蒙药消肿九味散中主成分测定研究

摘要：目的:测定蒙药消肿九味散中大黄酸.大黄素.大黄酚3种活性成分的含量.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,Dimaonsil-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15)为流动相;流速:1.0mL·min-1;检测波长: 更多精彩就在： 51免费论文网|www.hbsrm.com 
254nm,柱温为25℃.结果:大黄酸.大黄素.大黄酚3种成分分别在0.10180.5088μg.0.11700.5850μg.0.25601.2800μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.9997;且样品中3种成分的平均加样回收率(n=6)分别为98.98%.99.54%.97.36%,RSD均小于1.32%.结论:建立的含量测定方法简便.快速.灵敏.准确,可以从该制剂中原料药材君药的角度用于该制剂的质量控制.关键字：消肿九味散;大黄酸;大黄素;大黄酚;HPLC法;Abstract：Objective:TodeterminatethecontentsofthreeactiveingredientsinMongolianmedicineofXiaozhongJiuweiPowder,includingrheinicacid,rheumemodinandchrysophanol.Methods:HighPressureLiquidChromatography(HPLC)wasadopted,usingtheDimaonsil-C18(250mm×4.6mm,5μm)aschromatographiccolumnwith25℃,methanol-0.1%phosphoricacidsolution(85:15)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1anddetectionwavelengthwas254nm.Results:Thethreeingredientsofrheinicacid,rheumemodinandchrysophanolshowedgoodlinearrelationwiththeirpeakareaswithinthelimitsof0.1018~0.5088μg(r=0.9997),0.1170~0.5850μg(r=0.9997)and0.2560~1.2800μg(r=0.9998),respectively.Alltheircorrelationcoefficientsweregreaterthan0.9997.Themeanrecoveryof98.45%(1.32%)forrheinicacid,99.60%(1.09%)forrheumemodinand97.36%(1.17%)forchrysophanolwereobtained(n=6),andalltheRSDvalueswerelessthan1.32%.Conclusion:Themethodestablishedinthisstudyissimple,highaccuracy,precisionandspecific,andthusitcanbeusedtocontrolthequalityofpreparationperspectivefrommonarchdruginacrudemedicinalmaterialsofaprescription.Keyword：XiaozhongJiuweiPowder;rheinicacid;rheumemodin;chrysophanol;HPLC;蒙药消肿九味散由大黄.京大戟.翻白草.玉竹.姜黄.水菖蒲.生草乌.天门冬等八味原料药材组成,但处方中大黄2份,故称九味散.具有退热.消肿.止痛功能;用于急性腮腺炎.淋巴结炎.皮下及深部脓肿.丹毒.红肿热痛.风湿寒痹.关节疼痛等症.为蒙古族临床常用药并且疗效较佳[1].该制剂尚未见具有活性成分含量测定的研究报道,尤其是原料药材中大黄为主药,其商品在市场上时有伪劣品出现,因此本文采用高效液相色谱法同时测定该制剂中大黄酸.大黄素.大黄酚3个成分的含量,并为该制剂提供了快速.准确.可靠的有关成分测定方法,为其质量控制提供了新的技术方法.1.仪器与材料LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津),SPD—10AVP检测器(日本岛津),N3000色谱工作站(浙江大学智能信息研究所),Dimaonsil-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,迪马公司),ADW220D型电子分析天平(日本岛津),KQ-100超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司).蒙药消肿九味散分别由内蒙古科尔沁药业有限公司.内蒙古库伦蒙药厂.内蒙古乌兰浩特中蒙制药有限公司提供(批号:20130118.121014.121226);大黄酸.大黄素.大黄酚对照品(批号:0757-200506.0756-200510.0796-200408)均购自中国食品药品检定研究所.甲醇为色谱纯;水为高纯水;所用试剂均为分析纯.2.方法与结果2.1.色谱条件[2-8]色谱柱:Dimaonsil-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15);流速:1.0mL·min-1;检测波长:254nm,柱温为25℃;进样量:10μL.2.2.对照品溶液的制备精密称取大黄酸.大黄素及大黄酚适量,分别置量瓶中,加甲醇溶解.