蝴蝶兰无菌苗快速生长条件研究
摘要：本试验以蝴蝶兰无菌苗为材料，研究了基本培养基、有机附加物（椰子汁）、琼脂的含量及接种密度对蝴蝶兰生长的影响，通过蝴蝶兰鲜重变化来反应培养条件对其生长的影响，以探讨适宜的蝴蝶兰快速生长条件。结果表明：MS、1/2MS、花宝一号和减半的花宝一号4种基本培养基中，以1/2MS促进无菌苗生长作用最佳；添加椰子汁会促进无菌苗的生长；5.0 g/L的琼脂浓度，无菌苗鲜重增加量最高；接种密度试验表明无菌苗生长量与其密度呈负相关。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 试验材料 2
1.2 试验方法 2
1.2.1 培养基的配制2
1.2.2接种培养2
2 结果和分析2
2.1 矿质营养对无菌苗生长的影响2
2.2 椰子汁浓度对无菌苗生长的影响3
2.3 琼脂浓度对无菌苗生长的影响4
2.4 无菌苗浓度对其生长的影响4
3 讨论5
致谢5
参考文献5
图1接种前后的无菌苗生长状态对照2
图2不同培养基中无菌苗生长状况2
表1基本培养基对蝴蝶兰无菌苗生长的影响3
表2椰子汁浓度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响4
表3琼脂浓度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响4
表4无菌苗接种密度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响5
蝴蝶兰无菌苗快速生长条件研究
引言
蝴蝶兰( Phalaenopsis hybrid) 又称蝶兰，为兰科蝴蝶兰属花卉，其花形酷似蝴蝶，花色丰富艳丽，花期持久，在国内外花卉市场深受欢迎，被誉为 “兰花皇后”[12]，是兰科植物中栽培最广泛、 最普及的种类之一，具有较高的观赏价值和经济价值。近年来蝴蝶兰的国内外市场需求持续上升，但由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，极少发育侧芽，很难进行分株繁殖，常规情况下种子发育不完全极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢。因此，蝴蝶兰种苗繁殖主要通过组织培养的方式进行，从1949年Potor利用无菌培养技术成功地诱导蝴蝶
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
兰花梗休眠芽发育成完整植株以来[3],经过多年研究改良,到1974年Intuwong等利用蝴蝶兰茎尖作为外植体诱导类原球茎、再生植株,为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础[4]。而由于部分蝴蝶兰品种无菌苗存在生长势弱、移栽成活率低及生长缓慢等问题，因此需要通过改进组培技术、加快幼苗生长及提高光合自养能力将是完善蝴蝶兰组培技术、提高种苗质量和缩短生产周期的一种有效途径。本研究以优良品种蝴蝶兰兰无菌苗为材料，研究了蝴蝶兰无菌苗快速生长条件，为加速无菌苗生长，缩短蝴蝶兰生产周期提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料来自大学园艺学院观赏生物技术实验室保存的蝴蝶兰杂交后代株系的无菌苗，以其单株作为试验材料。
1.2 方法
1.2.1 培养基的配制
以MS为基本培养基，附加蔗糖30 g/L，6BA 0.5mg/L，并根据试验需要设计了不同矿质营养、有机附加物和琼脂的组合和配比。pH 5.8，于121℃下高压灭菌20min，放置备用。
1.2.2 接种培养
在无菌条件下，用镊子和解剖刀从蝴蝶兰中选取大小致的无菌苗用于培养。将选好的无菌苗接种于不同处理培养基上，培养28d后测量其鲜重。
2 结果和分析
2.1 矿质营养对无菌苗生长的影响
图2 不同培养基中无菌苗生长状况
Fig 2 Growth status of sterile seedlings in different media
以1/2MS、MS、花宝1号（Hyponex No. 1，1.0 g/L）、1/2花宝1号为比照实验，分别添加蔗糖30 g/L，6BA 0.5mg/L，椰子汁100ml/L，琼脂6g/L配置各5瓶50ml/瓶的培养瓶，每瓶接种6个大小质量相近的植物。实验测得数据如表1，可看出无菌苗生长量在1/2MS和1/2花宝1号培养基中的变化量大，并且分别比MS与花宝1号培养基的变化量有显著差异。 蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，但对最适培养基的选择却不同，主要在于蝴蝶兰品种差异及外植体来源不同所致。周俊辉等[5]以红花品种为试材，研究比较了MS、1/2MS和改良KC三种基本培养基，发现改良KC的效果最好，1/2MS次之，MS最差；张秀清等[6]、马子骏等[7]的研究结果也显示出蝴蝶兰的原球茎增殖培养以较低的无机盐浓度为好。鲁雪华等[8]在花梗节间切段诱导原球茎的实验过程中对培养基进行筛选，也发现1/2MS或改良MS较MS效果好，减少MS中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量的叶酸和生物素有利于原球茎的增殖生长。
表1 不同基本培养基对蝴蝶兰无菌苗生长的影响
Table 1 Effects of basal medium on the growth of Phalaenopsis hybrid
基本培养基
鲜重 Fresh weight (g)
1
2
3
4
5
平均值
MS
0.27
0.19
0.23
0.22
0.29
0.24a
1/2MS
0.27
0.23
0.35
0.29
0.25
0.28b
Hyponex No. 1
(1g/L)
0.16
0.12
0.17
0.14
0.18
0.15c
1/2 Hyponex No. 1
(0.5g/L)
0.30
0.29
0.26
0.23
0.30
0.28db
注：不同的小写字母表示差异在0.05水平显著。
Note: Different small letter within columns indicate significant difference by Duncan’s multiple range test at 5% level.
