夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗生长和生理特性的影响
目 录
1 引言1
2 材料与方法2
2.1 试验材料与地点2
2.2 试验设计 2
2.3 测定内容与方法 3
2.4 数据分析与作图4
3 结果与分析4
3.1 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗形态指标的影响 4
3.2 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗叶绿素含量和根系活力的影响 6
3.3 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗地上部可溶性蛋白质含量的影响 7
3.4 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗地上部超氧阴离子自由基生成速率的影响 7
3.5 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗MDA含量和酶活性的影响 8
4 讨论 10
4.1 不同浓度乙醇夹竹桃叶提取液对辣椒苗形态指标的影响 10
4.2 不同浓度乙醇夹竹桃叶提取液对辣椒苗生理指标的影响 11
结论 13
致谢 14
参考文献 15
1 2 引言
植物源农药[1]的使用可以减少化学农药的使用量，生产出健康安全的农产品,因而从各种植物中提取活性物质来制造生物源农药已受到广泛关注。夹竹桃内含活性物质种类繁多，生理防治功效广泛，在杀虫、抑菌、除草、植物生长调节等方面具有重要作用。因此利用夹竹桃提取液制造生物源农药得到了科学家们的重视。农用有机硅助剂具有很低的表面张力，按一定比例与农药溶液混合后，可以显著增加农药在植物表面的滞留量、延长滞留时间和提高植物表皮的穿透能力，这对于提高药效，降低农药使用量，节约成本，减少环境污染都是十分有效的[2]。
夹竹桃含有多种对病原微生物有害的物质，是重要的植物 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
源农药原料。夹竹桃内生真菌种类繁多[3]，这些内生菌构成了丰富的生物资源。方访等[4]发现夹竹桃的叶和茎皮有毒，其含有强心苷、萜类、生物碱[5]、黄酮等多种成分。吴晴、刘果果等[6]发现了夹竹桃叶水提取液对黄瓜褐斑病菌和番茄叶霉病菌菌丝生长抑制率大于70%，其中对番茄叶霉病菌菌丝生长抑制率达80.6%。陆宁海[7]等发现当夹竹桃丙酮提取液质量浓度为0.5g/ml时, 对棉花红腐病菌、黄瓜褐斑病菌、玉米小斑病菌、小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制率分别为 96.6%、91.8%、92.6%、75.8%。李爱民[8]、李昌灵[9]谭宏亮[10]等人研究出乙醇浓度为50%、70%、95%制备出的夹竹桃叶提取液对肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌6 种供试菌种有着不同程度的抑制作用,其中70%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果最明显。翟兴礼[11]研究出不同浓度（0%、5%、25%、50%、75%）的夹竹桃叶水提液有不同程度的抑菌作用，随着其浓度的增大，抑菌作用增强。
