠造模方法 7
2.2.3模型动物干预方法 7
2.2.4 实验记录及脏器处理 7
3 结果 8
3.1 对肾阳虚小鼠模型的影响 8
3.2 对小鼠体质量增长率的影响 8
3.3 对小鼠相关脏器系数的影响 9
4 结论 11
参考文献 15
致谢 16
1 绪论
1.1 研究背景
随着社会生活压力的升高,人们大多在快速的生活节奏中忙碌,忽略了身体健康的状况,超负荷的压力使近年来患肾阳虚的青年快速变多,这个社会问题越来越严重。肾阳虚证的特点是尿少、心悸、肢体肿胀、气短、呼吸困难、痰咳、舌淡白、脉弱等症状[1]。随着社会的进步，科技带来的改变对医药行业的影响深远，现在的医学已经对肾阳虚证的研究进入分析细胞学的层次，在以后将会有更大的发展进步，未来医学技术会带动医药产业的更高层次的深入。
核桃是世界重要的产油植物和果树，也是我国农业重要的利益树种之一,核桃在中国大多数的地方生长，它具有巨大的潜力。到目前为止，人们已经种植了大量的核桃,核桃副产品的综合开发利用越来越严重，但在研究和开发中仍存在许多不足。随着现代萃取技术的不断进步，分心木具有营养成分不单单是一种药材，而且具有食品价值，在以后对分心木的研究将更加全面和深入，可以拓展工业部门,提高经济效益。国内外专家对分心木的抗肿瘤活性进行了研究,对小鼠结肠肿瘤细胞有一定的抑制作用[3]。然而分心木抗肿瘤活性的研究相对较少，分心木提取物[4]对抗肿瘤活性测定中,结果表明分心木的提取物有抑制肿瘤的作用。临床上,分心木对肾虚、早泄和遗尿症有显著的治疗作用。可单独煎煮,并可与其他处方配伍使用。食品相关发展中存在的问题亟待解决。在加工过程中,在茶叶加工过程中,杂散分心木的成分不能有效地渗透到茶叶中,而且味道比较涩,汤的颜色比较多云,而且存在一定量的杂质。因此,为了有效地促进溢木溢出,改善不良味道,仍然是食品加工厂必须克服的问题。刘珊珊[5]研究了分散木茶的各种环节,探讨了木粉的制作工艺。通过对分心木系统影响因素的分析,优化了工艺流程,获得了最佳工艺参数。在相关软件的帮助下,对实验的可行性进行了分析。在此基础上开发出的分心木袋泡茶产品,能保持溶解分心木的成分,口感好,为茶叶袋的工业化生产提供了良好的理论依据。
1.2分心木的传统研究
分心木是核桃的横膈膜,已被古籍收录。《现代实用中药》、《中草药编纂》、《山西中医》等记载了“利尿,治疗淋病,血尿,腹泻,呃逆”等功效。除补肾、涩、精、脾外,还可治疗失眠、牙龈出血、口腔溃疡等。自古以来,分心木用于染发、印染布、酿造茶等传统[6]。
1.3分心木的现代研究
1.3.1化学成分
分心木是我国一味比较常见的中药材,在现代科学技术的基础上,从分心木中分离得到黄酮类化合物、酚酸类化合物等,并测定了黄酮类化合物含量。从近几年才刚刚开始对分心木所含有化学成分研究。分心木中含有很多种的化合物，毕肯阿不得克里木等[7]利用传统方法进行了实验。王艳梅[8]采用水蒸气蒸馏法提取,并用气相色谱质谱法进行分析。分心木的乙醇提取物的化学成分被杨明珠等[9]进行了分析。
1.3.2 质量研究
在各种设备仪器的配合下去研究分心木的质量来测定化学成分。例如,王艳等方法采用苯酚?硫酸法测定分心木中糖的含量是5.4%[11]。韩燕春等测定分心木的化学成分含量是利用显色法和紫外分光度法，结果表明,总皂苷含量为4.187%[12]，乙醇提取的总生物碱是410nm。结果表明,总生物碱含量为3.81%[13]。傅文欢等[14]测定化学成分利用干酪素的方法，结果表明化学成分的不同是因为不同的批次所造成。用李成丞等方法研究了分心木中黄酮的提取工艺，最佳工艺是用50%乙醇提取溶剂，适当的提取温度从中提取的黄酮含量为[15]。用酪蛋白法测定酪蛋白中总鞣质应该采用反相高效液相色谱法测定了分心木中水解单宁的水解产物没食子酸的含量[16]。
