植物促生菌对一年生黑麦草幼苗cd毒害的调控作用
：以一年生黑麦草为材料进行水培实验，研究镉胁迫下植物促生菌对黑麦草生长的调控作用。实验结果表明：在20μM/L Cd2+处理下，Fv10、A02、Ea01、Oj06四种菌对一年生黑麦草的生长具一定的促进作用；黑麦草的地上及地下部分鲜重和干重、株高根长、分蘖数、叶绿素含量以及吸Cd量较Cd处理组增加，丙二醛含量减少。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料2
1.2仪器与试剂2
1.3实验方法 2
1.3.1供试细菌培养与菌悬液制备2
1.3.2水培实验2
1.3.3测定指标与方法3
1.3.4数据处理与分析3
2结果与分析3
2.1供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草幼苗生长的影响4
2.2供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草叶绿素含量的影响6
2.3供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草丙二醛含量的影响7
2.4供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草镉含量的影响7
3讨论8
致谢9
参考文献10
植物促生菌对一年生黑麦草幼苗Cd毒害的调控作用
引言
随着人类的发展与活动，重金属污染已经成为了一个严重的全球性问题。土壤重金属污染具有隐蔽性、长期性、不可逆性、毒性累加性以及不能完全被分解或消逝的特点。过量重金属能引起植物生理功能紊乱、营养失调，并通过食物链对人体健康造成危害（蒋先军，2002；Jackson et al.,1992）。随着电解工业的发展，镉（Cd）的产量大量增加，由镉产生的环境污染问题也日趋严重（熊愈辉，2007）。一般情况下，自然存在的镉不会对人类造成危害，而人为因素引入的镉则会给人类带来危害（冉烈，2011）。如果成人每天接触镉的剂量达到30～50 mg，将会大大增加骨折、癌症、肾功能紊乱和高血压
的风险（Soisungwan et a1.,2003）。镉进入土壤后，被固定在土壤中，因而很难被消除（盛
下放，2003）。土壤中过量的镉被植物
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
吸收积累在体内，当镉在植物体内的积累量达到一定程度时，会对植物的生长、细胞分裂和结构及多种代谢活动产生较大影响，造成生物量以及品质的下降（Bisova et a1.,2003;Unyayar et a1.,2006）。镉能引起木质部细胞壁退化，减少木质部对水分的运输，最终导致植株萎蔫（薛永，2014）。
解决上述重金属镉污染问题的有效方法之一是通过使用植物修复，它是以植物忍耐和超富集某种或某些化学元素的理论为基础，利用植物清除土壤中的污染重金属的一类环境整治技术（Salt et a1.,1995）。然而，怎样使用于修复的植物能够在被镉污染的土壤上更好的生长，并使其对重金属的富集能力有所增强，各个领域的人们想出来很多有效可行的办法。其中，添加植物促生菌，利用植物和微生物的互作，就是其中一种较好的绿色环保的方法。
植物促生菌（plant growth promoting bacteria，PGPB）被定义为在一定条件下有利于植物生长的，能够自由生活在土壤、根际、根表、叶际的细菌（Bashan et a1.,2005）。植物促生菌可合成某些对植物生长发育有直接作用的物质（如生长素等）来促进植物的生长，或改变土壤中某些无效元素的形态, 使之有效化而利于作物吸收（如固氮、解磷作用等）。植物促生菌在促进植物生长，提高植物生物量的同时，还能够增强植物对重金属的富集，减少土壤中重金属的含量，达到修复重金属污染土壤的目的。因此，筛选出对一年生黑麦草幼苗Cd毒害具有较好调控作用的耐镉性菌株显得极为重要。
1 材料与方法
实验材料
植物材料：一年生黑麦草(Lolium multiflorum Lam)品种“牧瑶”。
仪器与试剂
仪器：电子分析天平，烘箱，离心机，分光光度计，电感耦合等离子体发射光谱仪，试管，离心管，尺子，剪刀，量筒，滤纸，漏斗，吸水纸，容量瓶，锥形瓶，移液枪等。
