堆肥菌株a.fumigatusz5多糖单加氧酶促进木质纤维素分解机制研究(附件)
裂解多单加氧酶（Lytic polysaccharide monooxygenases，LPMOs）是一种新型的辅助类活性酶，在近十年左右一直成为人们研究的热点。本研究以一株高效降解纤维素的堆肥菌烟曲霉Z5 （A. fumigatus Z5）为材料，研究其基因组中的功能模块完整的LPMOs蛋白(PMO-5)。先通过大肠杆菌外源表达得到了PMO-5, 再结合计算生物学，同源模拟得到了PMO-5的三维结构，随后又进行了多种验证，表明所得三维结构的稳定性。接着又预测了PMO-5与Cu2+的结合位点，以纤维六糖为底物进行了蛋白对接，得到PMO-5与底物结合的活性位点。预测PMO-5与Cu2+的结合位点是His1、His86和Tyr175；PMO-5与底物结合的活性位点是Thr144、Ile221和Tyr219。最后以计算生物学结论为基础运用等温滴定量热法，证明了LPMOs与Cu2+是结合的，LPMOs是铜离子依赖型辅酶。
目录
0 引言 2
1. 材料与方法 3
1.1 材料 3
1.1.1 菌株 3
1.1.2 培养基 3
1.1.3 载体和试剂 4
1.1.4 实验仪器 4
1.2 实验方法 4
1.2.1 PMO5蛋白的原核表达载体的构建 4
1.2.2 PMO5蛋白的表达与纯化 6
1.2.3 三维结构预测以及检验 6
1.2.4 活性位点的预测 7
1.2.5 金属离子活性中心的检测 8
2 结果与分析 8
2.1 PMO5蛋白的基本信息 8
2.2 三维结构预测分析 9
2.3蛋白质结构检验以及活性位点预测 11
2.3.1 VERIFY3D检测结果 11
2.3.2 PROCHECK检测以及EERAT评估 11
2.3.4 活性位点预测结果 12
2.4 铜离子依赖型蛋白验证结果分析 13
3 讨论： 14
3.1真菌中LPMOs蛋白的研究进展 14
3.2 研究展望 15
致谢 16
参考文 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
献 17 堆肥菌株A.fumigatus Z5多糖单加氧酶
促进木质纤维素分解机制研究
农业资源与环境 王权
目录
0 引言 2
1. 材料与方法 3
1.1 材料 3
1.1.1 菌株 3
1.1.2 培养基 3
1.1.3 载体和试剂 4
1.1.4 实验仪器 4
1.2 实验方法 4
1.2.1 PMO5蛋白的原核表达载体的构建 4
1.2.2 PMO5蛋白的表达与纯化 6
1.2.3 三维结构预测以及检验 6
1.2.4 活性位点的预测 7
1.2.5 金属离子活性中心的检测 8
2 结果与分析 8
2.1 PMO5蛋白的基本信息 8
2.2 三维结构预测分析 9
2.3蛋白质结构检验以及活性位点预测 11
2.3.1 VERIFY3D检测结果 11
2.3.2 PROCHECK检测以及EERAT评估 11
2.3.4 活性位点预测结果 12
2.4 铜离子依赖型蛋白验证结果分析 13
3 讨论： 14
3.1真菌中LPMOs蛋白的研究进展 14
3.2 研究展望 15
致谢 16
参考文 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
献 17 堆肥菌株A.fumigatus Z5多糖单加氧酶
促进木质纤维素分解机制研究
农业资源与环境 王权
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