1.3.3的药理作用及临床应用
分心木具有治疗滑精、遗尿、遗精、淋病尿血、暑热泻痢等症。由于分心木中存在多种化合物,酚类化合物具有较强的抗菌作用。分心木的水提醇提物、95%乙醇提物和正丁醇提水提取物对常见菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。结果表明分心木具有抗菌的药理作用，乙醇提取液和正丁醇提取液的抑菌作用还是比较强,,抑菌活性随着提取物浓度的增加而逐渐增加,表明分心木的有效成以醇溶性物质为主[17]。分心木可水煮,并可与其他处方配伍使用。阎军[18]用心碎木水敷补补中益气丸治疗前列腺切除术后排尿频率,有效率为91%。
1.3.4 提取及分离纯化工艺研究
在分心木提取分离的研究中,有更多的中国文学提供研究基础。王国俊等以木犀草素为对照品,采用分光光度法测定核桃隔提取物中黄酮类化合物的含量,采用60%乙醇回流法和超声波法提取3种提取物中黄酮类化合物的含量。新疆与大理核桃隔提取物中黄酮班级内容有差异,分别为42.21%和40.57%[20]。以黄酮类化合物为原料,形成稳定的荧光配合物,荧光法测定核桃中隔总黄酮含量为60.85%。张树兰[21]使用高性能液体相色谱法测得了新疆分心木中黄酮苷及木犀草苷含量分别为8.56、3.02mg/g;核桃中的隔总皂苷是使用水饱和正丁醇提取法进行提取。核桃中隔总皂苷含量为4.19%是使用紫外分光光度法进行测定。王艳等[23]分心木多糖的含量测定方法,用苯酚?硫酸法在最好条件下测得的核桃隔多糖含量为5.40%。分心木中黄酮苷为7.62,2.95?mg/g[22]及木犀草苷含量为7.62,2.95?mg/g[22]。王国军等[24]对12种不同类型大孔树脂进行实验, 研究去分心木总黄酮的方法，通过取得分心木总黄酮具有较好的吸附和洗脱效果对于AB8大孔树脂。朱青美等[25]测定核桃中的隔总皂苷含量。它最好分离纯化条件为pH4.7,树脂的上样量为8mL/g,体积流量为2.5BV/h,最后,用水洗涤至3BV,用无水乙醇洗脱BV60%。总黄酮含量AB8经过树脂处理后达到73.25%,取得率为93.94%。利用试验检测了乙醇体积、分数、时间、和提取的次数，表明分心木总皂苷提取率的影响很大,并且采用大孔吸附树脂来对其检验。对核桃隔总皂苷的纯化工艺进行了研究。最佳纯化工艺为:采用D101大孔吸附树脂,最大样品量为180 mL,洗脱量为8BV,洗脱液为50%乙醇,洗脱体积为7 BV。通过单因素试验和正交试验,确定了核桃中隔总生物碱的最佳提取工艺条件为:提取时间为2h,料液比为1:20[26]。
目 录
1绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2分心木的传统研究 2
1.3分心木的现代研究 2
1.3.1化学成分 2
1.3.2 质量研究 2
1.3.3的药理作用及临床应用 2
1.3.4 提取及分离纯化工艺研究 3
1.4肾阳虚证的研究方法 3
1.4.1 肾阳虚证本质神经生物学研究 3
1.4.2 肾阳虚证本质亚细胞学研究 4
1.4.3 肾阳虚证细胞分子免疫学研究 4
1.5 肾阳虚动物模型研究 4
