木霉菌与病原菌定殖长期施不同肥料土壤效应研究
本文选取了南京地区黄瓜种植土壤与海南地区香蕉种植土壤，通过稀释涂布技术与荧光定量PCR技术，研究了木霉菌与病原菌短期和长期在有无土壤理化性质影响的条件下定殖不同肥料土壤能力。结果表明，相比于化肥土壤，有机肥土壤丰富的营养与复杂的微生物群落在短期内更有利于木霉菌的定殖并且可以有效抵御病原菌的入侵。而随着时间的延长，木霉菌在有机肥土壤中的定殖数量少于化肥土壤。此研究评估了不同肥力土壤应对有益菌与病原菌入侵的能力，为有益微生物有效定殖和土传病害防控提供理论支撑。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
实验材料 3
1.1.1 供试土壤 3
1.1.2 供试微生物 3
1.1.3 大田肥料处理 3
1.1.4 供试培养基 3
1.2 实验设计 3
1.2.1 土壤采集与预处理3
1.2.2 菌种的制备与培养3
1.2.3 孢子悬液的制备与计数3
1.2.4 功能菌与病原菌定殖的温室培养3
1.3 测定方法 3
1.3.1 土壤样品理化性质的测定3
1.3.2 土壤样品含水量的测定4
1.3.3 可培养绿色荧光标记木霉菌数量测定4
1.3.4 土壤微生物的测定4
1.4 数据分析 5
2 结果与分析5
2.1 土壤样品理化性质5
2.1.1 黄瓜土壤理化性质5
2.1.2 香蕉土壤理化性质5
2.2 木霉菌与病原菌短期定殖不同肥力土壤荧光定量PCR测定结果5
2.2.1 木霉菌短期定殖不同肥力土壤结果5
2.2.2 病原菌短期定殖不同肥力土壤结果6
2.3 绿色荧光标记木霉菌长期定殖不同地区不同肥力土壤涂布测定结果6
2.3.1 绿色荧光标记木霉菌定殖黄瓜土壤结果6
2.3.2 绿色荧光标记木霉菌定殖香蕉土壤结果7
2.4 绿色荧光标记木霉菌长期定殖不同地区不 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
同肥力土壤荧光定量PCR测定结果7
2.4.1 木霉菌定殖南京黄瓜土壤结果7
2.4.2 木霉菌定殖海南香蕉土壤结果8
3 讨论 8
致谢10
参考文献10
木霉菌与病原菌定殖长期施不同肥料土壤效应研究
引言
引言
木霉是一种土壤习居菌，在世界各地均有其分布。无论在何种温度、湿度和pH范围内，木霉的菌丝生长及孢子萌发都能够适应并且生长良好。木霉具有生长和繁殖快、腐生性也很强的特点，因而可快速的利用土壤中的营养物质并且占据土壤中的微生物生态位，成为优势种。木霉属(Trichoderma.spp)真菌，隶属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科，其有性阶段为子囊菌亚门(Ascomycotina)、肉座目(Hypocreaes)、肉座科(Hypocreaceae)、肉座菌属(Hypocrea)[1]。木霉常见于腐烂的木材和动物粪便上，也可以在种子、植物根围、植物病原菌、叶围及纤维质等自然生境中发现，甚至有报道称木霉也存在于不锈钢、柴油、合成橡胶及沥青等基质上。多年来，无论在学术研究或工农业生产中，木霉都引起广泛的关注。
近年来，在黄瓜的设施栽培中，土传枯萎病日趋严重，已成为黄瓜生产上最严重的病害之一。常年发病率为10%30%，严重时可达80%90%，甚至绝产，严重影响了黄瓜的产量和品质，并造成经济上的极大损失[2]。黄瓜枯萎病是一种真菌性的土传病害，其病原菌为半知菌亚门尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）[3]。
