土壤微生物总蛋白的提取纯化与分离鉴定
：元蛋白质组学的主要特征是能够提供群落微生物蛋白和功能多样性间的信息。元蛋白质组学分析的核心要素是蛋白质的提取、利用一维或二维电泳对蛋白质分离、结合质谱仪(MS)或串联质谱(MS-MS)对蛋白质鉴定、计算机图像分析与大规模数据处理。本实验分析不施肥（CK）、施NPK肥（NPK）两种处理中红壤水稻土中微生物蛋白质水平的变化。密度梯度离心法获取土样菌体蛋白量为：CK土样中提取的微生物总蛋白量较低，为0.4μg/g土；NPK中蛋白含量较高，为0.68μg/g土。通过SDS-PAGE能明显看出两种土样的蛋白差异性，蛋白主要集中在44.32KDa和92.7KDa 之间。质谱鉴定出两种不同处理土样中的三种共同蛋白，五种差异蛋白。三种共同蛋白分别为假想蛋白FAEPRAM212_02949，噬菌体前头部蛋白酶HK97家族，谷氨酸合酶NADH/NADPH小亚基，差异蛋白分别为转录调控因子GntR家族，类似于AFG1的ATP酶，外膜蛋白A，依赖于ATP的解旋酶以及双功能酶：乌头酸水合酶， Mg相关螯合酶蛋白；其中4号点结果鉴定为混合蛋白。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 3
1.1 研究区域概况及土壤样品采集 3
1.1.1研究区域概况 3
1.1.2土壤样品采集 3
1.2 主要仪器和试剂 3
1.2.1仪器 3
1.2.2试剂 3
1.3 利用密度梯度离心法提取土壤中的菌体 3
1.4土壤微生物总蛋白提取及纯化 4
1.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析 4
1.5.1 样品的处理 4
1.5.2 聚丙烯酰胺凝胶的灌制 4
1.6 蛋白质双向凝胶电泳 5
1.6.1固相梯度等电聚焦电泳及平衡 5
1.6.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳 5
1.6.3 银染 6
1.6.4 图像采集及图谱分析 6
1.7 质谱
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
分析 6
1.7.1 蛋白质点酶切 6
1.7.2 质谱样品点样 6
1.8 数据库查询 7
2．结果与分析 7
2.1 土壤微生物总蛋白提取及纯化 7
2.2 SDSPAGE 8
2.3 2DPAGE 8
2.4 凝胶图像扫描及软件分析比较 9
2.5 蛋白质肽质量指纹图谱 11
3.讨论 15
致谢 15
参考文献 16
土壤微生物总蛋白的提取纯化与分离鉴定
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 3
1.1 研究区域概况及土壤样品采集 3
1.1.1研究区域概况 3
1.1.2土壤样品采集 3
1.2 主要仪器和试剂 3
1.2.1仪器 3
1.2.2试剂 3
1.3 利用密度梯度离心法提取土壤中的菌体 3
1.4土壤微生物总蛋白提取及纯化 4
1.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析 4
1.5.1 样品的处理 4
1.5.2 聚丙烯酰胺凝胶的灌制 4
1.6 蛋白质双向凝胶电泳 5
1.6.1固相梯度等电聚焦电泳及平衡 5
1.6.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳 5
1.6.3 银染 6
1.6.4 图像采集及图谱分析 6
1.7 质谱
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分析 6
1.7.1 蛋白质点酶切 6
1.7.2 质谱样品点样 6
1.8 数据库查询 7
2．结果与分析 7
2.1 土壤微生物总蛋白提取及纯化 7
2.2 SDSPAGE 8
2.3 2DPAGE 8
2.4 凝胶图像扫描及软件分析比较 9
2.5 蛋白质肽质量指纹图谱 11
3.讨论 15
致谢 15
参考文献 16
土壤微生物总蛋白的提取纯化与分离鉴定
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