试剂：Hoagland营养液：硝酸钾101.10g/L、四水硝酸钙236.16g/L、磷酸二氢铵115.08g/L、七水硫酸镁246.49g/L；微量元素液2ml：氯化钾1.864g/L、硼酸0.773g/L、硫酸锰0.169g/L、七水硫酸锌0.228g/L、钼酸钠0.060g/L、五水硫酸铜0.062g/L；铁盐溶液：七水硫酸亚铁5.57g/L、乙二胺四乙酸二钠（EDTA.Na）7.45g/L、蒸馏水各500ml。
1．3 实验方法
1．3．1 供试细菌培养与菌悬液制备 将供试细菌接种于液体LB培养基上，28℃摇床160 rpm振荡培养24 h，并用无菌生理盐水重新悬浮清洗两遍，最终菌体重悬于无菌生理盐水中制备成OD600=0.8的菌悬液备用。
1．3．2 水培实验 以耐Cd型一年生黑麦草牧遥为材料，用10%H2O2消毒15分钟，再用去离子水清洗三遍，用漂浮法进行种子萌发，六天后，选取生长一致的幼苗移栽至
1L塑料杯，进行营养液培养(1/4Hoagland营养液pH6.5)，每三天换一次培养液。十天后进行镉（20 μM CdCl2）处理，不加菌为对照（CK），另设加Fv10、A02、Ea01和Oj06植物促生菌为处理，于20 μM CdCl2处理前后分别在植物根附近喷施两次菌悬液，每盆5ml。在28℃下培养处理10天。每组处理设置3个重复。实验于大学生命科学学院C2016室（温室）中进行。
1．3．3 测定指标与方法
（1）生长参数的测定
取出植株，根系先用20mM的EDTA洗脱，再用去离子水冲洗干净并用滤纸吸干，测定各处理下每株的株高、根长，分蘖数，再将地上部和地下部分分开，分别测定地上鲜重和地下鲜重，然后置105oC烘箱中杀青，80oC烘至恒重。分别测定地上和地下部干重。
（2）叶绿素含量的测定
取新鲜植物叶片0.2克叶片，剪碎，放入含有10 mL95%酒精的试管中，至于黑暗中静置提取12h，取上清液于光径为1cm的比色皿中，以95%乙醇为空白对照在波长663 nm、646 nm﹑470 nm下测定吸光值（王学奎等，2007）。计算公式如下：
Chla= 13.95A6656.88A649
Chlb= 24.96A6497.32A665
Car= (1000A4702.05Ca114.8Cb)/245
叶绿素含量（mgg1）= (C*V*N)/W*1000
式中：C为色素含量（mgL1）；V为提取液体积（mL）；N为稀释倍数；W为样品鲜重；1000即1L = 1000mL。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料2
1.2仪器与试剂2
1.3实验方法 2
1.3.1供试细菌培养与菌悬液制备2
1.3.2水培实验2
1.3.3测定指标与方法3
1.3.4数据处理与分析3
2结果与分析3
2.1供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草幼苗生长的影响4
2.2供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草叶绿素含量的影响6
2.3供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草丙二醛含量的影响7
2.4供试菌株对镉胁迫下一年生黑麦草镉含量的影响7
3讨论8
致谢9
参考文献10
植物促生菌对一年生黑麦草幼苗Cd毒害的调控作用
引言
随着人类的发展与活动，重金属污染已经成为了一个严重的全球性问题。土壤重金属污染具有隐蔽性、长期性、不可逆性、毒性累加性以及不能完全被分解或消逝的特点。过量重金属能引起植物生理功能紊乱、营养失调，并通过食物链对人体健康造成危害（蒋先军，2002；Jackson et al.,1992）。随着电解工业的发展，镉（Cd）的产量大量增加，由镉产生的环境污染问题也日趋严重（熊愈辉，2007）。一般情况下，自然存在的镉不会对人类造成危害，而人为因素引入的镉则会给人类带来危害（冉烈，2011）。如果成人每天接触镉的剂量达到30～50 mg，将会大大增加骨折、癌症、肾功能紊乱和高血压
的风险（Soisungwan et a1.,2003）。镉进入土壤后，被固定在土壤中，因而很难被消除（盛
下放，2003）。土壤中过量的镉被植物
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