在农业生产和植保研究方面，夹竹桃叶提取液可以作为植物源除草剂进行开发利用。胡安龙[12]发现夹竹桃叶乙醇提取液可以抑制杂草的生长。江贵波[13]等人研究发现夹竹桃叶挥发油类物质对三叶鬼针草、稗草幼苗的生长均具有明显的抑制作用。夹竹桃提取液具有杀虫活性，可以作为植物源杀虫剂进行开发利用。人们很早就发现夹竹桃很少有病虫害，而且发现其叶、枝、皮都可以用于杀虫。夹竹桃的有毒部分分布在全株植物及乳白色树液中，其毒性成分是各种夹竹桃甙。郑许松[14]等研究证明夹竹桃叶乙醇提取物对2龄茭白二化螟和线虫的选择性与非选择性的拒食浓度(AFC50)分别为414.33 μg/ ml和613.94 μg/ml,生长发育的抑制浓度为1171.4 μg/ml。夹竹桃根、茎、花和叶提取物对猩猩肽果蝇、二化螟、黄豆象、米象、稻飞蝗、四蚊豆象、蝗虫和蔬菜上的菜青虫以及蚜虫等均具有胃毒、触杀的作用。王猛、曹福祥[15]等研究发现夹竹桃叶水提取物对松材线虫的致死性很强，1.2mg/ml夹竹桃叶水提物对松材线虫的校正死忙率达到97.1%。刘莹莹[16]研究表明，夹竹桃叶水提取液对红蜡蚧初孵若虫有较好的防治效果。董道青[17]等研究发现用夹竹桃叶乙醇提取物（200 mg/L）处理12 h, 死螺率高于80%，处理24h，对福寿螺的LC50 为75.78 mg/L。何恒果[18]发现夹竹桃叶片提取液对菜青虫有毒杀作用，在反应终止的96 h内,40、80、160、320、640 mg/L的夹竹桃提取液对菜青虫的校正死亡率分别为21.74%、30.43%、34.78%、43.48%、86.96% ,呈增加趋势。夹竹桃提取液对菜青虫的 LC50约为221 mg/L。
为了找出一种适合辣椒的植物源农药，生产出健康安全的辣椒果实。韩春梅等[19]发现不同浓度的外源化感物质香草酸处理液对辣椒幼苗的株高、茎粗、叶片数、叶面积均表现出“低促高抑”的规律，4个形态指标的最大值均出现在10-7mol/L的香草酸处理液上。李春龙等[20]发现低浓度（10g/L）的辣椒叶片浸提液提高了辣椒幼苗叶片内叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量及SOD、POD两种酶活性，高浓度浸提液与低浓度浸提液处理结果相反。
为了利用夹竹桃叶作为主要原料创制出植物源农药，本试验利用不同浓度的乙醇来提取夹竹桃叶片，研究其对辣椒生长和生理特性的影响，筛选出辣椒安全生长的夹竹桃叶片乙醇提取浓度，同时探讨了夹竹桃叶片乙醇提取液当中是否添加有机硅助剂对辣椒生长的影响。
2 材料与方法
2.1 试验材料与地点
2.1.1 试验地点
校内实验室及五楼玻璃温室内。
2.1.2 试验材料
淮安红椒推广专用品种 —超越2009、白花夹竹桃叶片、0.025%有机硅溶液
2.1.3 器材
可见分光光度计、烘箱、灭菌锅、离心机、旋转蒸发仪、分析天平等。
2.2 试验设计
2.2.1 制备夹竹桃叶乙醇提取液
取新鲜的夹竹桃叶粉末10g，放入100ml乙醇溶液中，浸提2 h后，于4000 r/min离心10 min，取滤液浓缩至含生药1g/ml。灭菌后放入冰箱中保存备用。
2.2.2 预试验
将95%乙醇提取的1g/ml夹竹桃叶片生药稀释为0（CK）、200、400、600、800、1000 mg/ml六个浓度，取长势相同的辣椒苗，将每个浓度的夹竹桃叶片乙醇提取液涂抹在3株辣椒苗叶片和茎上。一周后根据苗的生长情况确定600 mg/ml的夹竹桃叶片95%乙醇提取液为辣椒苗的致死浓度。以辣椒苗半致死浓度300 mg/ml夹竹桃叶片乙醇提取液作为后续试验中处理辣椒苗的浓度。
2.2.3 试验设计
试验采取有机硅与夹竹桃叶乙醇提取液浓度两因素，有机硅分为夹竹桃叶乙醇提取液中不加有机硅与加有机硅两种，夹竹桃叶提取液乙醇浓度设置为0%、25%、50%、70%、95%五个梯度，以蒸馏水作为CK。将不同处理的夹竹桃叶乙醇提取液涂抹到辣椒苗上，处理一周后测定辣椒苗形态与生理指标。试验共12个处理，每个处理3次重复。（表1）。
表1 试验设计
