外源物质处理下茶树叶片显微结构观察
摘要：叶片，是茶树进行光合作用、蒸腾作用和气体交换的主要器官，同时也是人类采摘的主要部位，其叶片的显微结构不仅是茶树一系列生理活动的基础，同时，与茶树品种的产量、品质、抗逆性等都有着密切的关系。因此，研究茶树叶片显微结构，对深入了解茶叶细胞的结构及其组成具有重要的意义；研究茶树外源物质处理下叶片的显微结构，有助于了解茶树对外源物质的响应。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 2
1材料与方法 3
1.1试验材料、试剂与仪器 3
1.1.1试验材料 3
1.1.2试验设计 3
1.1.3试剂与器材 3
1.2试验方法 3
2 结果与分析 4
2.1 镉胁迫对茶树叶片解剖结构的影响 4
2.2 外源脱落酸对茶树叶片解剖结构的影响 5
2.3 外源过氧化氢对茶树叶片解剖结构的影响 6
3 结论 7
致谢 8
参考文献 8
外源物质处理下茶树叶片显微结构观察
引言
引言 茶树[Camellia Sinensis (L.) O. Kuntze]属山茶科山茶属多年生常绿木本植物，原产于热带及亚热带，是一种喜暖喜湿的叶用植物，其嫩叶经过加工后的茶饮品是世界上三大无酒精饮料之一。随着人类活动产生的污染和排放物的增加，外源物质常常伴随着植物的生长发育（Xiong et al.2002）。ABA、H2O2、镉等能对植物，特别是农作物的生长、发育和结实造成严重的影响。近年来，已严重影响了茶树的生长和产量。
近年来，随着植物抗寒分子机理研究的深入，已证实外源物质 (如Ca2+、ABA、H2O2、多胺、BR、Pro等)能提高植物的抗寒力（康国章 等，2002）。因此，在实际生产过程中通过施加外源物质作为茶树的抗冷剂，以解决生产中的低温冷害问题，对于降低低温对春茶产量和质量的影响具有重要意义。脱落酸(ABA)是调控植物生长发育的一种激素，在植物发育的诸多重要过程中起重要的调节作用。同时，又在植物对逆境胁迫(干旱、低温等)的反应中起
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
着共同调节因子的作用（汤学军 & 傅家瑞, 1997）。过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)是活性氧(ROS)重要的代表之一，激素等信号以及生物、非生物胁迫刺激均可诱导植物细胞内H2O2的产生和积累。越来越多的证据表明，H2O2在植物面临环境胁迫反应中发挥着重要的作用，比如应对逆境产生抗病防御反应、调控植物的生长发育、参与保卫细胞气孔运动等诸多生理过程。
叶片，是茶树进行光合作用、蒸腾作用和气体交换的主要器官，同时也是人类采摘的主要部位，其叶片的显微结构不仅是茶树一系列生理活动的基础，同时，与茶树品种的产量、品质、抗逆性等都有着密切的关系。因此，研究茶树叶片显微结构，对深入了解茶叶细胞的结构及其组成具有重要的意义；研究茶树外源物质处理下叶片的显微结构，对后期利用H2O2和ABA提高植物抗逆性有很好的指导意义。
1材料与方法
1.1试验材料、试剂与仪器
1.1.1试验材料
取一年生‘迎霜’茶苗培养于容积为20 L并装有15 L pH 5.5营养液（配方由南京土壤所提供）的聚乙烯盆中，盆上用带孔硬质泡沫板和海绵固定植株，每盆20蔸，每蔸1株。每天充分供氧，每7 d更换1次营养液。
1.1.2试验设计
试验设以下处理：
（1）镉胁迫：用 CdCl2配制0.5 mmol/L 浓度的营养液；（2）过氧化氢：100 mmol/L喷施茶树叶面；（3）脱落酸（ABA）处理：用50 mg/L的ABA喷施茶树叶面。
以上3组处理，分别在0h、4h、12h、24h、2d、4d、6d、8d、10 d时取样，采样部位为2~3位叶。采用完全随机试验设计，重复3~5次。
1.1.3试剂与器材
仪器：石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
试剂：FAA固定液(70%酒精90 mL、冰醋酸5 mL、福尔马林5 mL)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
1.2试验方法
（1）固定：FAA固定液固定48小时以上。
（2）脱水：50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2 h。100%酒精中1.5 h。其中70%酒精处可长期保存。
（3）透明：1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2 h) →纯二甲苯(1.5 h) →纯二甲苯(1.5 h)
（4）浸蜡：将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。
（5）包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次12 h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于4560℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。
（6）切片：对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
（7）粘片：将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。
（8）脱蜡：脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(30 min)→纯二甲苯(30 min)
（9）染色：将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→蒸馏水（清洗）→1%番红染色(8h以上) →蒸馏水（清洗两遍）→30％酒精→50％酒精→70％酒精→85％酒精→0.5%固绿(4min30s)→95％酒精（清洗）→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min40s)