1.5.1 恐吓肾致肾阳虚动物模型 4
1.5.2 老龄大鼠肾阳虚模型 4
1.5.3 先天性肾阳虚动物模型 4
1.5.4病理性激素建模 5
2 实验部分研究 6
2.1 实验药品及仪器 6
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
2.1.1 材料 6
2.2 实验方法 7
2.2.1 药材的提取 7
2.2.2肾阳虚小鼠造模方法 7
2.2.3模型动物干预方法 7
2.2.4 实验记录及脏器处理 7
3 结果 8
3.1 对肾阳虚小鼠模型的影响 8
3.2 对小鼠体质量增长率的影响 8
3.3 对小鼠相关脏器系数的影响 9
4 结论 11
参考文献 15
致谢 16
1 绪论
1.1 研究背景
随着社会生活压力的升高,人们大多在快速的生活节奏中忙碌,忽略了身体健康的状况,超负荷的压力使近年来患肾阳虚的青年快速变多,这个社会问题越来越严重。肾阳虚证的特点是尿少、心悸、肢体肿胀、气短、呼吸困难、痰咳、舌淡白、脉弱等症状[1]。随着社会的进步，科技带来的改变对医药行业的影响深远，现在的医学已经对肾阳虚证的研究进入分析细胞学的层次，在以后将会有更大的发展进步，未来医学技术会带动医药产业的更高层次的深入。
核桃是世界重要的产油植物和果树，也是我国农业重要的利益树种之一,核桃在中国大多数的地方生长，它具有巨大的潜力。到目前为止，人们已经种植了大量的核桃,核桃副产品的综合开发利用越来越严重，但在研究和开发中仍存在许多不足。随着现代萃取技术的不断进步，分心木具有营养成分不单单是一种药材，而且具有食品价值，在以后对分心木的研究将更加全面和深入，可以拓展工业部门,提高经济效益。国内外专家对分心木的抗肿瘤活性进行了研究,对小鼠结肠肿瘤细胞有一定的抑制作用[3]。然而分心木抗肿瘤活性的研究相对较少，分心木提取物[4]对抗肿瘤活性测定中,结果表明分心木的提取物有抑制肿瘤的作用。临床上,分心木对肾虚、早泄和遗尿症有显著的治疗作用。可单独煎煮,并可与其他处方配伍使用。食品相关发展中存在的问题亟待解决。在加工过程中,在茶叶加工过程中,杂散分心木的成分不能有效地渗透到茶叶中,而且味道比较涩,汤的颜色比较多云,而且存在一定量的杂质。因此,为了有效地促进溢木溢出,改善不良味道,仍然是食品加工厂必须克服的问题。刘珊珊[5]研究了分散木茶的各种环节,探讨了木粉的制作工艺。通过对分心木系统影响因素的分析,优化了工艺流程,获得了最佳工艺参数。在相关软件的帮助下,对实验的可行性进行了分析。在此基础上开发出的分心木袋泡茶产品,能保持溶解分心木的成分,口感好,为茶叶袋的工业化生产提供了良好的理论依据。
1.2分心木的传统研究
分心木是核桃的横膈膜,已被古籍收录。《现代实用中药》、《中草药编纂》、《山西中医》等记载了“利尿,治疗淋病,血尿,腹泻,呃逆”等功效。除补肾、涩、精、脾外,还可治疗失眠、牙龈出血、口腔溃疡等。自古以来,分心木用于染发、印染布、酿造茶等传统[6]。
1.3分心木的现代研究
1.3.1化学成分
分心木是我国一味比较常见的中药材,在现代科学技术的基础上,从分心木中分离得到黄酮类化合物、酚酸类化合物等,并测定了黄酮类化合物含量。从近几年才刚刚开始对分心木所含有化学成分研究。分心木中含有很多种的化合物，毕肯阿不得克里木等[7]利用传统方法进行了实验。王艳梅[8]采用水蒸气蒸馏法提取,并用气相色谱质谱法进行分析。分心木的乙醇提取物的化学成分被杨明珠等[9]进行了分析。
1.3.2 质量研究
