蝴蝶兰活性物质乙醇提取工艺的初步研究(附件)
本研究以白花型蝴蝶兰V6品种为试验材料，用乙醇浸提的方法提取蝴蝶兰的活性物质，并测定其活性物质的活性。结果表明，以蝴蝶兰花瓣为材料，在水浴温度为60℃，提取时间为1小时，料液比为4: 1时用75%浓度乙醇浸提得到的提取物活性物质含量多，以蝴蝶兰花瓣为提取材料，研磨后加入70%浓度的乙醇，料液比为4:1，放入50℃的水浴锅中加热60分钟所提取的提取液抗氧化活性最强。利用生物检测法研究了蝴蝶兰花瓣的浸提液对观赏性向日葵及波斯菊种子萌发的影响，结果表明蝴蝶兰花瓣提取液对观赏性向日葵及波斯菊的种子萌发率有较强的抑制作用，且浓度越高，抑制作用越明显。关键词 白花型蝴蝶兰，乙醇，溶剂提取法，抗氧化活性，种子萌发
目 录
1 引言 1
1.1 植物活性物质的提取方法 1
1.2 蝴蝶兰活性物质的研究 2
1.3 植物活性物质的活性研究 2
1.4 本试验研究的目的及意义 3
2 材料和方法 4
2.1 供试品种 4
2.3 试验设计 4
2.4 数据分析 6
3 结果与分析 6
3.1 不同乙醇浓度对蝴蝶兰植株活性物质提取的影响 6
3. 2 不同部位对蝴蝶兰活性物质提取的影响 7
3. 3 不同温度对蝴蝶兰活性物质提取的影响 8
3. 4 不同料液比对蝴蝶兰活性物质提取的影响 8
3. 5 不同加热时间对蝴蝶兰活性物质提取的影响 9
3. 6 影响蝴蝶兰活性物质提取量因素的正交试验 9
3.7 蝴蝶兰活性物质抗氧化活性的单因素试验 10
3.8 影响清除率因素的正交试验 13
4 讨论 16
结 论 18
致 谢 19
参 考 文 献 21
1 引言
蝴蝶兰（Phalaenopsis），兰科蝴蝶兰属多年生草本植物，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白色粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。花期时蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
舞般的花朵，深受人们的青睐，素有“洋兰王后”之称，分布在泰国、菲律宾、马来西亚、印度尼西亚，及中国台湾[1]。由于蝴蝶兰的受欢迎，蝴蝶兰每年的种植量及销售量十分庞大，我国蝴蝶兰产业也在不断壮大，但仍旧存在许多问题[2]，比如说蝴蝶兰在种植及运输过程中会损耗大量植株，这些被淘汰的植株去向成了一个问题。而且目前国内外对于蝴蝶兰的利用一直也只停留在观赏上，并没有对其进行深入的研究。
1.1 植物活性物质的提取方法
实验室最常用的活性物质的提取工艺有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法。每一种提取工艺都有它自身独特的优点和缺点，不同的提取方法所得到的活性物质的化学分子在组成、数量和结构等方面都有很大的不同，因此应当根据试验需求、实验室条件等实际情况来选择合适的提取方法[3]。实验室里常用的提取工艺是溶剂提取法，因为溶剂提取法有操作简单、损失少、易收集等特点。溶剂提取法的原理是根据植物中各种成分在溶剂中的溶解性，选用对活性成分溶解度大、对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从植物组织内溶解出来，但是提取物也会含有许多杂质，所提取的活性物质种类杂多。
刘瑞来[4]等比较了溶剂萃取法和水蒸气蒸馏萃取法提取的金钱草叶的挥发油进行比较，干叶提取率分别为 103.6 和4.89 mg/g，鲜叶提取率分别为 25.1 和 0.82 mg/g，可以看出溶剂萃取法提取出的物质明显高于水蒸气蒸馏萃取法。张正竹等[5]用同时蒸馏法提取茶叶活性物质,提取物均不到总量的30%,而且6次萃取获得的香精油的总量不成比例, 因此不适于用作定量分析时的样品制备方法。廖耀华[6]用水蒸汽蒸馏法、溶剂提取法、超临界CO2萃取法提取香根草，得油率分别为1.68%、6.91%、7.76%，三种提取物的理化性质均达标，超临界CO2萃取法的产品质量最优，溶剂提取法的次之。
综上所述，由于高温蒸馏会在一定程度上影响活性物质成分的完整性；超临界CO2萃取存在一定的成本问题。考虑到实验室的设备及操作问题，溶剂提取法需要的设备简单，易操作。
