葡萄rs基因的克隆序列分析及时空表达特征鉴定
【目的】从‘巨峰’葡萄中克隆白藜芦醇合酶基因Rs，对其序列进行结构及功能分析，并鉴定其在果实不同发育时期的时空表达特异性。【方法】利用CTAB法提取葡萄总RNA，采用RT-PCR技术克隆Rs基因，借助qRT-PCR技术对其表达量进行分析。利用生物信息学工具对其核酸及蛋白质序列进行分析。【结果】克隆出的Rs基因cDNA序列全长1247bp，有一个长度1179bp的开放阅读框（ORF）；该基因含有查耳酮和二苯乙烯合酶活性位点以及完整的茋合酶家族特征位点。qRT-PCR检测结果表明，Rs基因在‘巨峰’葡萄花后25d的青皮中相对表达量最高。【结论】本研究克隆出了Rs基因，并对其进行序列结构分析，鉴定了其时空表达特异性，为进一步认识Rs基因在白藜芦醇代谢过程中的作用奠定了基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1．1．1 植物材料 2
1．1．2 菌株和载体 2
1．1．3 酶及生化试剂 2
1．1．4 引物与测序 2
1．1．5 培养基 2
1．1．6 主要仪器与设备 2
1．1．7 生物信息学分析 3
1．2 方法 3
1．2．1 葡萄基因组总RNA的提取及cDNA合成 3
1．2．2 目的基因的分子克隆 3
1．2．3 基因的生物信息学分析 3
1．2．4 基因表达特异性分析 3
1．2．5 葡萄皮愈伤组织的诱导与培养 4
1．2．6 细菌转化方法 4
2 结果与分析 4
2．1 葡萄基因组总RNA的提取及cDNA合成 4
2．2 目的基因的克隆 5
2．2．1 基因克隆结果 5
2．2．2 遗传转化结果 5
2．2．3 双酶切结果 6
2．3 基因的生物信息学分析 6
2．3．1 Motif分析 6
2．3．2 基因结构分析 7 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2．3．3 蛋白质理化性质及氨基酸组成分析 7
2．3．4 二级结构预测 7
2．3．5 结构域分析 8
2．4 基因的表达特异性分析 9
2．5 葡萄皮愈伤组织的诱导与培养 9
2．5．1 不同材料愈伤组织的诱导情况 9
2．5．2 不同接种方式对愈伤组织诱导的影响 9
2．5．3 不同光照条件对愈伤组织生长的影响 10
2．5．4 受体愈伤组织的选择 10
3 讨论 10
致谢 11
参考文献 11
表1 葡萄Rs基因基本信息..............................................7
表2 RS蛋白理化性质.............................................7
表3 RS蛋白二级结构预测.........................................7
表4 不同材料愈伤组织生长情况..........................................9
图 1 植物材料............................................................2
图 2 葡萄果皮总RNA电泳图................................................5
图 3 葡萄内参基因的标定..................................................5
图 4 葡萄白藜芦醇合酶基因的PCR扩增......................................5
图 5 菌液、质粒电泳检测..................................................6
图 6 基因、载体双酶切检测... ............................................6
图 7 葡萄白藜芦醇合酶基因motif分析......................................6
图 8 葡萄白藜芦醇合酶基因编码蛋白二级结构分布图..........................7
图 9 葡萄Rs基因cDNA序列和预测的氨基酸序列..............................8
图 10 葡萄品种‘巨峰’不同组织和不同生长发育阶段中Rs基因相对表达量的比较. ...9
图 11 葡萄果皮愈伤组织的诱导与培养........................................10
图 12 作为受体材料的愈伤组织..............................................10
葡萄Rs基因的克隆、序列分析及时空表达特征鉴定
引言
白藜芦醇（Resveratrol 简称Res）又称白藜三醇，化学名称为3，4’，5–三羟基–1，2–二苯乙烯（3，4’，5trihydroxystilbene）[1]，分子式C14H12O3，相对分子质量228.25，是植物体内天然二苯乙烯类多酚物质，在植物代谢中为次生代谢产物[2]。它是植物体在恶劣环境下或遇到病原害时自身分泌的一种抗毒素[3]。另外，它还具有许多医疗保健作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、抗细菌和真菌、防止人体低密度脂蛋白（LDP）氧化等。因此，Res 已成为科学家们高度重视的天然活性成分[4]。目前，很多国家和地区都开发生产了Res及其制品并应用于食品、医疗保健品和化妆品等领域。比如，日本将Res作为食品添加剂，美国将Res纳入膳食补充剂，我国也将Res制成了天然保健食品[57]。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract. 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料 2