在各种设备仪器的配合下去研究分心木的质量来测定化学成分。例如,王艳等方法采用苯酚?硫酸法测定分心木中糖的含量是5.4%[11]。韩燕春等测定分心木的化学成分含量是利用显色法和紫外分光度法，结果表明,总皂苷含量为4.187%[12]，乙醇提取的总生物碱是410nm。结果表明,总生物碱含量为3.81%[13]。傅文欢等[14]测定化学成分利用干酪素的方法，结果表明化学成分的不同是因为不同的批次所造成。用李成丞等方法研究了分心木中黄酮的提取工艺，最佳工艺是用50%乙醇提取溶剂，适当的提取温度从中提取的黄酮含量为[15]。用酪蛋白法测定酪蛋白中总鞣质应该采用反相高效液相色谱法测定了分心木中水解单宁的水解产物没食子酸的含量[16]。
1.3.3的药理作用及临床应用
分心木具有治疗滑精、遗尿、遗精、淋病尿血、暑热泻痢等症。由于分心木中存在多种化合物,酚类化合物具有较强的抗菌作用。分心木的水提醇提物、95%乙醇提物和正丁醇提水提取物对常见菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。结果表明分心木具有抗菌的药理作用，乙醇提取液和正丁醇提取液的抑菌作用还是比较强,,抑菌活性随着提取物浓度的增加而逐渐增加,表明分心木的有效成以醇溶性物质为主[17]。分心木可水煮,并可与其他处方配伍使用。阎军[18]用心碎木水敷补补中益气丸治疗前列腺切除术后排尿频率,有效率为91%。
1.3.4 提取及分离纯化工艺研究
在分心木提取分离的研究中,有更多的中国文学提供研究基础。王国俊等以木犀草素为对照品,采用分光光度法测定核桃隔提取物中黄酮类化合物的含量,采用60%乙醇回流法和超声波法提取3种提取物中黄酮类化合物的含量。新疆与大理核桃隔提取物中黄酮班级内容有差异,分别为42.21%和40.57%[20]。以黄酮类化合物为原料,形成稳定的荧光配合物,荧光法测定核桃中隔总黄酮含量为60.85%。张树兰[21]使用高性能液体相色谱法测得了新疆分心木中黄酮苷及木犀草苷含量分别为8.56、3.02mg/g;核桃中的隔总皂苷是使用水饱和正丁醇提取法进行提取。核桃中隔总皂苷含量为4.19%是使用紫外分光光度法进行测定。王艳等[23]分心木多糖的含量测定方法,用苯酚?硫酸法在最好条件下测得的核桃隔多糖含量为5.40%。分心木中黄酮苷为7.62,2.95?mg/g[22]及木犀草苷含量为7.62,2.95?mg/g[22]。王国军等[24]对12种不同类型大孔树脂进行实验, 研究去分心木总黄酮的方法，通过取得分心木总黄酮具有较好的吸附和洗脱效果对于AB8大孔树脂。朱青美等[25]测定核桃中的隔总皂苷含量。它最好分离纯化条件为pH4.7,树脂的上样量为8mL/g,体积流量为2.5BV/h,最后,用水洗涤至3BV,用无水乙醇洗脱BV60%。总黄酮含量AB8经过树脂处理后达到73.25%,取得率为93.94%。利用试验检测了乙醇体积、分数、时间、和提取的次数，表明分心木总皂苷提取率的影响很大,并且采用大孔吸附树脂来对其检验。对核桃隔总皂苷的纯化工艺进行了研究。最佳纯化工艺为:采用D101大孔吸附树脂,最大样品量为180 mL,洗脱量为8BV,洗脱液为50%乙醇,洗脱体积为7 BV。通过单因素试验和正交试验,确定了核桃中隔总生物碱的最佳提取工艺条件为:提取时间为2h,料液比为1:20[26]。
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