12 95%乙醇夹竹桃提取液
2.3 测定内容与方法
1 引言1
2 材料与方法2
2.1 试验材料与地点2
2.2 试验设计 2
2.3 测定内容与方法 3
2.4 数据分析与作图4
3 结果与分析4
3.1 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗形态指标的影响 4
3.2 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗叶绿素含量和根系活力的影响 6
3.3 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗地上部可溶性蛋白质含量的影响 7
3.4 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗地上部超氧阴离子自由基生成速率的影响 7
3.5 夹竹桃叶乙醇提取液对辣椒苗MDA含量和酶活性的影响 8
4 讨论 10
4.1 不同浓度乙醇夹竹桃叶提取液对辣椒苗形态指标的影响 10
4.2 不同浓度乙醇夹竹桃叶提取液对辣椒苗生理指标的影响 11
结论 13
致谢 14
参考文献 15
1 2 引言
植物源农药[1]的使用可以减少化学农药的使用量，生产出健康安全的农产品,因而从各种植物中提取活性物质来制造生物源农药已受到广泛关注。夹竹桃内含活性物质种类繁多，生理防治功效广泛，在杀虫、抑菌、除草、植物生长调节等方面具有重要作用。因此利用夹竹桃提取液制造生物源农药得到了科学家们的重视。农用有机硅助剂具有很低的表面张力，按一定比例与农药溶液混合后，可以显著增加农药在植物表面的滞留量、延长滞留时间和提高植物表皮的穿透能力，这对于提高药效，降低农药使用量，节约成本，减少环境污染都是十分有效的[2]。
夹竹桃含有多种对病原微生物有害的物质，是重要的植物 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
源农药原料。夹竹桃内生真菌种类繁多[3]，这些内生菌构成了丰富的生物资源。方访等[4]发现夹竹桃的叶和茎皮有毒，其含有强心苷、萜类、生物碱[5]、黄酮等多种成分。吴晴、刘果果等[6]发现了夹竹桃叶水提取液对黄瓜褐斑病菌和番茄叶霉病菌菌丝生长抑制率大于70%，其中对番茄叶霉病菌菌丝生长抑制率达80.6%。陆宁海[7]等发现当夹竹桃丙酮提取液质量浓度为0.5g/ml时, 对棉花红腐病菌、黄瓜褐斑病菌、玉米小斑病菌、小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制率分别为 96.6%、91.8%、92.6%、75.8%。李爱民[8]、李昌灵[9]谭宏亮[10]等人研究出乙醇浓度为50%、70%、95%制备出的夹竹桃叶提取液对肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌6 种供试菌种有着不同程度的抑制作用,其中70%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果最明显。翟兴礼[11]研究出不同浓度（0%、5%、25%、50%、75%）的夹竹桃叶水提液有不同程度的抑菌作用，随着其浓度的增大，抑菌作用增强。
