双角螺旋线虫扫描电镜观察
双角螺旋线虫扫描电镜观察
郑炜(北仑出入境检验检疫局,浙江宁波IIII.VVIII00)
摘要:采用扫描电镜观察双角螺旋线虫.对来自浙江长兴的双角螺旋线虫进行了扫描电镜观察,对光镜下的形态结构进行了确认.采用戊II醛－锇酸双固定及临界点干燥制备的线虫样本,虫体不皱缩,不变形,形态结构清晰,能够很好地进行扫描电镜观察.对研究和防治双角螺旋线虫提供的作用.
关键字:双角螺旋线虫;形态特征;
双角螺旋线虫属于垫刃目.纽带线虫科.螺旋属.这种线虫发生普遍,取食范围极为广泛.主要在植物根部外寄生,偶尔会侵入根内,被为害的根部呈现许多黑斑点,能造成植物地上部生长发育受阻,严重时导致死亡.国内外对该属线虫的报道较多,主要集中在光学显微镜的形态学观察,目前尚未见对双角螺旋线虫的扫描电镜观察.因此,作者对双角螺旋线虫进行了扫描电镜观察,旨在为研究和防治双角螺旋线虫提供参考.
I.材料与方法
I..I.材料
PBS缓冲液.II.V%戊II醛.锇酸,乙醇,乙酸异戊酯.Eppendorf管.解剖针.刀片.酒精灯.滤纸.体视显微镜.扫描电镜等.
I..II方法
I..II.I.线虫样本的采集,从浙江长兴青梅的根围土壤中采集双角螺旋线虫,并取根的样品,装入封口袋,做好标签.
I..II.II线虫的分离和固定.采用Brown等的分筛法［VII］并稍加改良,结合浅盘法或漏斗法进行分离.收集到的线虫样品经温热杀死后,对其采用FG固定液固定.在体式显微镜下挑取I.定量的线虫,制成临时玻片和永久玻片,在光学显微镜下拍照,并测量.
I..II.III电镜样品的制备.主要步骤如下:①取I.个I..VmlEppendorf管,剪掉盖及底部,并用线虫滤纸封闭其口径较大的I.端,直立置于I.个大皿内;②将经杀死固定后的线虫浓缩液转移至 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
Eppendorf管底部的滤纸上;③于皿内加入适量PBS缓冲液冲洗I.0～I.Vmin后,将PBS缓冲液吸干,III次重复;④加入II．V%戊II醛,IV℃过夜;⑤重复步骤③;⑥加入锇酸固定IIh;⑦重复步骤③;⑧乙醇梯度脱水,浓度分别为III0%.V0%.VII0%.IX0%.IXV%和I.00%,其中I.00%浓度洗III次,每次I.0～I.Vmin;⑨乙酸异戊酯系列置换,浓度分别为III0%.V0%.VII0%.IX0%.IXV%和I.00%,其中I.00%浓度洗III次,每次I.0～I.Vmin;⑩临界点干燥,挑取线虫喷金,观察.
II结果与分析
II.I.线虫测量结果雌虫(n=IV):L=(VIIVIIX.VI±I.IIVIII.I.)μm;a=IIVI.VII±0.III;b’=V．II±0．IV;c=IIIVI．IX±VII．II;c’=I..II±0．II;V=VIIII.I.±III.V;O=VVII.IX±III.IX;ST=(IIIII．III±0.II)μm.雄虫:未见.
II.II线虫形态特征雌虫热杀死后,虫体呈松螺旋形,体环纹明显,侧线IV条.唇区连续,具III～V个唇环,唇端平;口针强壮,基部球前缘平或稍凹;中食道球卵圆或圆形,食道腺从腹面或侧面覆盖肠前端.排泄孔位于神经环后附近水平处,半月体位于排泄孔前0～III个体环处.双卵巢;受精囊偏离子宫轴线,无精子.侧尾腺口位于肛门前0～V个体环处.尾近圆锥形到近圆筒形,尾背面呈较大的弧度,末端有环纹,有或无尾腹突,尾腹环V～I.I.个.
III结论
(I.)国内对双角螺旋线虫进行了多次报道.作者以双角螺旋线虫为样本,首次对其进行了扫描电镜观察,对光镜下的形态结构进行了确认.扫描电镜的形态观察更为立体和直观.
(II)线虫的头部和尾部的形态特征是线虫分类的重要依据.但由于线虫的个体微小,光镜下有些细微结构观察较为困难,扫描电镜技术的应用为线虫的分类学研究提供了I.个有效工具.而采用戊II醛－锇酸双固定及临界点干燥方法制备的线虫样本,虫体不皱缩,不变形,形态结构清晰,能够很好地进行扫描电镜观察.
