拟南芥脂磷酸磷酸酶(lpp1)应答盐害的分子机理
脂磷酸磷酸酶（LPPs）是一组磷酸转移酶家族的酶，它有四种亚型[1]LPP1、LPP2、LPP3、LPP4。高等植物中LPPs的研究主要集中在拟南芥中，它们的作用是催化水解焦磷酸甘油二脂 (DGPP)去磷酸化生成磷脂酸（PA），并进一步催化磷脂酸（PA）去磷酸化生成二酰基甘油 (DAG)[2, 3]。其中, LPP1能广泛的应答生物或非生物胁迫[4]。为了研究LPP1应答盐害的分子机理，我们利用GUS进行组织特异性染色，并加以盐处理生理分析野生型和lpp1的耐盐表型。结果表明，AtLPP1主要表达在根和叶等组织部位，lpp1纯合缺失突变体对盐胁迫更加敏感，种子的萌发率、生物量降低及细胞的Na+/K+离子含量发生紊乱，而外源加入PA能有效的缓解盐胁迫效应。通过上述工作我们可以初步揭示LPP1蛋白抗盐的分子机制，为抗逆农作物新品种的培育提供理论基础和基因资源。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.2方法3
1.2.1 拟南芥基因组总DNA、RNA的提取3
1.2.2 实验引物设计3
1.2.3 基因克隆及酶切酶连转化反应4
1.2.4菌落PCR阳性克隆筛选5
1.2.5 拟南芥植株的转染与GUS报告基因的检测5
1.2.6 拟南芥发芽率的测定方法5
1.2.7拟南芥离子含量的测定方法5
1.2.8 拟南芥生物量的测定方法6
2 结果与分析6
2.1 AtLPP1基因组织特异性表达部位的定位6
2.1.1 AtLPP1:GUS转基因植株的构建6
2.1.2 AtLPP1:GUS组织表达定位6
2.2 拟南芥中LPP1耐盐性机制分析7
2.2.1 lpp1纯和突变体植株的鉴定筛选7
2.2.2 利用CRISPR Cas9技术构建lpp1纯和突变体株系8
2.2.3 构建AtLPP1基因的回补型和过表达型转基因株系9
2.2.4 拟南芥发芽率的测定 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
9
2.2.5 拟南芥生物量的测定10
2.2.6 拟南芥离子含量的测定10
3 讨论 11
3.1 AtLPP1基因表达的定位分析11
3.2 LPP1的耐盐机理探究11
致谢11
参考文献12
附录13
拟南芥脂磷酸磷酸酶（LPP1）应答盐害的分子机理
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.2方法3
1.2.1 拟南芥基因组总DNA、RNA的提取3
1.2.2 实验引物设计3
1.2.3 基因克隆及酶切酶连转化反应4
1.2.4菌落PCR阳性克隆筛选5
1.2.5 拟南芥植株的转染与GUS报告基因的检测5
1.2.6 拟南芥发芽率的测定方法5
1.2.7拟南芥离子含量的测定方法5
1.2.8 拟南芥生物量的测定方法6
2 结果与分析6
2.1 AtLPP1基因组织特异性表达部位的定位6
2.1.1 AtLPP1:GUS转基因植株的构建6
2.1.2 AtLPP1:GUS组织表达定位6
2.2 拟南芥中LPP1耐盐性机制分析7
2.2.1 lpp1纯和突变体植株的鉴定筛选7
2.2.2 利用CRISPR Cas9技术构建lpp1纯和突变体株系8
2.2.3 构建AtLPP1基因的回补型和过表达型转基因株系9
2.2.4 拟南芥发芽率的测定 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
9
2.2.5 拟南芥生物量的测定10
2.2.6 拟南芥离子含量的测定10
3 讨论 11
3.1 AtLPP1基因表达的定位分析11
3.2 LPP1的耐盐机理探究11
致谢11
参考文献12
附录13
拟南芥脂磷酸磷酸酶（LPP1）应答盐害的分子机理
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