不同光强蓝光对蚂蟥生长影响的初步研究
目录
摘要1
关键词1
引言1
1材料与方法1
1.1材料1
1.1.1试剂1
1.1.2仪器1
1.2方法1
1.2.1试验设计1
1.2.2测定项目2
1.2.3数据分析3
2结果与分析3
2.1不同光照强度对蚂蟥生长、存活率的影响3
2.2不同光照强度对蚂蟥消化酶的影响3
2.3不同光照强度对蚂蟥抗逆酶的影响4
2.4不同光照强度对蚂蟥内在成分的影响4
3讨论4
致谢5
参考文献5
Abstract6
引言
学生 许嘉
［摘要］ 目的：研究不同强度蓝光对蚂蟥生长及内在品质的影响。方法：在饲养条件相同的前提下，筛选出20.00±3.84、40.78±4.18、53.67±5.98、70.00±7.26、87.33±5.77μmolm2s1五个蓝光光强饲养蚂蟥，测量不同蓝光光强对蚂蟥生长、消化酶、抗逆酶、内在品质的影响。结论：20.00±3.84μmolm2s1蓝光光强最适合蚂蟥生长，53.67±5.98μmolm2s1蓝光光强最不适合蚂蟥生长。
［关键词］ 蚂蟥；生长；消化酶；抗逆性酶；内在成分
水蛭具有逐瘀、通经脉、利水道的功效。水蛭作为中药始载于《神农本草经》。2010年版《中国药典》只收载了蚂蟥（Whitmania pigra Whitman）、柳叶蚂蟥（Whitmania acranulata Whitman）和水蛭（Hirudo nipponica Whitman）三种作为水蛭药材的动物基原[1]。本项目的研究对象为蚂蟥，又称宽体金线蛭，该种亦为我国水蛭药材市场的主流品种。
随着研究工作的深入，水蛭的野生资源日益枯竭，对水蛭生长繁殖的研究也日益加深，因此水蛭的人工养殖成了当前迫在眉睫的任务，但对蚂蟥的研究则多侧重在药理和生理方面[23]，有关蚂蟥人工养殖的基础性研究少有报道，蚂蟥生理特点的研究主要集中在呼吸生理、繁殖条件以及摄食规律等方面[46]。光质作为一种重要的环境因子，会 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
影响水生动物的生长、摄食、代谢、生殖等方面，而目前还未见光照对蚂蟥生长等方面的研究报道。本实验拟研究不同强度蓝光对蚂蟥生长及内在品质的影响，从而为蚂蟥的基础生理及人工养殖提供科学依据和指导。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂
蚂蟥（由大学中药材研究所提供），经郭巧生教授鉴定为蚂蟥（Whitmania pigra Whitman）。
0.5%淀粉溶液、DNS试剂、 FolinPhenol 试剂（Sigma公司）、0.5%干酪素、考马斯亮蓝G250（南京建成生物技术公司）、0.4molL1的三氯乙酸溶液、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液、碳酸钠碳酸氢钠缓冲溶液、0.4molL1的碳酸钠溶液、对棕榈酸硝基苯酯ρNPP溶液、30%三氯乙酸、10%碳酸钠溶液、0.9%氯化钠溶液、对硝基酚溶液等。
1.1.2 仪器
756CRT紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、TGL16G离心机（飞鸽）、FA1104分析天平（上海精科天平）、KQ250B超声仪（昆山市超声仪器公司）、DELTA320 型PH计（梅特勒托利多仪器有限公司）、匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 试验设计
采用塑料罐（2L）进行试验，设5个蓝光光照梯度组（见表1），每组20个重复。每个罐子投入蚂蟥2条，试验进行60d。每日下午5：00投喂配合螺蛳，每星期换水2次，试验期间水温25±3℃。
表1 光照强度情况
光照组
光照强度
B1
20.00±3.84μmolm2s1
B2
40.78±4.18μmolm2s1
B3
53.67±5.98μmolm2s1
B4
70.00±7.26μmolm2s1
B5
87.33±5.77μmolm2s1
1.2.2 测定项目
1.2.2.1 末重、增重率、特定生长率、存活率的测定 增重率=（试验末平均重量－试验初平均重量）/试验初平均重量*100%；特定生长率=（㏑（试验末平均重量）－㏑（试验初平均重量））/试验时间*100%；存活率=试验末条数/试验初条数*100%。
1.2.2.2 消化酶活力测定[7]
蛋白酶活性测定 采用福林酚法，在37℃，pH3.2和pH9.2条件下，每分钟水解干酪素产生1μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。
淀粉酶活性测定 采用 3,5二硝基水杨酸比色法，在37℃，pH5.2条件下，单位体积的酶量，每分钟水解淀粉生成1mg还原糖的产量为1个淀粉酶活力单位。
脂肪酶活性测定 采用对棕榈酸硝基苯酯比色法，在37℃，pH8.2条件下，1min催化释放1μmol对硝基酚的酶量定义为1个活力单位。
1.2.2.3 抗逆酶的测定
碱性磷酸酶测定 采用对硝基苯基磷酸二钠法[8]，在一定条件下，每分钟催化产生1μmolpNP酶量定义为1个活力单位。
过氧化氢酶测定 采用比色法[9]，在一定条件下，每1min分解1μmol的过氧化氢为1个酶活力单位。
超氧化物歧化酶测定 采用连苯三酚氧化法[10]，在一定条件下，每1mL反应液中，每1min抑制连苯三酚自氧化速率达50%的酶量为一个活力单位。
精氨酸激酶测定 采用改进的pH比色法[11]，测定活力时，1 mL反应液加入光径1cm的比色杯中，加入100μL的精氨酸激酶启动反应，测定575 nm处光吸收值在30s之内的变化。
1.2.2.4 酶比活力定义 每毫克可溶性酶蛋白所具有的酶活力单位数（Umgprot1）。
1.2.2.5 内在成分测定
水分测定 按照中国药典2010年版附录Ⅸ H第一法测定，不得超过18.0%。
酸碱度测定 取本品粉末（过三号筛）约1g，加入0.9%氯化钠溶液10ml，充分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，离心，取上清液，照pH值测定法（中国药典2010年版附录Ⅶ G）测定，应为4.5～6.5。
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