常用的有机溶剂有无水乙醇、乙酸乙酯、石油醚、正己烷等。赵志峰等人[7]采用乙醇、乙醚、丙酮和水提取花椒精油，无水乙醇、乙醚和丙酮作溶剂提取的花椒精油,其主要化学成分基本相同；赵二劳等[8] 试验中用乙醇的秦皮提取物中总酚含量比水提取的多；邝春林[9]等的研究采用水、80%乙醇、乙酸乙酯和石油醚四种不同极性的溶剂对杭白菊进行提取，研究了所得四种杭白菊粗提物的抗氧化能力，结果表明80% 乙醇提取物清除自由基的能力最强。
上述所用溶剂中，乙醇价廉、低毒、易得、易回收，故选择乙醇作为溶剂来提取蝴蝶兰中的活性物质。
在廖耀华[10]用溶剂萃取法提取活性物质的试验中，随着提取时间的增加，香根草油得率呈现先升后降的趋势。当提取时间小于 3 h 时，香根草油得率增加很快，当超过 3 h 时，香根草油得率略有下降的趋势。吴桐等[11]用溶剂萃取法提取刺五加叶活性物质的试验中，随着提取温度的升高，活性物质的提取率增加，90 ℃时提取率达到最大，当温度高于90 ℃ 时，提取率下降。该实验中分别设置了50%、75%、95%的乙醇浓度，当乙醇浓度为75%时，提取率最高。刘泽静等[12]对于鱼腥草活性物质的研究中，活性物质的含量在部位分布上呈现叶片 >地上茎>根状茎的趋势。徐艳[13]在乙醇浸提液提取红薯茎叶活性物质的研究中，料液比不断增加，提取的活性物质含量也不断增加，料液比 1∶40时，提取率最大，为0.8316%。
1.2 蝴蝶兰活性物质的研究
杨淑珍等[14]用SPMEGC/MS分析法对蝴蝶兰2个品种‘翠友美人’、‘小男孩’花瓣进行挥发性成分和含量的测定，分别鉴定出22种化合物和17种化合物，其中单萜、倍半萜类、烃类和脂类物质的种类相对较多。此外，在彭红明[15]的研究中蝴蝶兰共检测到62种化学物质，包含醇类、醛类、酯类、酮类、烷类、烯类等化合物。其中，醇类、醛类、酯类在蝴蝶兰中相对含量较大，百分比高达 95.8%。醇类物质的个数在蝴蝶兰挥发性组分的检出化合物总数中占的比例虽不大，为 33%，但其相对百分比含量高达69.36%，酯类物质检出的种类相对较多，但其百分含量并不大，为7.41%。
由此可见，虽然国内外对于蝴蝶兰所含活性成分的研究较少，但是蝴蝶兰所含的活性物质并不少，种类也多，具有较高的研究价值。
1.3 植物活性物质的活性研究
1.3.1 活性物质的抗氧化性评价
抗氧化活性评价目前常用的有两种方法，即体内试验和体外试验。体内试验有灵敏度高、准确的优点，但操作难度高、试验方法繁琐，且试验所需时间较长[16]，体外试验操作较为方便且适宜于大量试验。
目 录
1 引言 1
1.1 植物活性物质的提取方法 1
1.2 蝴蝶兰活性物质的研究 2
1.3 植物活性物质的活性研究 2
1.4 本试验研究的目的及意义 3
2 材料和方法 4
2.1 供试品种 4
2.3 试验设计 4
2.4 数据分析 6
3 结果与分析 6
3.1 不同乙醇浓度对蝴蝶兰植株活性物质提取的影响 6
3. 2 不同部位对蝴蝶兰活性物质提取的影响 7
3. 3 不同温度对蝴蝶兰活性物质提取的影响 8
3. 4 不同料液比对蝴蝶兰活性物质提取的影响 8
3. 5 不同加热时间对蝴蝶兰活性物质提取的影响 9
3. 6 影响蝴蝶兰活性物质提取量因素的正交试验 9
3.7 蝴蝶兰活性物质抗氧化活性的单因素试验 10
3.8 影响清除率因素的正交试验 13
4 讨论 16
结 论 18
致 谢 19
参 考 文 献 21
1 引言
蝴蝶兰（Phalaenopsis），兰科蝴蝶兰属多年生草本植物，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白色粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。花期时蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
舞般的花朵，深受人们的青睐，素有“洋兰王后”之称，分布在泰国、菲律宾、马来西亚、印度尼西亚，及中国台湾[1]。由于蝴蝶兰的受欢迎，蝴蝶兰每年的种植量及销售量十分庞大，我国蝴蝶兰产业也在不断壮大，但仍旧存在许多问题[2]，比如说蝴蝶兰在种植及运输过程中会损耗大量植株，这些被淘汰的植株去向成了一个问题。而且目前国内外对于蝴蝶兰的利用一直也只停留在观赏上，并没有对其进行深入的研究。
1.1 植物活性物质的提取方法
