PKM2翻译后修饰的鉴定
PKM2翻译后修饰的鉴定[20200614171432]
摘要：丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase，PK）作为催化糖酵解途径中最后一步反应的关键酶，在肿瘤细胞代谢及生长中起着至关重要的作用。它在人体内有4种异构体：R、L、M1和M2型，M2型（即PKM2）特异高表达于胚胎及成体干细胞。蛋白质翻译后修饰在维持蛋白质的功能，调节细胞内的信号传导以及大量其他重要的细胞生命活动过程中发挥着关键性的作用。PKM2的丙酮酸激酶活性受外界环境和蛋白质翻译后修饰调控。本研究利用免疫沉淀、胶内酶解、质谱等技术鉴定出PKM2上存在17个磷酸化修饰位点，10个乙酰化修饰位点，1个甲基化修饰位点，这为进一步研究各种修饰的生物学效应及其交互应答奠定了良好的基础。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
关键字:PKM2；蛋白质翻译后修饰；交互应答
目录
摘要 I
Abstract I
缩略语 II
1 引言 1
1.1 PKM2 1
1.2 PKM2蛋白质翻译后修饰 1
1.3 蛋白质翻译后修饰间交互应答 2
2 材料与方法 3
2.1 材料 3
2.1.1 细胞株 3
2.1.2 真核表达载体 3
2.1.3 主要试剂 3
2.1.4 仪器设备 3
2.2 方法 5
2.2.1 细胞培养 5
2.2.2 质粒构建 5
2.2.3 质粒小量抽提 9
2.2.4 细胞转染 9
2.2.5 蛋白收集 10
2.2.6 Western Blot 10
2.2.7 免疫沉淀 10
2.2.8 考染 10
2.2.9 胶内酶解 10
2.2.10 质谱鉴定 11
3 结果 11
3.1 真核表达载体 11
3.2 双酶切琼脂糖凝胶电泳 12
3.3 质粒测序 12
3.4 PKM2蛋白的表达 12
3.5 免疫沉淀 13
3.6 质谱鉴定 14
4 讨论 15
致谢 16
参考文献 16
PKM2翻译后修饰的鉴定
摘要：丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase，PK）作为催化糖酵解途径中最后一步反应的关键酶，在肿瘤细胞代谢及生长中起着至关重要的作用。它在人体内有4种异构体：R、L、M1和M2型，M2型（即PKM2）特异高表达于胚胎及成体干细胞。蛋白质翻译后修饰在维持蛋白质的功能，调节细胞内的信号传导以及大量其他重要的细胞生命活动过程中发挥着关键性的作用。PKM2的丙酮酸激酶活性受外界环境和蛋白质翻译后修饰调控。本研究利用免疫沉淀、胶内酶解、质谱等技术鉴定出PKM2上存在17个磷酸化修饰位点，10个乙酰化修饰位点，1个甲基化修饰位点，这为进一步研究各种修饰的生物学效应及其交互应答奠定了良好的基础。
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关键字:PKM2；蛋白质翻译后修饰；交互应答
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摘要 I
Abstract I
缩略语 II
1 引言 1
1.1 PKM2 1
1.2 PKM2蛋白质翻译后修饰 1
1.3 蛋白质翻译后修饰间交互应答 2
2 材料与方法 3
2.1 材料 3
2.1.1 细胞株 3
2.1.2 真核表达载体 3
2.1.3 主要试剂 3
2.1.4 仪器设备 3
2.2 方法 5
2.2.1 细胞培养 5
2.2.2 质粒构建 5
2.2.3 质粒小量抽提 9
2.2.4 细胞转染 9
2.2.5 蛋白收集 10
2.2.6 Western Blot 10
2.2.7 免疫沉淀 10
2.2.8 考染 10
2.2.9 胶内酶解 10
2.2.10 质谱鉴定 11
3 结果 11
3.1 真核表达载体 11
3.2 双酶切琼脂糖凝胶电泳 12
3.3 质粒测序 12
3.4 PKM2蛋白的表达 12
3.5 免疫沉淀 13
3.6 质谱鉴定 14
4 讨论 15
致谢 16
参考文献 16
PKM2翻译后修饰的鉴定
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