郑炜(北仑出入境检验检疫局,浙江宁波IIII.VVIII00)
摘要:采用扫描电镜观察双角螺旋线虫.对来自浙江长兴的双角螺旋线虫进行了扫描电镜观察,对光镜下的形态结构进行了确认.采用戊II醛－锇酸双固定及临界点干燥制备的线虫样本,虫体不皱缩,不变形,形态结构清晰,能够很好地进行扫描电镜观察.对研究和防治双角螺旋线虫提供的作用.
关键字:双角螺旋线虫;形态特征;
双角螺旋线虫属于垫刃目.纽带线虫科.螺旋属.这种线虫发生普遍,取食范围极为广泛.主要在植物根部外寄生,偶尔会侵入根内,被为害的根部呈现许多黑斑点,能造成植物地上部生长发育受阻,严重时导致死亡.国内外对该属线虫的报道较多,主要集中在光学显微镜的形态学观察,目前尚未见对双角螺旋线虫的扫描电镜观察.因此,作者对双角螺旋线虫进行了扫描电镜观察,旨在为研究和防治双角螺旋线虫提供参考.
I.材料与方法
I..I.材料
PBS缓冲液.II.V%戊II醛.锇酸,乙醇,乙酸异戊酯.Eppendorf管.解剖针.刀片.酒精灯.滤纸.体视显微镜.扫描电镜等.
I..II方法
I..II.I.线虫样本的采集,从浙江长兴青梅的根围土壤中采集双角螺旋线虫,并取根的样品,装入封口袋,做好标签.
I..II.II线虫的分离和固定.采用Brown等的分筛法［VII］并稍加改良,结合浅盘法或漏斗法进行分离.收集到的线虫样品经温热杀死后,对其采用FG固定液固定.在体式显微镜下挑取I.定量的线虫,制成临时玻片和永久玻片,在光学显微镜下拍照,并测量.
I..II.III电镜样品的制备.主要步骤如下:①取I.个I..VmlEppendorf管,剪掉盖及底部,并用线虫滤纸封闭其口径较大的I.端,直立置于I.个大皿内;②将经杀死固定后的线虫浓缩液转移至 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
Eppendorf管底部的滤纸上;③于皿内加入适量PBS缓冲液冲洗I.0～I.Vmin后,将PBS缓冲液吸干,III次重复;④加入II．V%戊II醛,IV℃过夜;⑤重复步骤③;⑥加入锇酸固定IIh;⑦重复步骤③;⑧乙醇梯度脱水,浓度分别为III0%.V0%.VII0%.IX0%.IXV%和I.00%,其中I.00%浓度洗III次,每次I.0～I.Vmin;⑨乙酸异戊酯系列置换,浓度分别为III0%.V0%.VII0%.IX0%.IXV%和I.00%,其中I.00%浓度洗III次,每次I.0～I.Vmin;⑩临界点干燥,挑取线虫喷金,观察.
II结果与分析
II.I.线虫测量结果雌虫(n=IV):L=(VIIVIIX.VI±I.IIVIII.I.)μm;a=IIVI.VII±0.III;b’=V．II±0．IV;c=IIIVI．IX±VII．II;c’=I..II±0．II;V=VIIII.I.±III.V;O=VVII.IX±III.IX;ST=(IIIII．III±0.II)μm.雄虫:未见.
II.II线虫形态特征雌虫热杀死后,虫体呈松螺旋形,体环纹明显,侧线IV条.唇区连续,具III～V个唇环,唇端平;口针强壮,基部球前缘平或稍凹;中食道球卵圆或圆形,食道腺从腹面或侧面覆盖肠前端.排泄孔位于神经环后附近水平处,半月体位于排泄孔前0～III个体环处.双卵巢;受精囊偏离子宫轴线,无精子.侧尾腺口位于肛门前0～V个体环处.尾近圆锥形到近圆筒形,尾背面呈较大的弧度,末端有环纹,有或无尾腹突,尾腹环V～I.I.个.
III结论
(I.)国内对双角螺旋线虫进行了多次报道.作者以双角螺旋线虫为样本,首次对其进行了扫描电镜观察,对光镜下的形态结构进行了确认.扫描电镜的形态观察更为立体和直观.
(II)线虫的头部和尾部的形态特征是线虫分类的重要依据.但由于线虫的个体微小,光镜下有些细微结构观察较为困难,扫描电镜技术的应用为线虫的分类学研究提供了I.个有效工具.而采用戊II醛－锇酸双固定及临界点干燥方法制备的线虫样本,虫体不皱缩,不变形,形态结构清晰,能够很好地进行扫描电镜观察.
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