实验室最常用的活性物质的提取工艺有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法。每一种提取工艺都有它自身独特的优点和缺点，不同的提取方法所得到的活性物质的化学分子在组成、数量和结构等方面都有很大的不同，因此应当根据试验需求、实验室条件等实际情况来选择合适的提取方法[3]。实验室里常用的提取工艺是溶剂提取法，因为溶剂提取法有操作简单、损失少、易收集等特点。溶剂提取法的原理是根据植物中各种成分在溶剂中的溶解性，选用对活性成分溶解度大、对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从植物组织内溶解出来，但是提取物也会含有许多杂质，所提取的活性物质种类杂多。
刘瑞来[4]等比较了溶剂萃取法和水蒸气蒸馏萃取法提取的金钱草叶的挥发油进行比较，干叶提取率分别为 103.6 和4.89 mg/g，鲜叶提取率分别为 25.1 和 0.82 mg/g，可以看出溶剂萃取法提取出的物质明显高于水蒸气蒸馏萃取法。张正竹等[5]用同时蒸馏法提取茶叶活性物质,提取物均不到总量的30%,而且6次萃取获得的香精油的总量不成比例, 因此不适于用作定量分析时的样品制备方法。廖耀华[6]用水蒸汽蒸馏法、溶剂提取法、超临界CO2萃取法提取香根草，得油率分别为1.68%、6.91%、7.76%，三种提取物的理化性质均达标，超临界CO2萃取法的产品质量最优，溶剂提取法的次之。
综上所述，由于高温蒸馏会在一定程度上影响活性物质成分的完整性；超临界CO2萃取存在一定的成本问题。考虑到实验室的设备及操作问题，溶剂提取法需要的设备简单，易操作。
常用的有机溶剂有无水乙醇、乙酸乙酯、石油醚、正己烷等。赵志峰等人[7]采用乙醇、乙醚、丙酮和水提取花椒精油，无水乙醇、乙醚和丙酮作溶剂提取的花椒精油,其主要化学成分基本相同；赵二劳等[8] 试验中用乙醇的秦皮提取物中总酚含量比水提取的多；邝春林[9]等的研究采用水、80%乙醇、乙酸乙酯和石油醚四种不同极性的溶剂对杭白菊进行提取，研究了所得四种杭白菊粗提物的抗氧化能力，结果表明80% 乙醇提取物清除自由基的能力最强。
上述所用溶剂中，乙醇价廉、低毒、易得、易回收，故选择乙醇作为溶剂来提取蝴蝶兰中的活性物质。
在廖耀华[10]用溶剂萃取法提取活性物质的试验中，随着提取时间的增加，香根草油得率呈现先升后降的趋势。当提取时间小于 3 h 时，香根草油得率增加很快，当超过 3 h 时，香根草油得率略有下降的趋势。吴桐等[11]用溶剂萃取法提取刺五加叶活性物质的试验中，随着提取温度的升高，活性物质的提取率增加，90 ℃时提取率达到最大，当温度高于90 ℃ 时，提取率下降。该实验中分别设置了50%、75%、95%的乙醇浓度，当乙醇浓度为75%时，提取率最高。刘泽静等[12]对于鱼腥草活性物质的研究中，活性物质的含量在部位分布上呈现叶片 >地上茎>根状茎的趋势。徐艳[13]在乙醇浸提液提取红薯茎叶活性物质的研究中，料液比不断增加，提取的活性物质含量也不断增加，料液比 1∶40时，提取率最大，为0.8316%。
1.2 蝴蝶兰活性物质的研究
杨淑珍等[14]用SPMEGC/MS分析法对蝴蝶兰2个品种‘翠友美人’、‘小男孩’花瓣进行挥发性成分和含量的测定，分别鉴定出22种化合物和17种化合物，其中单萜、倍半萜类、烃类和脂类物质的种类相对较多。此外，在彭红明[15]的研究中蝴蝶兰共检测到62种化学物质，包含醇类、醛类、酯类、酮类、烷类、烯类等化合物。其中，醇类、醛类、酯类在蝴蝶兰中相对含量较大，百分比高达 95.8%。醇类物质的个数在蝴蝶兰挥发性组分的检出化合物总数中占的比例虽不大，为 33%，但其相对百分比含量高达69.36%，酯类物质检出的种类相对较多，但其百分含量并不大，为7.41%。
由此可见，虽然国内外对于蝴蝶兰所含活性成分的研究较少，但是蝴蝶兰所含的活性物质并不少，种类也多，具有较高的研究价值。
1.3 植物活性物质的活性研究
1.3.1 活性物质的抗氧化性评价
抗氧化活性评价目前常用的有两种方法，即体内试验和体外试验。体内试验有灵敏度高、准确的优点，但操作难度高、试验方法繁琐，且试验所需时间较长[16]，体外试验操作较为方便且适宜于大量试验。
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