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法1
1.1 试验材料 2
1.2 试验方法 2
1.2.1 培养基的配制2
1.2.2接种培养2
2 结果和分析2
2.1 矿质营养对无菌苗生长的影响2
2.2 椰子汁浓度对无菌苗生长的影响3
2.3 琼脂浓度对无菌苗生长的影响4
2.4 无菌苗浓度对其生长的影响4
3 讨论5
致谢5
参考文献5
图1接种前后的无菌苗生长状态对照2
图2不同培养基中无菌苗生长状况2
表1基本培养基对蝴蝶兰无菌苗生长的影响3
表2椰子汁浓度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响4
表3琼脂浓度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响4
表4无菌苗接种密度对蝴蝶兰无菌苗生长的影响5
蝴蝶兰无菌苗快速生长条件研究
引言
蝴蝶兰( Phalaenopsis hybrid) 又称蝶兰，为兰科蝴蝶兰属花卉，其花形酷似蝴蝶，花色丰富艳丽，花期持久，在国内外花卉市场深受欢迎，被誉为 “兰花皇后”[12]，是兰科植物中栽培最广泛、 最普及的种类之一，具有较高的观赏价值和经济价值。近年来蝴蝶兰的国内外市场需求持续上升，但由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，极少发育侧芽，很难进行分株繁殖，常规情况下种子发育不完全极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢。因此，蝴蝶兰种苗繁殖主要通过组织培养的方式进行，从1949年Potor利用无菌培养技术成功地诱导蝴蝶
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兰花梗休眠芽发育成完整植株以来[3],经过多年研究改良,到1974年Intuwong等利用蝴蝶兰茎尖作为外植体诱导类原球茎、再生植株,为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础[4]。而由于部分蝴蝶兰品种无菌苗存在生长势弱、移栽成活率低及生长缓慢等问题，因此需要通过改进组培技术、加快幼苗生长及提高光合自养能力将是完善蝴蝶兰组培技术、提高种苗质量和缩短生产周期的一种有效途径。本研究以优良品种蝴蝶兰兰无菌苗为材料，研究了蝴蝶兰无菌苗快速生长条件，为加速无菌苗生长，缩短蝴蝶兰生产周期提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料来自大学园艺学院观赏生物技术实验室保存的蝴蝶兰杂交后代株系的无菌苗，以其单株作为试验材料。
1.2 方法
1.2.1 培养基的配制
以MS为基本培养基，附加蔗糖30 g/L，6BA 0.5mg/L，并根据试验需要设计了不同矿质营养、有机附加物和琼脂的组合和配比。pH 5.8，于121℃下高压灭菌20min，放置备用。
1.2.2 接种培养
在无菌条件下，用镊子和解剖刀从蝴蝶兰中选取大小致的无菌苗用于培养。将选好的无菌苗接种于不同处理培养基上，培养28d后测量其鲜重。
2 结果和分析
2.1 矿质营养对无菌苗生长的影响
图2 不同培养基中无菌苗生长状况
Fig 2 Growth status of sterile seedlings in different media
以1/2MS、MS、花宝1号（Hyponex No. 1，1.0 g/L）、1/2花宝1号为比照实验，分别添加蔗糖30 g/L，6BA 0.5mg/L，椰子汁100ml/L，琼脂6g/L配置各5瓶50ml/瓶的培养瓶，每瓶接种6个大小质量相近的植物。实验测得数据如表1，可看出无菌苗生长量在1/2MS和1/2花宝1号培养基中的变化量大，并且分别比MS与花宝1号培养基的变化量有显著差异。 蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，但对最适培养基的选择却不同，主要在于蝴蝶兰品种差异及外植体来源不同所致。周俊辉等[5]以红花品种为试材，研究比较了MS、1/2MS和改良KC三种基本培养基，发现改良KC的效果最好，1/2MS次之，MS最差；张秀清等[6]、马子骏等[7]的研究结果也显示出蝴蝶兰的原球茎增殖培养以较低的无机盐浓度为好。鲁雪华等[8]在花梗节间切段诱导原球茎的实验过程中对培养基进行筛选，也发现1/2MS或改良MS较MS效果好，减少MS中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量的叶酸和生物素有利于原球茎的增殖生长。
表1 不同基本培养基对蝴蝶兰无菌苗生长的影响
Table 1 Effects of basal medium on the growth of Phalaenopsis hybrid
基本培养基
鲜重 Fresh weight (g)
1
2
3
4
5
平均值
MS
0.27
0.19
0.23
0.22
0.29
0.24a
1/2MS
0.27
0.23
0.35
0.29
0.25
0.28b
Hyponex No. 1
(1g/L)
0.16
0.12
0.17
0.14
0.18
0.15c
1/2 Hyponex No. 1
(0.5g/L)
0.30
0.29
0.26
0.23
0.30
0.28db
注：不同的小写字母表示差异在0.05水平显著。
Note: Different small letter within columns indicate significant difference by Duncan’s multiple range test at 5% level.
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