蝴蝶兰活性物质水提取工艺的初步研究(附件)
通过单因素设计和三因素四水平正交设计，利用水提法从白花型V6蝴蝶兰植株中，获得活性物质提取液，从而得到较佳的提取工艺。五个单因素参数为提取部位（花瓣、根、叶）、料液质量比（1:2，1:4，1:8，1:16，1:32）、提取时间（10min，20min，30min，40min，50min）、提取温度（15℃，25℃，35℃，45℃，55℃）、破碎程度（剪成片状、中度研磨成粗浆、重度研磨成细浆）。单因素试验是以质量为指标，测定蝴蝶兰活性物质提取率；试验通过 DPPH·法，以自由基清除率为指标，检测蝴蝶兰提取液的抗氧化能力。根据单因素试验结果，设计正交试验，确立重要因素水平为提取时间20min、25min、30min、35min，料液质量比1:6、1:8、1:10、1:12，提取温度25℃、35℃、40℃、45℃。根据自由基清除率为指标获得较佳的水提取工艺条件。当料液质量比1:6、提取温度 30 ℃、提取时间35 min时，提取液清除自由基率最高达56.14%，抗氧化能力较强。最后使用提取液测定蝴蝶兰活性物质对向日葵种子萌发和育苗生长的影响，通过和纯净水对照，计算d3、d7、d11向日葵种子发芽率，d11蝴蝶兰提取液组发芽率均值达到86.33%，纯净水组为73%；观察d20向日葵幼苗生长状况，提取液组长势明显优于纯净水组。最终证明蝴蝶兰提取液具有促进向日葵种子萌发及育苗生长的作用，可用作延缓衰老化妆品添加剂和种子萌发物质。关键词 白花型蝴蝶兰，水提法，提取工艺，向日葵种子
目 录
1 引言 1
2 材料与方法 2
2.1 供试材料 2
2.2 试验设计 3
2.2.1蝴蝶兰活性物质水提取多因素试验 3
2.3 测定项目与方法 4
2.3.1 蝴蝶兰活性物质获取率测定 4
2.3.2 鉴别提取液的抗氧化功能 4
2.3.3 向日葵种子萌发和育苗试验鉴别提取液的活性作用 4
2.3.4 数据处理 5
3 结果与分析 5
3.1 不同因素水平下蝴蝶兰活性物质提取率和提取液清除自由基率 5
3.1.1 蝴蝶兰不同提取部位活性物质提取率和提取液清除自由基率 5 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
3.1.2 不同料液质量比对蝴蝶兰活性物质提取率和提取液清除自由基率的影响 6
3.1.3 不同提取时间对蝴蝶兰活性物质提取率的影响 7
3.1.4 不同提取温度对蝴蝶兰活性物质提取率的影响 8
3.1.5 不同破碎程度对蝴蝶兰花瓣提取率以及自由基清除率的影响 9
3.1.6 结果 10
3.2 正交试验设计优化水提取蝴蝶兰活性物质工艺条件 10
3.3 优化蝴蝶兰活性物质提取液清除自由基的能力 11
3.4 蝴蝶兰提取液对向日葵种子萌发和育苗生长的作用 12
4 讨论 14
结 论 15
致 谢 16
参考文献 18
1 引言
蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite Rchb. F.)，源于亚热带雨林地区，为兰科蝴蝶兰属(Phalaenopsis) 附生性兰花，其姿态优雅，花瓣色彩华丽，为热带兰中上上品，有“洋兰王后”之美誉，富含各类活性物质，深受人们的喜受[1]。然而，随着种植时间的增长，苍老的蝴蝶兰植株常常因开花不佳而逐渐被大量淘汰；废弃的蝴蝶兰不能被妥善处理，常因植株腐烂而导致环境污染；除此之外，蝴蝶兰次品市场价格较低，加之过高的运输成本不利于蝴蝶兰经市场济效益的增加；又因植物呼吸作用，蝴蝶兰鲜植株在采摘后的贮藏和销售的过程中，在高温、富含CO2环境下会因呼吸作用增强而产生大量乙烯，从而破坏蝴蝶兰体内生态平衡，缩短其生命周期，造成蝴蝶兰资源的浪费 [18]。因此，研究蝴蝶兰活性物质提取工艺有对于减少浪费，提高资源利用率，对促进蝴蝶兰产业生态发展具有重要意义。