目前，已有大量的报道指出，木霉生物有机肥对黄瓜、豆类、番茄、马铃薯、棉花、水稻、花卉、牧草等多种作物都具有显著的促生作用，进而可以提高作物产量，达到高产。黄有凯等[4]经实验筛选出哈茨木霉突变菌株h13，研究发现，该菌株具有促生作用，可以促使作物高产，将其投入黄瓜大田试验后，发现喷施菌种发酵液于黄瓜幼苗，黄瓜幼苗可表现出促生效果，将该菌种发酵液稀释50倍后喷施于黄瓜幼苗，发现此时促生效果最为明显。陈伯清等[5]在实验中将木霉孢子悬液施于番茄幼苗根际，测定幼苗叶片中的叶绿素含量，发现叶绿素含量显著提高，并且对番茄幼苗生长情况进行监测，发现番茄幼苗生长良好，进而表明木霉孢子悬液可以有效促进番茄幼苗的生长。魏林等[6]在实验中将适宜浓度的木霉T216发酵产物施加于杂交水稻种子，测定水稻幼苗的光合作用，发现水稻幼苗的光合作用相比于未经木霉处理有所增强，进一步测定水稻植株体内的可溶性蛋白质含量，发现可溶性蛋白含量显著提高，经上述两项测定结果，表明木霉发酵产物可以促进植物生长。王慧中等[7]在研究中，制备含哈茨木霉菌液的有机菌肥，并将其施用于白菜和马铃薯的大田试验中，待作物成熟后，统计其产量，结果发现，与不经哈茨木霉的处理及常规的施肥处理相比，施用哈茨木霉菌液的有机菌肥可使白菜和马铃薯的产量显著提高。杨春林等[8]研究发现，木霉生物有机肥对番茄、黄瓜、白菜、芹菜、辣椒和菠菜等多种蔬菜具有较强的促生作用。
综合国内外对于木霉菌(Triehoderma spp.)生防的研究显示，木霉菌是一种广受关注的、广谱、高效的生防功能微生物，但是国内外关于木霉菌对于F. oxysporum引起的枯萎病的研究目前主要局限于单一的、人工接种环境中的生防效果，而且主要报道多为简单的生物学效果;生防菌剂针对不同的生态环境、不同的作物、不同发病机理采取不同的生防模式，如蘸根、叶面喷施、堆肥提取液强化，灌根、浸种、颗粒型生防菌剂等等[9]，但是木霉菌针对枯萎病生防的模式及其稳定、高效的产品的研发、生产等研究鲜有报道;对于木霉菌与病原菌的关系、木霉菌与植物的关系、木霉菌与土壤环境的关系等生防枯萎病的机理报道较少，黄瓜连作障碍土壤是个复杂的、微生物功能严重退化生态体系，其对黄瓜生产的威胁表现为大规模的土传枯萎病的发生，但是对于木霉菌定殖长期施不同肥料土壤的效应的研究很少。
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
实验材料 3
1.1.1 供试土壤 3
1.1.2 供试微生物 3
1.1.3 大田肥料处理 3
1.1.4 供试培养基 3
1.2 实验设计 3
1.2.1 土壤采集与预处理3
1.2.2 菌种的制备与培养3
1.2.3 孢子悬液的制备与计数3
1.2.4 功能菌与病原菌定殖的温室培养3
1.3 测定方法 3
1.3.1 土壤样品理化性质的测定3
1.3.2 土壤样品含水量的测定4
1.3.3 可培养绿色荧光标记木霉菌数量测定4
1.3.4 土壤微生物的测定4
1.4 数据分析 5
2 结果与分析5
2.1 土壤样品理化性质5
2.1.1 黄瓜土壤理化性质5
2.1.2 香蕉土壤理化性质5
2.2 木霉菌与病原菌短期定殖不同肥力土壤荧光定量PCR测定结果5
2.2.1 木霉菌短期定殖不同肥力土壤结果5
2.2.2 病原菌短期定殖不同肥力土壤结果6
2.3 绿色荧光标记木霉菌长期定殖不同地区不同肥力土壤涂布测定结果6
2.3.1 绿色荧光标记木霉菌定殖黄瓜土壤结果6
2.3.2 绿色荧光标记木霉菌定殖香蕉土壤结果7
2.4 绿色荧光标记木霉菌长期定殖不同地区不 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
同肥力土壤荧光定量PCR测定结果7
2.4.1 木霉菌定殖南京黄瓜土壤结果7
2.4.2 木霉菌定殖海南香蕉土壤结果8
3 讨论 8
致谢10
参考文献10
木霉菌与病原菌定殖长期施不同肥料土壤效应研究
引言
引言
