水稻血红素加氧酶1启动子的克隆及gus报告基因载体和酵母单杂交体的构建
：血红素加氧酶催化降解血红素，生成胆绿素、一氧化碳和亚铁离子。大量研究表明，动物中HO在抗炎、抗氧化、抗增生多种生理、病理过程中起重要的细胞保护功能。因此，探索植物中HO的功能极为重要。启动子位于结构基因5端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子就像“开关”，决定基因的活动。我们通过设计引物，克隆了水稻血红素加氧酶1的启动子序列，其长度为2123bp。其后分别构建了OsSE5启动子与pCAMBIA1301的重组载体，并将构建成功的重组载体转入到农杆菌EHA105中。酵母单杂交技术是一种被广泛用于研究DNA与蛋白质相互作用的方法,其基本原理是利用了真核生物转录因子不同功能域之间的反式激活效应,因此我们研究并构建了OsSE5启动子与pHIS2的酵母单杂交重组载体，并将构建成功的重组载体转入到农杆菌EHA105中。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1．1．1 植物材料 2
1．1．2 菌株与质粒载体 2
1．1．3 主要分子生物学与生物试剂 2
1．1．4 主要仪器设备 2
1．2 方法 3
1．2．1 植物材料的的处理 3
1．2．2 引物的设计 3
1．2．3 水稻叶片DNA的提取 5
1．2．4 DNA纯度的测定 5
1．2．5 水稻OSHO1启动子的PCR扩增 5
1．2．6 PCR产物的切胶回收 5
1．2．7 目的基因与T载体连接 5
1．2．8 感受态细胞的制备 6
1．2．9 连接产物转化 6
1．2．10 PCR鉴定阳性连接产物 6
1．2．11 质粒的提取 6
1．2．12 双酶切鉴定阳性重组质粒 7
1．2．13 GUS报告基因载体的构建 7
1．2．14 酵母单杂重组载体构建 7
2 结果与分析 7
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
2．1 水稻血红素加氧酶启动子的克隆 7
2．1．1 水稻提取DNA琼脂糖凝胶电泳验证 7
2．1．2 水稻启动子基因的扩增 8
2．1．3 启动子连接T载体重组质粒的双酶切 11
2．2 GUS报告基因载体的构建 12
2．2．1 pCAMBIA1301质粒载体的双酶切 12
2．2．2 重组载体菌液PCR验证 12
2．2．3 测序 13
2．3 酵母单杂重组载体构建 13
2．3．1 pHIS2的双酶切验证 13
2．3．2 重组载体菌液PCR验证 13
2．3．3 测序 14
3 讨论 14
致谢 15
参考文献： 15
水稻血红素加氧酶1启动子的克隆及GUS报告基因载体和酵母单杂交体的构建
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1．1．1 植物材料 2
1．1．2 菌株与质粒载体 2
1．1．3 主要分子生物学与生物试剂 2
1．1．4 主要仪器设备 2
1．2 方法 3
1．2．1 植物材料的的处理 3
1．2．2 引物的设计 3
1．2．3 水稻叶片DNA的提取 5
1．2．4 DNA纯度的测定 5
1．2．5 水稻OSHO1启动子的PCR扩增 5
1．2．6 PCR产物的切胶回收 5
1．2．7 目的基因与T载体连接 5
1．2．8 感受态细胞的制备 6
1．2．9 连接产物转化 6
1．2．10 PCR鉴定阳性连接产物 6
1．2．11 质粒的提取 6
1．2．12 双酶切鉴定阳性重组质粒 7
1．2．13 GUS报告基因载体的构建 7
1．2．14 酵母单杂重组载体构建 7
2 结果与分析 7
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2．1 水稻血红素加氧酶启动子的克隆 7
2．1．1 水稻提取DNA琼脂糖凝胶电泳验证 7
2．1．2 水稻启动子基因的扩增 8
2．1．3 启动子连接T载体重组质粒的双酶切 11
2．2 GUS报告基因载体的构建 12
2．2．1 pCAMBIA1301质粒载体的双酶切 12
2．2．2 重组载体菌液PCR验证 12
2．2．3 测序 13
2．3 酵母单杂重组载体构建 13
2．3．1 pHIS2的双酶切验证 13
2．3．2 重组载体菌液PCR验证 13
2．3．3 测序 14
3 讨论 14
致谢 15
参考文献： 15
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