摇匀,分别制成81.4μg/mL.46.8μg/mL.512μg/mL的对照品贮备液.分别精密吸取上述对照品溶液配成大黄酸.大黄素.大黄酚为40.7μg/mL.46.8μg/mL.102.4mg/mL的混合对照品溶液.2.3.供试品溶液的制备取消肿九味散约2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5mL,置烧瓶中,挥去溶剂,加8%盐酸溶液10mL,超声5min,再加三氯甲烷10mL,加热回流1h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液再用三氯甲烷提取3次,每次10mL,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇使溶解,转移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得.同样另取缺大黄阴性对照品约1.6g,照供试品溶液的制备方法制备,即得.2.4.干扰试验精密吸取对照品溶液.供试品溶液.缺大黄的阴性对照品溶液各10μL,分别注入液相色谱仪,结果供试品溶液色谱图中与对照品相应的位置上,分别有大黄酸.大黄素.大黄酚的吸收峰,而缺大黄的阴性对照品溶液色谱图无干扰色谱峰,结果见图1.图1对照品,消肿九味散与缺大黄阴性样的HPLC图2.5.考察线性关系精密吸取混合对照品溶液2.5.5.0.7.5.10.0.12.5μL注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积(A).并以峰面积(Y)对混合对照品的进样量(X)进行线性回归,得回归方程依次为:Y1=2.271×106X8.549×103,r=0.9997;Y2=1.918×106X7.800×103,r=0.9997;Y3=2.753×106X1.069×104,r=0.9998.结果表明,大黄酸.大黄素.大黄酚在0.1018~0.5088μg.0.1170~0.5850μg.0.2560~1.2800μg范围内,与峰面积具有良好的线性关系.2.6.精密度试验精密吸取2.3项下的供试品溶液10μL,重复进样6次,结果峰面积的RSD分别为1.13%.0.98%和0.82%.表明仪器的测定精密度良好.2.7.稳定性试验精密称取同一批样品(批号121014),按2.3项下的方法制备供试品溶液6份,分别于0.2.4.6.8.10h注入液相色谱仪,测定,计算,结果3种成峰面积的的RSD分别为0.69%.1.67%和1.45%.结果表明供试品溶液中该3种成分在10h内稳定性良好.2.8.重复性试验精密称取同一批样品约2.0g,照供试品溶液制备方法制得供试品溶液6份,分别精密吸取10μL,注入液相色谱仪,测定,计算,结果3种成分峰面积的RSD分别为1.10%.1.52%和1.74%.表明该含量测定方法具有良好的重复性.2.9.回收率试验取已知含量的样品约1.0g,计6份,精密称定,分别加入一定量的对照品溶液,照供试品溶液制备方法制得供试品溶液,并计算回收率,结果大黄酸.大黄素.大黄酚平均回收率为98.98%.99.54%.97.36%,RSD分别为1.32%.1.09%.1.15%.结果见表1.2.10.样品测定分别称取3批样品约2.0g,每批6份,照供试品溶液制备方法制得供试品溶液.精密吸取供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定其峰面积值,计算大黄酸.大黄素.大黄酚的含量.结果见表2.表1消肿九味散加样回收率试验(n=6)注:*大黄酸0.0814mg/mL×10mL=0.8140mg;大黄素0.468mg/mL×1.5mL=0.7020mg;大黄酚0.512mg/mL×3mL=1.5360mg.表2消肿九味散含量(n=6)3.讨论蒙药消肿九味散由大黄.京大戟.翻白草.玉竹.姜黄.水菖蒲.生草乌.天门冬等药材组成,为确保疗效及提高药品质量,我们采用HPLC法对君药中的大黄酸.大黄素.大黄酚进行了含量测定.试验结果表明,该方法简便.快捷.准确.重复性好,大黄酸.大黄素.大黄酚的平均回收率分别为98.98%.99.54%.97.36%,RSD分别为1.32%.1.09%.1.15%(n=6),为该药质量控制提供了新的技术方法与质量指标.在本试验所确定的色谱条件下,大黄酸.大黄素.大黄酚均基线分离(R>1.5);T(0.95~1.05);理论板数按大黄素峰计算不低于3000.参考文献：[1]中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册[S].北京:1998:152.[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:22.[3]任吉兰,林荣强,姜慧祯.HPLC测定清火片中大黄酸大黄素大黄酚的含量[J].中医药学刊,2005,23(10):1888-1890.[4]赵飞飞.大黄原药材质量标准研究[D].北京:北京中医药大学,2011[5]闫海燕.HPLC法测定大黄提取物中芦荟大黄素.大黄酚.大黄素甲醚的含量[J].化学与生物工程,2011,29(10):87-88.[6]张依倩,王玉,张兰兰.大黄的质量评价方法研究进展与展望[J].中药材,2010,33(10):1663-1667.[7]刘翠玲,刘东辉,黄月纯.大黄饮片HPLC指纹图谱的方法学研究[J].中药新药与临床药理,2009,20(5):442-445.[8]李湘宏,余晓玲,姜莉云.HPLC法测定胃血止糊剂中大黄素和大黄酚的含量[J].中南医学科学杂志,2012,40(6):616-620.

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