外源脱落酸抑制大蒜试管苗玻璃化的效果
为探讨外源ABA对大蒜试管苗玻璃化的影响，以大蒜花序轴试管苗为材料，采用不同浓度外源ABA处理，测定了ABA作用下大蒜试管苗玻璃化率和生理指标变化。结果表明不同浓度外源ABA处理均有抑制试管苗玻璃化发生的效果，以0.1mg/l和0.5mg/l效果最好，试管苗玻璃化率分别为13.67%和14.33%，而对照为32%。经外源ABA处理，试管苗O2-产生速率低于对照，可溶性蛋白质含量、SOD、POD、CAT和GR活性均高于对照，但试管苗叶绿素总含量和对照差异不显著。研究结果明确了0.1mg/l和0.5mg/l的外源ABA具有抑制大蒜试管苗玻璃化的作用，为利用外源ABA防控试管苗玻璃化提供依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1材料 2
1．2试验设计和处理 2
1．2．1以大蒜花序轴为外植体获得大蒜试管苗 2
1．2．2外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化的影响 2
1．2．3外源ABA对大蒜试管苗抗氧化代谢的影响 2
1．3测定指标和方法 3
1．3．1大蒜试管苗玻璃化率 3
1．3．2大蒜玻璃化苗生理指标 3
1．4数据处理 3
2 结果与分析 3
2．1不同浓度外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化发生的影响 3
2．2外源脱落酸对试管苗叶绿素含量的影响 4
2．3外源脱落酸对试管苗可溶性蛋白的影响 5
2．4外源脱落酸对试管苗O2.产生速率的影响 5
2．5外源脱落酸对试管苗抗氧化酶的影响 6
3 讨论 7
3．1外源脱落酸与大蒜试管苗玻璃化的关系 7
3．2外源脱落酸与试管苗叶绿素含量和可溶性蛋白的关系 7
3．3 外源脱落酸与O2.产生速率和抗氧化酶的关系 7
4 结论 8
致谢 8
参考文献 8
缩略词（Abbreviations） 10
图1 不同浓度脱落酸对大蒜试管苗玻 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
璃化的影响 4
图2 外源脱落酸对大蒜试管苗叶绿素含量的影响 4
图3 外源脱落酸对大蒜试管苗蛋白质含量的影响 5
图4 外源脱落酸对大蒜试管苗O2.产生速率的影响 5
图5 外源脱落酸对大蒜试管苗SOD（A）、POD（B）、CAT(C)、GR(D)的影响 6
外源脱落酸抑制大蒜试管苗玻璃化的效果
引言
引言
大蒜(Allium sativum L.)又名蒜，葫蒜，二年生草本植物，百合科葱属，原产西亚和中亚[1]。大蒜是药食兼用的植物，长期食用可起到防病保健的作用。大蒜可作为出口蔬菜进行加工处理，增加外汇[2]。我国大蒜生产、消费和出口量都位居世界前列[3]，大蒜产品出口量占蔬菜总出口量的30%左右，大蒜主销于欧洲和东南亚，在国际市场的占有率高达50%。
大蒜无性繁殖主要依靠鳞茎进行，由此给大蒜生产带来两个问题：一是繁殖系数低；二是长期鳞茎繁殖使大蒜病毒累积，且传播广泛。利用组织培养技术可以为大蒜进行脱毒，从而能提高产量和品质[5]。但在大蒜的试管苗培养过程中，其玻璃化发生情况严重，表现为茎、叶脆弱易碎，茎粗短，有时也表现为细长，叶片纵向卷曲，呈皱缩状态，脆弱容易破碎,呈半透明状[5]。
由于玻璃化发生影响试管苗质量和增殖，因此玻璃化机理及防控技术研究一直是备受关注。Debergh[6]等认为培养基的水势会影响试管苗玻璃化；James[7]曾提出一种假设，外源细胞分裂素(CK)代谢过程中，某些中间产物的积累会导致玻璃化的发生；杨俊英等[8]认为，试管苗的玻璃化和形态解剖结构畸形、生理生化异常有关；杨芸[9]等认为与植株体内的活性氧化系统有关；部分学者从培养环境、外植体的选取以及培养基浓度等方面研究试管苗玻璃化的机理[1014]。