在农业生产和植保研究方面，夹竹桃叶提取液可以作为植物源除草剂进行开发利用。胡安龙[12]发现夹竹桃叶乙醇提取液可以抑制杂草的生长。江贵波[13]等人研究发现夹竹桃叶挥发油类物质对三叶鬼针草、稗草幼苗的生长均具有明显的抑制作用。夹竹桃提取液具有杀虫活性，可以作为植物源杀虫剂进行开发利用。人们很早就发现夹竹桃很少有病虫害，而且发现其叶、枝、皮都可以用于杀虫。夹竹桃的有毒部分分布在全株植物及乳白色树液中，其毒性成分是各种夹竹桃甙。郑许松[14]等研究证明夹竹桃叶乙醇提取物对2龄茭白二化螟和线虫的选择性与非选择性的拒食浓度(AFC50)分别为414.33 μg/ ml和613.94 μg/ml,生长发育的抑制浓度为1171.4 μg/ml。夹竹桃根、茎、花和叶提取物对猩猩肽果蝇、二化螟、黄豆象、米象、稻飞蝗、四蚊豆象、蝗虫和蔬菜上的菜青虫以及蚜虫等均具有胃毒、触杀的作用。王猛、曹福祥[15]等研究发现夹竹桃叶水提取物对松材线虫的致死性很强，1.2mg/ml夹竹桃叶水提物对松材线虫的校正死忙率达到97.1%。刘莹莹[16]研究表明，夹竹桃叶水提取液对红蜡蚧初孵若虫有较好的防治效果。董道青[17]等研究发现用夹竹桃叶乙醇提取物（200 mg/L）处理12 h, 死螺率高于80%，处理24h，对福寿螺的LC50 为75.78 mg/L。何恒果[18]发现夹竹桃叶片提取液对菜青虫有毒杀作用，在反应终止的96 h内,40、80、160、320、640 mg/L的夹竹桃提取液对菜青虫的校正死亡率分别为21.74%、30.43%、34.78%、43.48%、86.96% ,呈增加趋势。夹竹桃提取液对菜青虫的 LC50约为221 mg/L。
为了找出一种适合辣椒的植物源农药，生产出健康安全的辣椒果实。韩春梅等[19]发现不同浓度的外源化感物质香草酸处理液对辣椒幼苗的株高、茎粗、叶片数、叶面积均表现出“低促高抑”的规律，4个形态指标的最大值均出现在10-7mol/L的香草酸处理液上。李春龙等[20]发现低浓度（10g/L）的辣椒叶片浸提液提高了辣椒幼苗叶片内叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量及SOD、POD两种酶活性，高浓度浸提液与低浓度浸提液处理结果相反。
为了利用夹竹桃叶作为主要原料创制出植物源农药，本试验利用不同浓度的乙醇来提取夹竹桃叶片，研究其对辣椒生长和生理特性的影响，筛选出辣椒安全生长的夹竹桃叶片乙醇提取浓度，同时探讨了夹竹桃叶片乙醇提取液当中是否添加有机硅助剂对辣椒生长的影响。
2 材料与方法
2.1 试验材料与地点
2.1.1 试验地点
校内实验室及五楼玻璃温室内。
2.1.2 试验材料
淮安红椒推广专用品种 —超越2009、白花夹竹桃叶片、0.025%有机硅溶液
2.1.3 器材
可见分光光度计、烘箱、灭菌锅、离心机、旋转蒸发仪、分析天平等。
2.2 试验设计
2.2.1 制备夹竹桃叶乙醇提取液
取新鲜的夹竹桃叶粉末10g，放入100ml乙醇溶液中，浸提2 h后，于4000 r/min离心10 min，取滤液浓缩至含生药1g/ml。灭菌后放入冰箱中保存备用。
2.2.2 预试验
将95%乙醇提取的1g/ml夹竹桃叶片生药稀释为0（CK）、200、400、600、800、1000 mg/ml六个浓度，取长势相同的辣椒苗，将每个浓度的夹竹桃叶片乙醇提取液涂抹在3株辣椒苗叶片和茎上。一周后根据苗的生长情况确定600 mg/ml的夹竹桃叶片95%乙醇提取液为辣椒苗的致死浓度。以辣椒苗半致死浓度300 mg/ml夹竹桃叶片乙醇提取液作为后续试验中处理辣椒苗的浓度。
2.2.3 试验设计
试验采取有机硅与夹竹桃叶乙醇提取液浓度两因素，有机硅分为夹竹桃叶乙醇提取液中不加有机硅与加有机硅两种，夹竹桃叶提取液乙醇浓度设置为0%、25%、50%、70%、95%五个梯度，以蒸馏水作为CK。将不同处理的夹竹桃叶乙醇提取液涂抹到辣椒苗上，处理一周后测定辣椒苗形态与生理指标。试验共12个处理，每个处理3次重复。（表1）。
表1 试验设计
12 95%乙醇夹竹桃提取液
2.3 测定内容与方法
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