3种十二卷属植物的离体培养条件研究
摘要：本试验以3种十二卷属植物为材料，研究了不同外植体及不同培养基对其离体培养及快速繁殖的影响。研究结果表明：诱导愈伤组织最佳的外植体是花葶上部子房，诱导培养基为MS+NAA 0.2 mg/L（单位下同）+6-BA 2.0mg/L +KT 1.0mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L；最佳分化培养基为MS + 6-BA 1.0 + KT 0.5 +蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L；最佳增殖培养基为MS+NAA 0.2 +6-BA 0.5 + KT 0.5 +蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
1 材料和方法 2
1.1 试验材料 2
1.2 化学试剂 3
1.3 材料的取得及预处理 3
1.4 试验设计 3
1.4.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 3
1.4.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响 3
1.4.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响 3
1.4.4 不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响 3
2 结果和分析 4
2.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 4
2.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响 4
2.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响 5
2.4 不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响 5
3 讨论与小结 6
致谢 7
参考文献 7
3种十二卷属植物的离体培养条件研究
引言
百合科(Liliacece)十二卷属（Haworthia）植物，多原产南非东部，是一类小型多肉植物。叶片呈莲座状排列，叶组织非常肉质化，中间布满贮水组织，叶面常被白色斑点、条纹或疣状突起，叶缘常布有纤毛，叶片上部常呈透明状，有的呈明显的“窗”状结构，叶形变化丰富，其中的一些变种色彩丰富，具有较高的观赏价值，是多年来行业栽培者和众多的爱好者寻求的珍贵观赏种类[1]。但目前十二卷属植物多以叶片扦
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
插等方法繁殖，繁殖效率低，繁殖速度慢[2]，而组织培养技术繁殖系数高，速度快，但目前十二卷属部分种尚未建立高效繁殖体系，因此本试验以十二卷属3种多肉植物为材料，进行离体培养条件研究，为十二卷属多肉植物的规模化生产提供基础。
1 材料和方法
1.1 材料
本试验试验材料为十二卷属3种多肉植物，分别是Haworthia cooperi var. isabellae JDV93/84（水晶掌，编号JDV93/84）；Haworthia cymbiformis var. reddii MBB6567(厚叶莲花掌，编号MBB6567)； Haworthia magnifica var. splendens（美丽十二卷，青蟹寿）。
1.2 试剂与用品
配制培养基所用的试剂均为分析纯试剂，由大学所采购，其他试验用品为常规组织培养用品。
1.3 材料取得及预处理
材料选取成熟母株上春生花葶上部未开放花蕾的子房部位、花葶下部茎秆、叶片上表皮、茎表皮作为外植体。
选取试验材料后，流水冲洗10min，于超净工作台上用75%的乙醇冲洗30s，后置于1%NaClO溶液中，浸泡冲洗20min，最后再用无菌水冲洗45次，将残留液体冲刷干净后，切成1cm左右的小段，便得到无菌材料。
1.4 试验设计
除培养基比较外，本试验所有基本培养基均采用MS培养基，附加蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，pH5.8。培养环境条件：光照强度约为15003000Lux，光照时间为12h/d，培养温度为25±2℃。
1.4.1 不同部位的外植体对愈伤组织诱导的影响
本阶段试验选取MBB6567的花葶上部子房、花葶下部茎秆、叶片上表皮和茎表皮作为外植体。其中，花葶茎秆切成1cm小段，叶片上表皮和茎表皮均切为5*5mm片状。分别接种于启动培养基（MS+NAA 0.2 mg/L+6BA 2.0 +KT 1.0 ）[1]每种处理接种5瓶，每瓶接4段外植体，3次重复。在接种后的40d内，每2d观察一次，最后去除染菌死亡的部分，进行统计。
1.4.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿的花葶上部子房作为外植体，分别接种于不同蔗糖浓度的启动培养基（MS+NAA 0.2 +6BA 2.0 +KT 1.0 ），蔗糖浓度分别为15g/L、30g/L和45g/L，共3种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4段外植体，每组3次重复。接种40d后，观察愈伤组织诱导情况，并进行统计。
1.4.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿的愈伤组织作为材料，分别接种于①MS+6BA 1.5 +KT 0.5；②MS+6BA 1 +KT 0.5；③MS+6BA 1 +KT 1.0；④MS+6BA 0.5 +KT 1.0。观察不同6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响。4种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4块0.5*0.5mm的愈伤组织，每组3次重复。接种40d后，观察愈伤组织分化情况，并进行统计。
1.4.4 不同NAA浓度对三种植物继代增殖的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿已分化的芽作为材料，分别接种于①MS+NAA 0 +6BA 0.5 + KT 0.5；②MS+NAA 0.2 +6BA 0.5 + KT 0.5；③MS+NAA 0.4 +6BA 0.5 +KT 0.5；④MS+NAA 0.6+6BA 0.5 +KT 0.5。观察不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响。4种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4芽，每组3次重复。接种30d后，观察芽增殖情况，并进行统计。
2 结果和分析
2.1 不同外植体愈伤组织诱导差异
表1 不同外植体愈伤组织诱导的差异
Table 1 Effects of different explants on callus formation
注：同列内相同字母表示在0.05水平上差异不显著
Note: The same letter in the same column indicates there is so significant difference at 0.05 level.