1．1．1 植物材料 2
1．1．2 菌株和载体 2
1．1．3 酶及生化试剂 2
1．1．4 引物与测序 2
1．1．5 培养基 2
1．1．6 主要仪器与设备 2
1．1．7 生物信息学分析 3
1．2 方法 3
1．2．1 葡萄基因组总RNA的提取及cDNA合成 3
1．2．2 目的基因的分子克隆 3
1．2．3 基因的生物信息学分析 3
1．2．4 基因表达特异性分析 3
1．2．5 葡萄皮愈伤组织的诱导与培养 4
1．2．6 细菌转化方法 4
2 结果与分析 4
2．1 葡萄基因组总RNA的提取及cDNA合成 4
2．2 目的基因的克隆 5
2．2．1 基因克隆结果 5
2．2．2 遗传转化结果 5
2．2．3 双酶切结果 6
2．3 基因的生物信息学分析 6
2．3．1 Motif分析 6
2．3．2 基因结构分析 7 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2．3．3 蛋白质理化性质及氨基酸组成分析 7
2．3．4 二级结构预测 7
2．3．5 结构域分析 8
2．4 基因的表达特异性分析 9
2．5 葡萄皮愈伤组织的诱导与培养 9
2．5．1 不同材料愈伤组织的诱导情况 9
2．5．2 不同接种方式对愈伤组织诱导的影响 9
2．5．3 不同光照条件对愈伤组织生长的影响 10
2．5．4 受体愈伤组织的选择 10
3 讨论 10
致谢 11
参考文献 11
表1 葡萄Rs基因基本信息..............................................7
表2 RS蛋白理化性质.............................................7
表3 RS蛋白二级结构预测.........................................7
表4 不同材料愈伤组织生长情况..........................................9
图 1 植物材料............................................................2
图 2 葡萄果皮总RNA电泳图................................................5
图 3 葡萄内参基因的标定..................................................5
图 4 葡萄白藜芦醇合酶基因的PCR扩增......................................5
图 5 菌液、质粒电泳检测..................................................6
图 6 基因、载体双酶切检测... ............................................6
图 7 葡萄白藜芦醇合酶基因motif分析......................................6
图 8 葡萄白藜芦醇合酶基因编码蛋白二级结构分布图..........................7
图 9 葡萄Rs基因cDNA序列和预测的氨基酸序列..............................8
图 10 葡萄品种‘巨峰’不同组织和不同生长发育阶段中Rs基因相对表达量的比较. ...9
图 11 葡萄果皮愈伤组织的诱导与培养........................................10
图 12 作为受体材料的愈伤组织..............................................10
葡萄Rs基因的克隆、序列分析及时空表达特征鉴定
引言
白藜芦醇（Resveratrol 简称Res）又称白藜三醇，化学名称为3，4’，5–三羟基–1，2–二苯乙烯（3，4’，5trihydroxystilbene）[1]，分子式C14H12O3，相对分子质量228.25，是植物体内天然二苯乙烯类多酚物质，在植物代谢中为次生代谢产物[2]。它是植物体在恶劣环境下或遇到病原害时自身分泌的一种抗毒素[3]。另外，它还具有许多医疗保健作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、抗细菌和真菌、防止人体低密度脂蛋白（LDP）氧化等。因此，Res 已成为科学家们高度重视的天然活性成分[4]。目前，很多国家和地区都开发生产了Res及其制品并应用于食品、医疗保健品和化妆品等领域。比如，日本将Res作为食品添加剂，美国将Res纳入膳食补充剂，我国也将Res制成了天然保健食品[57]。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/nongxue/yy/154.html