脱落酸(abscisic acid ABA)是一种具有倍半萜结构的有机物，存在于植物体内，常被称为胁迫应激激素[15]。有关从激素方面对试管苗玻璃化影响的报道多以细胞分裂素[1620]为主，而对脱落酸的研究并不多。高红兵等[21]和吴迪等[22]都认为，试管苗玻璃化与内源激素的平衡关系有关，发现玻璃化苗与正常苗的内源ABA含量不同。牛自勉等[23]发现，苹果砧木发生玻璃化时，茎叶中ABA含量大幅度下降；在正常叶片中，ABA含量在培养中期下降幅度较小，其后回升，培养结束时达到培养周期中的最高含量，表明ABA可以抑制试管苗玻璃化的发生。关于从激素方面研究试管苗玻璃化的报道多以细胞分裂素为主，而从脱落酸抑制试管苗玻璃化的研究并不常见。
本试验通过对大蒜试管苗进行不同浓度的外源脱落酸处理，调查试管苗玻璃化发生情况，测定试管苗活性氧产生和抗氧化酶活性，探讨外源脱落酸对试管苗玻璃化及抗氧化系统的影响，以期为利用外源ABA防控试管苗玻璃化提供基础。
1 材料与方法
1．1材料
试验在大学园艺学院完成,试验时间是2016年4月—2016年10月期间。供试材料为大蒜试管苗，由大蒜品种‘二水早’花序轴培养得到。试验中使用的试剂ABA由国药集团化学试剂有限公司生产，为分析纯。
1．2试验设计和处理
1．2．1以大蒜花序轴为外植体获得大蒜试管苗
当田间大蒜花茎发育至相对高度（花茎高/假茎高）约为1，花序轴直径0.5cm时，选取长度、颜色、直径均匀的蒜薹，剪下的蒜薹总苞需带有2cm左右薹段，置于饱和洗衣粉中浸泡30 min，之后再用自来水冲洗材料30 min。将蒜薹总苞冲洗充分后置于超净工作台上，表面以70%酒精进行1 min消毒，再使用2%次氯酸钠溶液浸泡8 min消毒，最后使用无菌水冲洗3次[9]。外层苞叶剥去后，再将花茎部分及花序轴表面退化的花原基残留物和膜质苞片去除干净[9]，最后将花序轴纵切为4块，接种于同一瓶诱导培养基中（B5 +0.5mg/l 6BA+ 0.1 mg/l NAA + 0.65%琼脂 + 3%蔗糖，pH 5.8），在温度（25±1）℃，光照时间12h/d以及光强为300μmolm2s1的条件下进行培养。每隔20天继代一次(B5 +1mg/l 6BA+ 0.1 mg/l NAA + 0.65%琼脂 + 3%蔗糖，pH 5.8)，共继代培养2次。
1．2．2外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化的影响
外源ABA浓度分别为： 0（对照）0.1、0.5、1和5mg/l。每处理重复三次，每重复接种为20瓶正常试管苗，每瓶4株。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1材料 2
1．2试验设计和处理 2
1．2．1以大蒜花序轴为外植体获得大蒜试管苗 2
1．2．2外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化的影响 2
1．2．3外源ABA对大蒜试管苗抗氧化代谢的影响 2
1．3测定指标和方法 3
1．3．1大蒜试管苗玻璃化率 3
1．3．2大蒜玻璃化苗生理指标 3
1．4数据处理 3
2 结果与分析 3
2．1不同浓度外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化发生的影响 3
2．2外源脱落酸对试管苗叶绿素含量的影响 4
2．3外源脱落酸对试管苗可溶性蛋白的影响 5
2．4外源脱落酸对试管苗O2.产生速率的影响 5
2．5外源脱落酸对试管苗抗氧化酶的影响 6
3 讨论 7
3．1外源脱落酸与大蒜试管苗玻璃化的关系 7
3．2外源脱落酸与试管苗叶绿素含量和可溶性蛋白的关系 7
3．3 外源脱落酸与O2.产生速率和抗氧化酶的关系 7
4 结论 8
致谢 8
参考文献 8
缩略词（Abbreviations） 10
图1 不同浓度脱落酸对大蒜试管苗玻 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
璃化的影响 4
图2 外源脱落酸对大蒜试管苗叶绿素含量的影响 4
图3 外源脱落酸对大蒜试管苗蛋白质含量的影响 5
图4 外源脱落酸对大蒜试管苗O2.产生速率的影响 5