外植体在接种10~15d后切口部分出现明显膨大，形成黄绿色疏松的小球状愈伤组织，2535d左右形成较大量的愈伤组织，增殖速度增快，周边可见淡绿色或无色愈伤组织长出，中心形成的绿色较深的愈伤组织（图1, A）。40d以后，周边无色愈伤组织增多，逐渐开始玻璃化坏死。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
1 材料和方法 2
1.1 试验材料 2
1.2 化学试剂 3
1.3 材料的取得及预处理 3
1.4 试验设计 3
1.4.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 3
1.4.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响 3
1.4.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响 3
1.4.4 不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响 3
2 结果和分析 4
2.1 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 4
2.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响 4
2.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响 5
2.4 不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响 5
3 讨论与小结 6
致谢 7
参考文献 7
3种十二卷属植物的离体培养条件研究
引言
百合科(Liliacece)十二卷属（Haworthia）植物，多原产南非东部，是一类小型多肉植物。叶片呈莲座状排列，叶组织非常肉质化，中间布满贮水组织，叶面常被白色斑点、条纹或疣状突起，叶缘常布有纤毛，叶片上部常呈透明状，有的呈明显的“窗”状结构，叶形变化丰富，其中的一些变种色彩丰富，具有较高的观赏价值，是多年来行业栽培者和众多的爱好者寻求的珍贵观赏种类[1]。但目前十二卷属植物多以叶片扦
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
插等方法繁殖，繁殖效率低，繁殖速度慢[2]，而组织培养技术繁殖系数高，速度快，但目前十二卷属部分种尚未建立高效繁殖体系，因此本试验以十二卷属3种多肉植物为材料，进行离体培养条件研究，为十二卷属多肉植物的规模化生产提供基础。
1 材料和方法
1.1 材料
本试验试验材料为十二卷属3种多肉植物，分别是Haworthia cooperi var. isabellae JDV93/84（水晶掌，编号JDV93/84）；Haworthia cymbiformis var. reddii MBB6567(厚叶莲花掌，编号MBB6567)； Haworthia magnifica var. splendens（美丽十二卷，青蟹寿）。
1.2 试剂与用品
配制培养基所用的试剂均为分析纯试剂，由大学所采购，其他试验用品为常规组织培养用品。
1.3 材料取得及预处理
材料选取成熟母株上春生花葶上部未开放花蕾的子房部位、花葶下部茎秆、叶片上表皮、茎表皮作为外植体。
选取试验材料后，流水冲洗10min，于超净工作台上用75%的乙醇冲洗30s，后置于1%NaClO溶液中，浸泡冲洗20min，最后再用无菌水冲洗45次，将残留液体冲刷干净后，切成1cm左右的小段，便得到无菌材料。
1.4 试验设计
除培养基比较外，本试验所有基本培养基均采用MS培养基，附加蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，pH5.8。培养环境条件：光照强度约为15003000Lux，光照时间为12h/d，培养温度为25±2℃。
1.4.1 不同部位的外植体对愈伤组织诱导的影响
本阶段试验选取MBB6567的花葶上部子房、花葶下部茎秆、叶片上表皮和茎表皮作为外植体。其中，花葶茎秆切成1cm小段，叶片上表皮和茎表皮均切为5*5mm片状。分别接种于启动培养基（MS+NAA 0.2 mg/L+6BA 2.0 +KT 1.0 ）[1]每种处理接种5瓶，每瓶接4段外植体，3次重复。在接种后的40d内，每2d观察一次，最后去除染菌死亡的部分，进行统计。
1.4.2 不同蔗糖浓度对3种植物愈伤组织诱导的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿的花葶上部子房作为外植体，分别接种于不同蔗糖浓度的启动培养基（MS+NAA 0.2 +6BA 2.0 +KT 1.0 ），蔗糖浓度分别为15g/L、30g/L和45g/L，共3种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4段外植体，每组3次重复。接种40d后，观察愈伤组织诱导情况，并进行统计。
1.4.3 6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿的愈伤组织作为材料，分别接种于①MS+6BA 1.5 +KT 0.5；②MS+6BA 1 +KT 0.5；③MS+6BA 1 +KT 1.0；④MS+6BA 0.5 +KT 1.0。观察不同6BA与KT浓度比值对3种植物愈伤组织分化的影响。4种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4块0.5*0.5mm的愈伤组织，每组3次重复。接种40d后，观察愈伤组织分化情况，并进行统计。
1.4.4 不同NAA浓度对三种植物继代增殖的影响
本阶段试验选取JDV93/84、MBB6567和青蟹寿已分化的芽作为材料，分别接种于①MS+NAA 0 +6BA 0.5 + KT 0.5；②MS+NAA 0.2 +6BA 0.5 + KT 0.5；③MS+NAA 0.4 +6BA 0.5 +KT 0.5；④MS+NAA 0.6+6BA 0.5 +KT 0.5。观察不同NAA浓度对3种植物继代增殖的影响。4种处理，每种处理接种4瓶，每瓶4芽，每组3次重复。接种30d后，观察芽增殖情况，并进行统计。
2 结果和分析
2.1 不同外植体愈伤组织诱导差异
表1 不同外植体愈伤组织诱导的差异
Table 1 Effects of different explants on callus formation
注：同列内相同字母表示在0.05水平上差异不显著
Note: The same letter in the same column indicates there is so significant difference at 0.05 level.
外植体在接种10~15d后切口部分出现明显膨大，形成黄绿色疏松的小球状愈伤组织，2535d左右形成较大量的愈伤组织，增殖速度增快，周边可见淡绿色或无色愈伤组织长出，中心形成的绿色较深的愈伤组织（图1, A）。40d以后，周边无色愈伤组织增多，逐渐开始玻璃化坏死。
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