（10）胶封：滴加加拿大树胶封藏。
（11）镜检，拍照。
2 结果与分析
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 2
1材料与方法 3
1.1试验材料、试剂与仪器 3
1.1.1试验材料 3
1.1.2试验设计 3
1.1.3试剂与器材 3
1.2试验方法 3
2 结果与分析 4
2.1 镉胁迫对茶树叶片解剖结构的影响 4
2.2 外源脱落酸对茶树叶片解剖结构的影响 5
2.3 外源过氧化氢对茶树叶片解剖结构的影响 6
3 结论 7
致谢 8
参考文献 8
外源物质处理下茶树叶片显微结构观察
引言
引言 茶树[Camellia Sinensis (L.) O. Kuntze]属山茶科山茶属多年生常绿木本植物，原产于热带及亚热带，是一种喜暖喜湿的叶用植物，其嫩叶经过加工后的茶饮品是世界上三大无酒精饮料之一。随着人类活动产生的污染和排放物的增加，外源物质常常伴随着植物的生长发育（Xiong et al.2002）。ABA、H2O2、镉等能对植物，特别是农作物的生长、发育和结实造成严重的影响。近年来，已严重影响了茶树的生长和产量。
近年来，随着植物抗寒分子机理研究的深入，已证实外源物质 (如Ca2+、ABA、H2O2、多胺、BR、Pro等)能提高植物的抗寒力（康国章 等，2002）。因此，在实际生产过程中通过施加外源物质作为茶树的抗冷剂，以解决生产中的低温冷害问题，对于降低低温对春茶产量和质量的影响具有重要意义。脱落酸(ABA)是调控植物生长发育的一种激素，在植物发育的诸多重要过程中起重要的调节作用。同时，又在植物对逆境胁迫(干旱、低温等)的反应中起
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
着共同调节因子的作用（汤学军 & 傅家瑞, 1997）。过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)是活性氧(ROS)重要的代表之一，激素等信号以及生物、非生物胁迫刺激均可诱导植物细胞内H2O2的产生和积累。越来越多的证据表明，H2O2在植物面临环境胁迫反应中发挥着重要的作用，比如应对逆境产生抗病防御反应、调控植物的生长发育、参与保卫细胞气孔运动等诸多生理过程。
叶片，是茶树进行光合作用、蒸腾作用和气体交换的主要器官，同时也是人类采摘的主要部位，其叶片的显微结构不仅是茶树一系列生理活动的基础，同时，与茶树品种的产量、品质、抗逆性等都有着密切的关系。因此，研究茶树叶片显微结构，对深入了解茶叶细胞的结构及其组成具有重要的意义；研究茶树外源物质处理下叶片的显微结构，对后期利用H2O2和ABA提高植物抗逆性有很好的指导意义。
1材料与方法
1.1试验材料、试剂与仪器
1.1.1试验材料
取一年生‘迎霜’茶苗培养于容积为20 L并装有15 L pH 5.5营养液（配方由南京土壤所提供）的聚乙烯盆中，盆上用带孔硬质泡沫板和海绵固定植株，每盆20蔸，每蔸1株。每天充分供氧，每7 d更换1次营养液。
1.1.2试验设计
试验设以下处理：
（1）镉胁迫：用 CdCl2配制0.5 mmol/L 浓度的营养液；（2）过氧化氢：100 mmol/L喷施茶树叶面；（3）脱落酸（ABA）处理：用50 mg/L的ABA喷施茶树叶面。
以上3组处理，分别在0h、4h、12h、24h、2d、4d、6d、8d、10 d时取样，采样部位为2~3位叶。采用完全随机试验设计，重复3~5次。
1.1.3试剂与器材
仪器：石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
试剂：FAA固定液(70%酒精90 mL、冰醋酸5 mL、福尔马林5 mL)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
1.2试验方法
（1）固定：FAA固定液固定48小时以上。
（2）脱水：50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2 h。100%酒精中1.5 h。其中70%酒精处可长期保存。
（3）透明：1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2 h) →纯二甲苯(1.5 h) →纯二甲苯(1.5 h)
（4）浸蜡：将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。
（5）包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次12 h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于4560℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。
（6）切片：对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
（7）粘片：将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。
（8）脱蜡：脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(30 min)→纯二甲苯(30 min)
（9）染色：将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精→蒸馏水（清洗）→1%番红染色(8h以上) →蒸馏水（清洗两遍）→30％酒精→50％酒精→70％酒精→85％酒精→0.5%固绿(4min30s)→95％酒精（清洗）→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min40s)
（10）胶封：滴加加拿大树胶封藏。
（11）镜检，拍照。
2 结果与分析
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