吸收积累在体内，当镉在植物体内的积累量达到一定程度时，会对植物的生长、细胞分裂和结构及多种代谢活动产生较大影响，造成生物量以及品质的下降（Bisova et a1.,2003;Unyayar et a1.,2006）。镉能引起木质部细胞壁退化，减少木质部对水分的运输，最终导致植株萎蔫（薛永，2014）。
解决上述重金属镉污染问题的有效方法之一是通过使用植物修复，它是以植物忍耐和超富集某种或某些化学元素的理论为基础，利用植物清除土壤中的污染重金属的一类环境整治技术（Salt et a1.,1995）。然而，怎样使用于修复的植物能够在被镉污染的土壤上更好的生长，并使其对重金属的富集能力有所增强，各个领域的人们想出来很多有效可行的办法。其中，添加植物促生菌，利用植物和微生物的互作，就是其中一种较好的绿色环保的方法。
植物促生菌（plant growth promoting bacteria，PGPB）被定义为在一定条件下有利于植物生长的，能够自由生活在土壤、根际、根表、叶际的细菌（Bashan et a1.,2005）。植物促生菌可合成某些对植物生长发育有直接作用的物质（如生长素等）来促进植物的生长，或改变土壤中某些无效元素的形态, 使之有效化而利于作物吸收（如固氮、解磷作用等）。植物促生菌在促进植物生长，提高植物生物量的同时，还能够增强植物对重金属的富集，减少土壤中重金属的含量，达到修复重金属污染土壤的目的。因此，筛选出对一年生黑麦草幼苗Cd毒害具有较好调控作用的耐镉性菌株显得极为重要。
1 材料与方法
实验材料
植物材料：一年生黑麦草(Lolium multiflorum Lam)品种“牧瑶”。
仪器与试剂
仪器：电子分析天平，烘箱，离心机，分光光度计，电感耦合等离子体发射光谱仪，试管，离心管，尺子，剪刀，量筒，滤纸，漏斗，吸水纸，容量瓶，锥形瓶，移液枪等。
试剂：Hoagland营养液：硝酸钾101.10g/L、四水硝酸钙236.16g/L、磷酸二氢铵115.08g/L、七水硫酸镁246.49g/L；微量元素液2ml：氯化钾1.864g/L、硼酸0.773g/L、硫酸锰0.169g/L、七水硫酸锌0.228g/L、钼酸钠0.060g/L、五水硫酸铜0.062g/L；铁盐溶液：七水硫酸亚铁5.57g/L、乙二胺四乙酸二钠（EDTA.Na）7.45g/L、蒸馏水各500ml。
1．3 实验方法
1．3．1 供试细菌培养与菌悬液制备 将供试细菌接种于液体LB培养基上，28℃摇床160 rpm振荡培养24 h，并用无菌生理盐水重新悬浮清洗两遍，最终菌体重悬于无菌生理盐水中制备成OD600=0.8的菌悬液备用。
1．3．2 水培实验 以耐Cd型一年生黑麦草牧遥为材料，用10%H2O2消毒15分钟，再用去离子水清洗三遍，用漂浮法进行种子萌发，六天后，选取生长一致的幼苗移栽至
1L塑料杯，进行营养液培养(1/4Hoagland营养液pH6.5)，每三天换一次培养液。十天后进行镉（20 μM CdCl2）处理，不加菌为对照（CK），另设加Fv10、A02、Ea01和Oj06植物促生菌为处理，于20 μM CdCl2处理前后分别在植物根附近喷施两次菌悬液，每盆5ml。在28℃下培养处理10天。每组处理设置3个重复。实验于大学生命科学学院C2016室（温室）中进行。
1．3．3 测定指标与方法
（1）生长参数的测定
取出植株，根系先用20mM的EDTA洗脱，再用去离子水冲洗干净并用滤纸吸干，测定各处理下每株的株高、根长，分蘖数，再将地上部和地下部分分开，分别测定地上鲜重和地下鲜重，然后置105oC烘箱中杀青，80oC烘至恒重。分别测定地上和地下部干重。
（2）叶绿素含量的测定
取新鲜植物叶片0.2克叶片，剪碎，放入含有10 mL95%酒精的试管中，至于黑暗中静置提取12h，取上清液于光径为1cm的比色皿中，以95%乙醇为空白对照在波长663 nm、646 nm﹑470 nm下测定吸光值（王学奎等，2007）。计算公式如下：
Chla= 13.95A6656.88A649
Chlb= 24.96A6497.32A665
Car= (1000A4702.05Ca114.8Cb)/245
叶绿素含量（mgg1）= (C*V*N)/W*1000
式中：C为色素含量（mgL1）；V为提取液体积（mL）；N为稀释倍数；W为样品鲜重；1000即1L = 1000mL。
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