木霉是一种土壤习居菌，在世界各地均有其分布。无论在何种温度、湿度和pH范围内，木霉的菌丝生长及孢子萌发都能够适应并且生长良好。木霉具有生长和繁殖快、腐生性也很强的特点，因而可快速的利用土壤中的营养物质并且占据土壤中的微生物生态位，成为优势种。木霉属(Trichoderma.spp)真菌，隶属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科，其有性阶段为子囊菌亚门(Ascomycotina)、肉座目(Hypocreaes)、肉座科(Hypocreaceae)、肉座菌属(Hypocrea)[1]。木霉常见于腐烂的木材和动物粪便上，也可以在种子、植物根围、植物病原菌、叶围及纤维质等自然生境中发现，甚至有报道称木霉也存在于不锈钢、柴油、合成橡胶及沥青等基质上。多年来，无论在学术研究或工农业生产中，木霉都引起广泛的关注。
近年来，在黄瓜的设施栽培中，土传枯萎病日趋严重，已成为黄瓜生产上最严重的病害之一。常年发病率为10%30%，严重时可达80%90%，甚至绝产，严重影响了黄瓜的产量和品质，并造成经济上的极大损失[2]。黄瓜枯萎病是一种真菌性的土传病害，其病原菌为半知菌亚门尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）[3]。
目前，已有大量的报道指出，木霉生物有机肥对黄瓜、豆类、番茄、马铃薯、棉花、水稻、花卉、牧草等多种作物都具有显著的促生作用，进而可以提高作物产量，达到高产。黄有凯等[4]经实验筛选出哈茨木霉突变菌株h13，研究发现，该菌株具有促生作用，可以促使作物高产，将其投入黄瓜大田试验后，发现喷施菌种发酵液于黄瓜幼苗，黄瓜幼苗可表现出促生效果，将该菌种发酵液稀释50倍后喷施于黄瓜幼苗，发现此时促生效果最为明显。陈伯清等[5]在实验中将木霉孢子悬液施于番茄幼苗根际，测定幼苗叶片中的叶绿素含量，发现叶绿素含量显著提高，并且对番茄幼苗生长情况进行监测，发现番茄幼苗生长良好，进而表明木霉孢子悬液可以有效促进番茄幼苗的生长。魏林等[6]在实验中将适宜浓度的木霉T216发酵产物施加于杂交水稻种子，测定水稻幼苗的光合作用，发现水稻幼苗的光合作用相比于未经木霉处理有所增强，进一步测定水稻植株体内的可溶性蛋白质含量，发现可溶性蛋白含量显著提高，经上述两项测定结果，表明木霉发酵产物可以促进植物生长。王慧中等[7]在研究中，制备含哈茨木霉菌液的有机菌肥，并将其施用于白菜和马铃薯的大田试验中，待作物成熟后，统计其产量，结果发现，与不经哈茨木霉的处理及常规的施肥处理相比，施用哈茨木霉菌液的有机菌肥可使白菜和马铃薯的产量显著提高。杨春林等[8]研究发现，木霉生物有机肥对番茄、黄瓜、白菜、芹菜、辣椒和菠菜等多种蔬菜具有较强的促生作用。
综合国内外对于木霉菌(Triehoderma spp.)生防的研究显示，木霉菌是一种广受关注的、广谱、高效的生防功能微生物，但是国内外关于木霉菌对于F. oxysporum引起的枯萎病的研究目前主要局限于单一的、人工接种环境中的生防效果，而且主要报道多为简单的生物学效果;生防菌剂针对不同的生态环境、不同的作物、不同发病机理采取不同的生防模式，如蘸根、叶面喷施、堆肥提取液强化，灌根、浸种、颗粒型生防菌剂等等[9]，但是木霉菌针对枯萎病生防的模式及其稳定、高效的产品的研发、生产等研究鲜有报道;对于木霉菌与病原菌的关系、木霉菌与植物的关系、木霉菌与土壤环境的关系等生防枯萎病的机理报道较少，黄瓜连作障碍土壤是个复杂的、微生物功能严重退化生态体系，其对黄瓜生产的威胁表现为大规模的土传枯萎病的发生，但是对于木霉菌定殖长期施不同肥料土壤的效应的研究很少。
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