从植物中提取活性成分可使用多种方法[711]。溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法为植物活性成分常规提取技术；近年兴起的则有超声波提取法、微波提取法、生物酶法等新兴提取技术[7]。对于一般植物的活性物质提取，一般可使用有机溶剂法、水蒸气法和水煮法[7]。朱英等人选用水提取金银花叶总黄酮,得出提取金银花叶总黄酮的最佳条件为16倍量水，90°C水浴回流提取 4次，每次 1 h,在不同的水提取工艺中，总黄酮含量高低顺序为回流法〉超声法≈碱水冷浸法 〉冷浸法；乙醇回流提取率略高于水回流提取率[1]。利用水提法从植物红景天的根中提取活性成分，通过四因素三水平正交试验得到了较佳的提取工艺；红景天根粉碎过 60目筛、料液(红景天根和蒸馏水)质量比 1∶10、提取温度100 ℃、提取时间10 min。提取液中的活性成分红景天苷和总黄酮的含量分别用高效液相色谱法和三氯化铝比色法测定[3]。郭美华通过试验研究刺五加的最佳水提取工艺为加10倍量的水煎煮2次，每次3小时[6]。 李媛媛等人以杜仲鲜皮作为原料水为提取溶剂采用单因素试验方法探讨料液质量比（1:5 1:60）、提取时间（10120min）和提取温度（3090℃ ）对杜仲皮固形物得率及活性成分提取率的影响并确定单因素试验最佳提取工艺为料液质量比1:20，提取时间60min，提取温度60摄氏度[5] 。可见目前水提取玫瑰、薰衣草和茉莉等常见植物的已经相当成熟，但关于水提取蝴蝶兰的工艺却鲜有报道。有机溶剂的乙醇和甲醇，虽然用来提取活性物质较为方便，但容易造成资源浪费和污染,存在破坏植物的活性物质的风险[13]。而根据蝴蝶兰植株水分多、叶片肥大、花朵娇嫩等植物特性，本试验选择水提取法研究蝴蝶兰活性物质的提取，各单因素水平分别设置为提取部位为花瓣、根、叶片，提取温度为15℃、25℃、35℃、45℃、55℃，料液质量比为1：2、1：4、1：8、1：16、1：32，提取时间为10min、20min、30min、40min、50min，破碎程度为剪成片状、中度研磨成粗浆、重度研磨成细浆。
单因素试验是只对一个因素进行试验，而将其他因素都固定。采用这种方法必须首先假定各因素间没有交互作用。如果各因素间存在交互作用，利用这种方法往往会得出错误的结论[16]。正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的试验设计方法[29]。故本试验选择四水平三因素继续进一步的优化工艺试验。
采用DPPH?法进行测定蝴蝶兰活性物质提取液抗氧化能力水平[15]。1, 1 二苯基 2 三硝基苯肼 (DPPH?)是一种稳定的有机自由基， 最大吸收波长为 516 nm, 在乙醇溶液中，每个 DPPH?可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型的紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅,，其褪色程度与配对电子数成化学计量关系[32]。因而可用分光光度法进行定量分析来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。其抗氧化能力用清除率来表示，清除率越大，则表明其抗氧化能力越强 [3]。
目 录
1 引言 1
2 材料与方法 2
2.1 供试材料 2
2.2 试验设计 3
2.2.1蝴蝶兰活性物质水提取多因素试验 3
2.3 测定项目与方法 4
2.3.1 蝴蝶兰活性物质获取率测定 4
2.3.2 鉴别提取液的抗氧化功能 4
2.3.3 向日葵种子萌发和育苗试验鉴别提取液的活性作用 4
2.3.4 数据处理 5
3 结果与分析 5
3.1 不同因素水平下蝴蝶兰活性物质提取率和提取液清除自由基率 5
3.1.1 蝴蝶兰不同提取部位活性物质提取率和提取液清除自由基率 5 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
3.1.2 不同料液质量比对蝴蝶兰活性物质提取率和提取液清除自由基率的影响 6
3.1.3 不同提取时间对蝴蝶兰活性物质提取率的影响 7
3.1.4 不同提取温度对蝴蝶兰活性物质提取率的影响 8
3.1.5 不同破碎程度对蝴蝶兰花瓣提取率以及自由基清除率的影响 9
3.1.6 结果 10
3.2 正交试验设计优化水提取蝴蝶兰活性物质工艺条件 10
3.3 优化蝴蝶兰活性物质提取液清除自由基的能力 11
3.4 蝴蝶兰提取液对向日葵种子萌发和育苗生长的作用 12
4 讨论 14
结 论 15
致 谢 16
参考文献 18
1 引言
蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite Rchb. F.)，源于亚热带雨林地区，为兰科蝴蝶兰属(Phalaenopsis) 附生性兰花，其姿态优雅，花瓣色彩华丽，为热带兰中上上品，有“洋兰王后”之美誉，富含各类活性物质，深受人们的喜受[1]。然而，随着种植时间的增长，苍老的蝴蝶兰植株常常因开花不佳而逐渐被大量淘汰；废弃的蝴蝶兰不能被妥善处理，常因植株腐烂而导致环境污染；除此之外，蝴蝶兰次品市场价格较低，加之过高的运输成本不利于蝴蝶兰经市场济效益的增加；又因植物呼吸作用，蝴蝶兰鲜植株在采摘后的贮藏和销售的过程中，在高温、富含CO2环境下会因呼吸作用增强而产生大量乙烯，从而破坏蝴蝶兰体内生态平衡，缩短其生命周期，造成蝴蝶兰资源的浪费 [18]。因此，研究蝴蝶兰活性物质提取工艺有对于减少浪费，提高资源利用率，对促进蝴蝶兰产业生态发展具有重要意义。
从植物中提取活性成分可使用多种方法[711]。溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法为植物活性成分常规提取技术；近年兴起的则有超声波提取法、微波提取法、生物酶法等新兴提取技术[7]。对于一般植物的活性物质提取，一般可使用有机溶剂法、水蒸气法和水煮法[7]。朱英等人选用水提取金银花叶总黄酮,得出提取金银花叶总黄酮的最佳条件为16倍量水，90°C水浴回流提取 4次，每次 1 h,在不同的水提取工艺中，总黄酮含量高低顺序为回流法〉超声法≈碱水冷浸法 〉冷浸法；乙醇回流提取率略高于水回流提取率[1]。利用水提法从植物红景天的根中提取活性成分，通过四因素三水平正交试验得到了较佳的提取工艺；红景天根粉碎过 60目筛、料液(红景天根和蒸馏水)质量比 1∶10、提取温度100 ℃、提取时间10 min。提取液中的活性成分红景天苷和总黄酮的含量分别用高效液相色谱法和三氯化铝比色法测定[3]。郭美华通过试验研究刺五加的最佳水提取工艺为加10倍量的水煎煮2次，每次3小时[6]。 李媛媛等人以杜仲鲜皮作为原料水为提取溶剂采用单因素试验方法探讨料液质量比（1:5 1:60）、提取时间（10120min）和提取温度（3090℃ ）对杜仲皮固形物得率及活性成分提取率的影响并确定单因素试验最佳提取工艺为料液质量比1:20，提取时间60min，提取温度60摄氏度[5] 。可见目前水提取玫瑰、薰衣草和茉莉等常见植物的已经相当成熟，但关于水提取蝴蝶兰的工艺却鲜有报道。有机溶剂的乙醇和甲醇，虽然用来提取活性物质较为方便，但容易造成资源浪费和污染,存在破坏植物的活性物质的风险[13]。而根据蝴蝶兰植株水分多、叶片肥大、花朵娇嫩等植物特性，本试验选择水提取法研究蝴蝶兰活性物质的提取，各单因素水平分别设置为提取部位为花瓣、根、叶片，提取温度为15℃、25℃、35℃、45℃、55℃，料液质量比为1：2、1：4、1：8、1：16、1：32，提取时间为10min、20min、30min、40min、50min，破碎程度为剪成片状、中度研磨成粗浆、重度研磨成细浆。
单因素试验是只对一个因素进行试验，而将其他因素都固定。采用这种方法必须首先假定各因素间没有交互作用。如果各因素间存在交互作用，利用这种方法往往会得出错误的结论[16]。正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的试验设计方法[29]。故本试验选择四水平三因素继续进一步的优化工艺试验。
采用DPPH?法进行测定蝴蝶兰活性物质提取液抗氧化能力水平[15]。1, 1 二苯基 2 三硝基苯肼 (DPPH?)是一种稳定的有机自由基， 最大吸收波长为 516 nm, 在乙醇溶液中，每个 DPPH?可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型的紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅,，其褪色程度与配对电子数成化学计量关系[32]。因而可用分光光度法进行定量分析来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。其抗氧化能力用清除率来表示，清除率越大，则表明其抗氧化能力越强 [3]。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/nongxue/yuanlin/29.html