图5 外源脱落酸对大蒜试管苗SOD（A）、POD（B）、CAT(C)、GR(D)的影响 6
外源脱落酸抑制大蒜试管苗玻璃化的效果
引言
引言
大蒜(Allium sativum L.)又名蒜，葫蒜，二年生草本植物，百合科葱属，原产西亚和中亚[1]。大蒜是药食兼用的植物，长期食用可起到防病保健的作用。大蒜可作为出口蔬菜进行加工处理，增加外汇[2]。我国大蒜生产、消费和出口量都位居世界前列[3]，大蒜产品出口量占蔬菜总出口量的30%左右，大蒜主销于欧洲和东南亚，在国际市场的占有率高达50%。
大蒜无性繁殖主要依靠鳞茎进行，由此给大蒜生产带来两个问题：一是繁殖系数低；二是长期鳞茎繁殖使大蒜病毒累积，且传播广泛。利用组织培养技术可以为大蒜进行脱毒，从而能提高产量和品质[5]。但在大蒜的试管苗培养过程中，其玻璃化发生情况严重，表现为茎、叶脆弱易碎，茎粗短，有时也表现为细长，叶片纵向卷曲，呈皱缩状态，脆弱容易破碎,呈半透明状[5]。
由于玻璃化发生影响试管苗质量和增殖，因此玻璃化机理及防控技术研究一直是备受关注。Debergh[6]等认为培养基的水势会影响试管苗玻璃化；James[7]曾提出一种假设，外源细胞分裂素(CK)代谢过程中，某些中间产物的积累会导致玻璃化的发生；杨俊英等[8]认为，试管苗的玻璃化和形态解剖结构畸形、生理生化异常有关；杨芸[9]等认为与植株体内的活性氧化系统有关；部分学者从培养环境、外植体的选取以及培养基浓度等方面研究试管苗玻璃化的机理[1014]。
脱落酸(abscisic acid ABA)是一种具有倍半萜结构的有机物，存在于植物体内，常被称为胁迫应激激素[15]。有关从激素方面对试管苗玻璃化影响的报道多以细胞分裂素[1620]为主，而对脱落酸的研究并不多。高红兵等[21]和吴迪等[22]都认为，试管苗玻璃化与内源激素的平衡关系有关，发现玻璃化苗与正常苗的内源ABA含量不同。牛自勉等[23]发现，苹果砧木发生玻璃化时，茎叶中ABA含量大幅度下降；在正常叶片中，ABA含量在培养中期下降幅度较小，其后回升，培养结束时达到培养周期中的最高含量，表明ABA可以抑制试管苗玻璃化的发生。关于从激素方面研究试管苗玻璃化的报道多以细胞分裂素为主，而从脱落酸抑制试管苗玻璃化的研究并不常见。
本试验通过对大蒜试管苗进行不同浓度的外源脱落酸处理，调查试管苗玻璃化发生情况，测定试管苗活性氧产生和抗氧化酶活性，探讨外源脱落酸对试管苗玻璃化及抗氧化系统的影响，以期为利用外源ABA防控试管苗玻璃化提供基础。
1 材料与方法
1．1材料
试验在大学园艺学院完成,试验时间是2016年4月—2016年10月期间。供试材料为大蒜试管苗，由大蒜品种‘二水早’花序轴培养得到。试验中使用的试剂ABA由国药集团化学试剂有限公司生产，为分析纯。
1．2试验设计和处理
1．2．1以大蒜花序轴为外植体获得大蒜试管苗
当田间大蒜花茎发育至相对高度（花茎高/假茎高）约为1，花序轴直径0.5cm时，选取长度、颜色、直径均匀的蒜薹，剪下的蒜薹总苞需带有2cm左右薹段，置于饱和洗衣粉中浸泡30 min，之后再用自来水冲洗材料30 min。将蒜薹总苞冲洗充分后置于超净工作台上，表面以70%酒精进行1 min消毒，再使用2%次氯酸钠溶液浸泡8 min消毒，最后使用无菌水冲洗3次[9]。外层苞叶剥去后，再将花茎部分及花序轴表面退化的花原基残留物和膜质苞片去除干净[9]，最后将花序轴纵切为4块，接种于同一瓶诱导培养基中（B5 +0.5mg/l 6BA+ 0.1 mg/l NAA + 0.65%琼脂 + 3%蔗糖，pH 5.8），在温度（25±1）℃，光照时间12h/d以及光强为300μmolm2s1的条件下进行培养。每隔20天继代一次(B5 +1mg/l 6BA+ 0.1 mg/l NAA + 0.65%琼脂 + 3%蔗糖，pH 5.8)，共继代培养2次。
1．2．2外源脱落酸对大蒜试管苗玻璃化的影响
外源ABA浓度分别为： 0（对照）0.1、0.5、1和5mg/l。每处理重复三次，每重复接种为20瓶正常试管苗，每瓶4株。
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